LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

DETERMINACIÓN DE ACETAMINOFÉN EN UN FÁRMACO POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE

ABSORCIÓN ULTRAVIOLETA.

Valentina Rodríguez (1726622), Huber Ipia (1727760)

stephania.rodriguez@correounivalle.edu.co, huber.ipia@correounivalle.edu.co
Presentado a: Harold Díaz Segura
Febrero 27 de 2020, Programa de Química – Universidad del Valle

Palabras clave: Acetaminofén, Ultravioleta, Curva de Calibración, Matriz,

Resumen.
En esta práctica se determinó el contenido de acetaminofén en una muestra representativa de dos tabletas por
espectroscopía de absorción molecular en la región del ultravioleta-visible. La cuantificación se realizó mediante el
método por patrón externo arrojando un valor de (488.65 ± 0.33) mg y un porcentaje de error de 2.27, por otro lado, se
obtuvo un valor de (581.41 ± 0.42) mg y un porcentaje de error del 16.3 para el método de adición estándar. Se concluye
que, la determinación cuantitativa de acetaminofén por esta técnica es precisa y sensible y no existe interferencia por
efectos de matriz en las mediciones, por lo que el método por patrón externo es el indicado para el análisis.

Resultados. Tabla 1. Datos de la concentración y absorbancia de los

estándares y la muestra.
En primer lugar, para seleccionar la longitud de onda de Concentración Absorbancia
máxima absorbancia en la cuantificación de 4,00 0,258
acetaminofén, se realizó un barrido espectral de una 8,00 0,515
solución estándar de 4 ppm de acetaminofén analítico, 12,00 0,787
obteniendo un valor de 242.0 nm como se aprecia en la 16,00 1,078
gráfica 1. 24,00 1,559
𝑥̅ 12.80 0.8394
Muestra
10,60 0,695

A partir de las mediciones de absorbancia de cada

solución estándar, se realizó la gráfica para poder
determinar la ecuación de la recta y aplicar el
tratamiento estadístico al conjunto de datos
experimentales.
Gráfica 1. Longitud de onda de máxima absorbancia
del acetaminofén.
Método por patrón externo.
Posteriormente, a partir de una solución madre de 200
ppm de acetaminofén analítico, se prepararon 5
soluciones estándar de 4.00, 8.00, 12.00, 16.00 y 24.00
ppm con el fin de elaborar dos curvas de calibración. A
continuación se relacionan los datos para realizar la Gráfica 2. Curva de calibración por patrón externo.
curva de calibración por patrón externo.
De acuerdo a la linealidad determinada por el análisis de Intervalo de confianza al 95%.
regresión, se calculó la concentración de acetaminofén
𝐼𝑐 = 𝑋𝑜 ± 𝑡 (𝑆𝑥𝑜 ) 𝑡 = 2.35 = 𝑛 − 2 (95%) [Ecu 3]
en la muestra de la siguiente forma.
𝐼𝑐 = (488.65 ± 0.778) mg
y = 0,0656[Acetaminofén mg/L] - 0,0005 [Ecu 1]
0.695+ 0.0005
[𝐴𝑐𝑒𝑡] = 0.0656
= 10.602 𝑚𝑔/𝐿 Método de adición estándar.

