Cuantificación de caseína por espectrofotometría UV-Vis

Paez-Vaca, L*., Saavedra-Acosta, V*. y Zuloaga-Jaramillo, M*.

* Universidad El Bosque, Programas de Bioingeniería y Química Farmacéutica, Facultades de Ingeniería y Ciencias, No

131 A, Av. 9 #131a, Bogotá-Colombia.

Dentro de esta práctica de laboratorio se realizaron diferentes procesos para la determinación de una muestra
problema a partir de una muestra patrón de caseína medida en diferentes marcos de absorbancia por
espectrofotometría y a partir de allí realizar una curva de calibración para hallar las diferentes concentraciones
patrón y a partir de los resultados obtenidos lograr encontrar según los rangos de absorbancia, a qué
concentración correspondía la muestra. Dentro de la práctica de laboratorio se prepararon inicialmente 6
muestras patrón para la preparación de la curva, posteriormente, se realizó para la muestra problema reactivo
Biuret, para lograr hallar la absorbancia. Al comparar los resultados de concentración y absorbancia, se
determinó a partir de la absorbancia y la curva, que la muestra podría corresponder al patrón en el tubo de
ensayo 5, por las similitudes entre su índice de absorción a la luz polarizada e incluso la concentración desvaría
en pocos aspectos.

Palabras claves: Caseína, Concentración, Muestras patrón, espectrofotometría.

Abstract:Within this laboratory practice, different processes were carried out to determine a problem
sample from a standard sample of casein measured in different absorbance frames by
spectrophotometry and from there to make a calibration curve to find the different standard
concentrations and from From the results obtained, it was possible to find, according to the absorbance
ranges, to what concentration the sample corresponded. Within the laboratory practice, 6 standard
samples were initially prepared for the preparation of the curve, later, Biuret reagent was performed
for the problem sample, in order to find the absorbance. When comparing the results of concentration
and absorbance, it was determined from the absorbance and the curve that the sample could correspond
to the pattern in the test tube 5, due to the similarities between its absorption index to polarized light
and even the concentration varies in a few aspects.

}Keywords: Casein, Concentration, Standard samples, spectrophotometry.

mL y las absorbancias obtenidas de manera

1. Datos y Análisis experimental, teniendo en cuenta la siguiente
ecuación:
C= ¿ ∗10 ¿
||
Tubo Patron Buffer pH 8 Biuret Concentración Absorbancia
(mL) (mL) (mL) de proteína (nm) ε
(g/mL)
Teniendo que C es concentración de la proteína,
1 0,0 1,0 2 0 0,000
Abs es la absorbancia y ε el coeficiente de
2 1,0 0,0 2 0,006753 0,547 extinción de la caseína.
3 0,8 0,2 2 0,0059012 0,478
Por lo tanto haciendo el respectivo cálculo se logró
4 0,6 0,4 2 0,0041234 0,334
obtener la concentraciones de la tabla 1.
5 0,4 0,6 2 0,0027654 0,224

6 0,2 0,8 2 0,0013456 0,109

Muestra 1,0 1,0 2 0,0031852 0,258

Tabla 1. Reporte de datos obtenidos experimentalmente de caseína.

Para la determinación de concentración de Caseína

se utilizó un coeficiente de extinción del 0,81 mg/

Teniendo estos datos respectivamente se realiza la
curva de calibración de la siguiente forma:
Gráfica 1. Curva de calibración
Teniendo en cuanta esto se establece que
efectivamente la muestra problema que se encuentra
en en una concentración de 0,0031852 g/ml
respectivamente como se evidencia en la imagen 2,
teniendo así que se obtuvo un porcentaje
significativo en la cuantificación de dicha proteína
además de ellos se evidencia presencia de esta por lo
tanto los errores sistemáticos en esta práctica fueron
menores ya que también el coeficiente de regresión
lineal fue de 1 (gráfica 1) siendo este de gran
importancia a la hora de verificar que los datos no
tuvieron errores significativos del mismo, por lo
tanto se establece que la caseína se tuvo de manera
eficiente.
3. Referencias bibliográficas
[1] Duhalt, R. V. Cuantificación de proteínas: una
revisión.
[2] de Pablo, L. R., & de Análisis Clínicos, F. E. A. Y
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS.
[5] Nelson, D. L., & Cox, M. (2006). Lehninger: Pri
ncipios de Bioquimica.pdf. Barcelona, España: Eds.
Omega.
Física mecánica
Docente: Nombre Apellido
Gráfica 2. Concentración de muestra problema.
2. Conclusiones
Teniendo en cuenta los datos tomados en la práctica
realizada, se realizó una curva de calibración con
los datos de la Absorbancia vs la Concentración y
se evidencia que el comportamiento de la gráfica es
lineal, acorde con los puntos obtenidos, que
indicaría un margen de precisión óptimo para la
determinación de la muestra problema dentro del
proceso experimental.
Adicionalmente se puede concluir dentro de los
procedimientos experimentales que el rango de
absorbancia marcado en 0,258 y la muestra
referencia correspondiente a 0,224 es aquella que
presenta maor similitud al fenómeno estudiado la
absorbancia entre la muestra problema y en tubo
número 5 presentan similitudes.
[3] Martínez Osorio, F. S., & Pérez Espinoza, I. D. L. A.
(2009). Calibración de un espectrofotómetro UV-Visible
y Evaluación de la incertidumbre (Doctoral dissertation).
[4] Valencia, J. D. J. C. (2012). Uso de los derivados de
la caseína en los procedimientos de remineralización.
Revista adm, 69(4), 191-199.