10.602 𝑚𝑔 50𝑚𝐿 100𝑚𝐿 En segundo lugar, se elaboró la curva de calibración por

× × 20.1 𝑚𝑔 × adición estándar preparando 5 soluciónes patrón del
1000 𝑚𝐿 3 𝑚𝐿 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
555.83 𝑚𝑔 𝐴𝑐𝑒𝑡 rango de concentración de 0, 4.00, 8.00, 16.00, 24.00
= 488.65 mg 𝐴𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛.
𝑇𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎
ppm. Los datos experimentales se relacionan en la
Además, se halló el porcentaje de error a partir del valor siguiente tabla.
conocido de acetaminofén de la tableta el cual se reporta
Tabla 3. Datos de la concentración y absorbancia de los
en la caja (500 mg).
estándar y de la muestra.
488.65 − 500 # Concentración Absorbancia
%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | 𝑥100 = 2.27 1 0 0,017
500
2 4 0,276
Tabla 2. Parámetros estadísticos para el análisis 3 8 0,534
cuantitativo. 4 16 1,112
Variable Valor 5 24 1,585
Pendiente 0,06561824 𝑥̅ 10,4 0,7048
0,00127712 Muestra
0,00272027 1 0,25227 0,0167
intercepto -0,00051351
0,01856004 A continuación, se gráfica la concentración vs la
0,03953289 absorbancia para posteriormente realizar la regresión
0,9984865 lineal.
0,01965273
236,8
1,0207612
241,716252
𝑡 3,46851105
LOD 0.32827
LOQ 2.82848
Tteórico =1,86
Gráfico 3. Curva de adición estándar.
Teniendo en cuenta algunos datos estadísticos se puede
Con la ecuación de la recta del segundo método, se
calcular la desviación de la concentración la cual es
calculó la concentración de acetaminofén en la muestra.
importante para hacer el reporte analítico. Al igual que el
intervalo de confianza para el análisis posterior. y = 0,0662[Acetaminofén mg/L] + 0,0167 [Ecu 4]
Desviación estándar de la concentración. 0= 0,0662[Acetaminofén mg/L] + 0,0167
𝑠𝑟 1
√ 1 𝑦𝑜 −𝑦 2 1 0.0167𝑎𝑏𝑠
𝑠𝑥𝑜 = 𝑏 𝑚
+𝑛+( 𝑏
) × 𝑠𝑥𝑥 [Ecu 2] [𝐴𝑐𝑒𝑡] = = 0.2523 𝑚𝑔
𝑎𝑏𝑠
0.0662
𝑠𝑥𝑜 = 0.32827 mg 𝑚𝑔. 𝐿−1
 0.2523 𝑚𝑔 25 𝑚𝐿 50𝑚𝐿 100𝑚𝐿 El paracetamol consiste en un núcleo de anillo de
𝑥 𝑥 ×
1000 𝑚𝐿 0.5 𝑚𝐿 3 𝑚𝐿 20.1 𝑚𝑔 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 benceno, sustituido por un grupo hidroxilo y un átomo
555.83 𝑚𝑔 𝐴𝑐𝑒𝑡 de nitrógeno de un grupo amida en la posición para2.
×
𝑇𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎
= 581.41 mg 𝐴𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
581.41−500
%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | 500
| 𝑥100 = 16.3

Tabla 4. Parámetros estadísticos para el análisis

cuantitativo.
Variable Valor
Imagen 1. Estructura química del paracetamol
Pendiente 0,06615948
0,0013075 De acuerdo a lo anterior, la mayoría de las aplicaciones
0,002784973 de espectroscopía de absorción en compuestos orgánicos
intercepto 0,0167413 se basan en transiciones de los electrones n y π al estado
excitado π* porque la energía requerida para estos
0,0176585
procesos lleva las bandas de absorción hacia dentro de la
0,0376126
región ultravioleta-visible (200 a 700 nm)3. Ambas
0,99886 transiciones n a π* y π a π* requieren la presencia de un
0,02519099 grupo funcional no saturado que aporte los orbitales p, lo
371,2 cual en este caso el paracetamol posee electrones π que
1,6267 aseguran estas transiciones electrónicas. A las moléculas
603,822 que contienen dichos grupos funcionales y son capaces
𝑡 2,2455 de absorber la radiación UV-visible se les denomina
cromóforos3.
LOD 0.8007
Además, la conjugación entre dos o más cromóforos
LOQ 2.669
tiende a ocasionar desplazamientos en los máximos de
TTeórico=1.86 absorción a longitudes de onda más largas. Para
Desviación estándar de la concentración. finalizar, los efectos vibracionales ensanchan los picos
de absorción en las regiones ultravioleta y visible, lo
Teniendo en cuenta la ecuación 1, tenemos: cual dificulta con frecuencia la determinación precisa de
𝑠𝑥𝑜 = 0.4204 la absorción máxima3. Por lo tanto, el valor de la
longitud de onda de máxima absorbancia queda definida
Intervalo de confianza al 95%. por todas estas causas que dificultan un valor exacto y
𝐼𝑐 = 𝑋𝑜 ± 𝑡 (𝑆𝑥𝑜 ) 𝑡 = 2.35 = 𝑛 − 2 (95%) establecido en la literatura debido a que la medición se
ve influenciada por los efectos del solvente, así como
𝐼𝑐 = 581.41 ± (2.35) (0.4204) por otros detalles estructurales de la molécula antes
𝐼𝑐 = (581.41 ± 0.988) mg mencionados3.

Discusión. Por lo tanto, la selección adecuada de la longitud de

onda de los métodos depende de la naturaleza de la
Para la cuatificación de Acetaminofén en un producto
muestra y su solubilidad4. Para evitar errores
farmáceutico, se utilizó la técnica de espectroscopía por
experimentales debidos a una mala elección en la
absorción molecular en la región del UV-VIS. Aunque
literatura, se realizó un barrido espectral de la solución
esta sea una de las técnicas más empleadas, cabe
estándar de 4.00 ppm en el espectrofotómetro UV-VIS
destacar que este es un método novedoso, seguro y
entre 200 nm y 800 nm en modo espectro4. El
sensible para el ensayo de Paracetamol en su
paracetamol mostró λ max en 242 nm y a partir de este
formulación de tableta1.
valor se obtuvieron cinco puntos de curva de calibración
en un rango de concentración de 4.00 – 24.00 ppm para
el método por patrón externo. Se encontró que la
respuesta del fármaco era lineal en el rango de
concentración de la investigación y la cantidad hallada
fue de (488.65 ± 0.32827) mg con un coeficiente de
correlación 0.99894.
Cabe mencionar que una de las fuentes de error más
frencuentes en este análisis es la disolución incompleta
del fármaco en metanol y agua, ya que de acuerdo a la
metodología planteada no se realizó una sonificación ni
filtración de la disolución antes de enrasar5, ocasionando
errores experimentales reflejados en el porcentaje de
error hallado en el primer método estadístico siendo de
2.27 %, este error también se propagará en el método por
adición estándar. A pesar que este valor no es
relativamente alto, la técnica empleada presenta mejores
resultados reportados en la literatura, ya que este método
ha sido desarrollado y validado para el ensayo de
paracetamol utilizando metanol y agua como diluyentes6.
Además, los solventes utilizados para disolver la
muestra no presenta ninguna interferencia en
las estimaciones espectrofotométricas6.
Por otro lado, se diseñó una curva de calibración por
adición estándar para comparar ambos métodos por
análisis de regresión con el fin de determinar diferencias
significativas, indicando la ausencia o no de interferencia
de los aditivos y excipientes farmacéuticos comúnmente
encontrados7. De acuerdo a esto, una tableta de
Acetaminofén tiene los siguientes excipientes: almidón
de maíz, almidón de maíz pregelatinizado, ácido
esteárico8, los cuales no aportan errores tales como el
efecto de matriz, sin embargo, es de gran importancia
preparar cada estándar de manera precisa y exacta
respecto a la concentración porque la desviación de cada
punto de la calibración podría verse afectada por errores
personales.
Conclusiones.
• El método de espectroscopía de absorción
molecular en la región del UV-VIS es efectivo
en la cuantificación de acetaminofén.
• La precisión, exactitud y reproducibilidad del
método depende de la correcta disolución del
principio activo del producto farmacéutico y de
la preparación de los estándar para cada curva de
calibración.
• Determinar la longitud de onda de máxima
absorbancia experimental es lo ideal en este tipo
de determinaciones puesto que esta depende de
factores como el solvente y la estructura
molecular del compuesto a analizar.
• En análisis cuantitativos donde no se presentan
efectos de matriz es de mejor uso estadístico la
curva de calibración por patrón externo ya que
arroja mejores resultados.
Bibliografía.
1
Journal of Analytical & Bioanalytical TechniquesUV-
Visible. 2020. Spectrophotometric Method Development
and Validation of Assay of Paracetamol Tablet
Formulation. https://www.omicsonline.org/uv-visible-
spectrophotometric-method-development-and-
validation-of-assay-of-paracetamol-tablet-formulation-
2155-9872.1000151.php?aid=9714.
2
Adiraju, S. (2015). Analysis of different brands of
paracetamol 500mg tablets used in Hyderabad , using
ultraviolet spectrophotometric and high performance
liquid chromatographic methods ANALYSIS OF
DIFFERENT BRANDS OF PARACETAMOL 500mg
TABLETS USED IN HYDERABAD , USING ULTRA
VIOLET SPECTROPHOTOMETRIC AND HIGH
PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC (
HPLC ) METHODS INTRODUCTION : The Analysis
means, (July). https://doi.org/10.13040/IJPSR.0975-
8232.5(3).951-55
3
Douglass a. Skoog . F. James . Principios de analisis
instrumental. España. 6 ed . Cengage Learning Editores
S.A. 2008. p. 368-370.
4
Journal of Analytical & Bioanalytical TechniquesUV-
Visible. 2020. Spectrophotometric Method Development
and Validation of Assay of Paracetamol Tablet
Formulation. https://www.omicsonline.org/uv-visible-
spectrophotometric-method-development-and-
validation-of-assay-of-paracetamol-tablet-formulation-
2155-9872.1000151.php?aid=9714
5
Sharma, S., Pareek, A., Joshi, R., Bhardwaj, Y. R., Jain,
V., & Jadon, G. (2013). Development and Validation of
A UV Spectroscopic Method for Analysis of
Paracetamol in Bulk Powder and Tablet.
6
Journal of Analytical & Bioanalytical TechniquesUV-
Visible. 2020. Spectrophotometric Method Development
and Validation of Assay of Paracetamol Tablet
Formulation. https://www.omicsonline.org/uv-visible-
spectrophotometric-method-development-and-
validation-of-assay-of-paracetamol-tablet-formulation-
2155-9872.1000151.php?aid=9714.
7
Kondawar, M. S., Shah, R. R., Waghmare, J. J., Shah,
N. D., & Malusare, M. K. (2011). UV
Spectrophotometric estimation of Paracetamol and
Lornoxicam in Bulk drug and Tablet dosage form using
Multi- wavelength method, 3(3), 1603–1608.
8
Medicines.org.uk. 2020. Paracetamol Tablets 500Mg -
Summary Of Product Characteristics (Smpc) - (Emc).
[online] Available at:
<https://www.medicines.org.uk/emc/product/5916/smpc
> [Accessed 10 March 2020].