INFORME DE LABORATORIO

Asignatura Bioquímica
Grupo 2
Nombre práctica Análisis químico de la caseína presente en la leche
descremada
Integrantes 1. María Gabriela Navarro Stand
2. Sergio Alejandro Maldonado Torres
3. Saray Esther Joajinoy Rodríguez
4. Jorge Andrés Guzmán Guerrero
5. Joan Sebastián Cartagena Algarín

LABORATORIO DE QUÍMICA
 FORMULE TRES HABILIDADES QUE DESEE ADQUIRIR O DESARROLLAR A TRAVÉS DE LA PRÁCTICA DE
LABORATORIO
HABILIDADES

1. Determinar que es la caseína y las principales proteínas que forman parte de esta.

2. Conocer la relación entre la absorbancia y la concentración.

3. Identificar la ecuación de la recta para curva de calibración y los términos de esta.

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 SEGUNDA SESIÓN
Para esta segunda sesión recurriremos al uso del siguiente simulador:
http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm
 
RESULTADOS
1. Calibración del equipo y ensayo con muestra de una solución de Para-Nitro Fenol (pNF) el cual es un compuesto
amarillo a pH básico.
a. Identificar el cromóforo de la sustancia, para ello deberá tomar un pantallazo de la curva realizada.
Grafica Absorbancia vs longitud de onda λ (nm)

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 b. Luego de identificar el cromóforo deberá realizar en Excel la curva de calibración de Absorbancia vs concentración.
(Teniendo en cuenta que la concentración de la solución madre es de 80μM), donde identificará la ecuación de la recta y el
coeficiente de regresión lineal (R2).
RESULTADOS
Cubeta V pNF (ml) V Agua (ml) Concentración Absorbancia
1 1 2 26,66 0,528
2 2 1 53,33 1,058
3 3 0 80 1,605

Curva de calibración realizada en Excel

Absorbancia vs concentración
1.8
1.6
f(x) = 0.02 x − 0.01
1.4 R² = 1

1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
20 30 40 50 60 70 80 90

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 c. Realice el ejercicio propuesto de la actividad 1 en el simulador. (Se mezcla 1 mℓ de una muestra problema con 2 mℓ de
agua. Calcula la concentración de pNF en la muestra de partida si el ensayo ha proporcionado un valor A405 = descubrir el
valor)
RESULTADOS

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 1. En la sesión anterior, se realizó la extracción de caseína para ser cuantificada por el método de Bradford, el cual
permite cuantificar las proteínas a una longitud de onda determinada.
a. Identificar el cromóforo de las proteínas con el reactivo de Bradford, para ello deberá tomar un pantallazo de la curva
realizada.
RESULTADOS
Grafica Absorbancia vs longitud de onda λ (nm)

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 b. Luego de identificar el cromóforo deberá realizar en Excel la curva de calibración. (La concentración de la solución madre
es de 800mg/L), donde identificará la ecuación de la recta y el coeficiente de regresión lineal (R2).

V R. Bradford
RESULTADOS
Cubeta V proteína (ml) Concentración Absorbancia
(ml)
1 1 2 266,66 0,170
2 2 1 533,33 0,367
3 3 0 800 0,546

Curva de calibración realizada en Excel

Absorbancia vs concentración
0.6

0.5 f(x) = 0 x − 0.01

R² = 1
0.4

0.3

0.2

0.1

0
200 300 400 500 600 700 800 900

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 c. Realice el ejercicio propuesto de la actividad 2 en el simulador. (Se mezcla 1 mℓ de una muestra problema con reactivo
de Bradford, para un volumen total de 3 mℓ. Calcula la concentración de proteínas en la muestra de partida si el ensayo ha
proporcionado un valor A595 = descubrir el valor)
RESULTADOS

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CUESTIONARIO SEGUNDA SESIÓN

1. Calculen la concentración en μM de las diluciones realizadas a la solución estándar de pNF en cada Cubeta patrón.
Tengan en cuenta que la solución estándar de pNF está a 80 μM.
a. Concentración en μM de la solución patrón en cada tubo. Puede utilizar la siguiente ecuación.
C1  V1 C2  V2 PATRON EN EL TUBO 1 PATRON EN EL TUBO 3
C1*V1=C2*V2 En el tubo 3 los 3 ml son
Tabla 3. Cálculo de la concentración del patrón de pNF Reemplazamos puros de pNF por lo tanto
(80μM)(1ml)=C2(3ml) su concentración es la
Ordenamos misma de la muestra
C2=(80μM)(1ml)/(3ml) problema 80μM
C2=26,66μM

PATRON EN EL TUBO 2
C1*V1=C2*V2
Reemplazamos
(80μM)(2ml)=C2(3ml)
Ordenamos
C2=(80μM)(2ml)/(3ml)
C2=53,33μM

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 2. Determinen la concentración de la Muestra Problema, para esto realicen la regresión lineal de los datos y
empleen la ecuación de la recta, no olviden mencionar cual es el valor del coeficiente de regresión lineal.
CUESTIONARIO
Donde: Y es la variable dependiente (Absorbacia de la muestra problema).
m es la pendiente de la recta.
Y mx + b x es la variable controlada (concentración de la muestra problema).
b es el intercepto.

Tabla 4. Regresión lineal y cálculo de concentración de la muestra.

ECUACIÓN DE LA RECTA Y=mx+b
COEFICIENTE DE REGRESIÓN (R²) R² = 0,9999
CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA
(Presente en el calculo) 52,56

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 3. Calculen la concentración en mg/L de las diluciones realizadas a la solución estándar de proteína en cada Cubeta patrón.
Tengan en cuenta que la solución estándar de Proteína está a 800 mg/L.
CUESTIONARIO
a. Concentración en mg/L de la solución patrón en cada tubo. Puede utilizar la siguiente ecuación.
C1  V1 C2  V2
PATRON EN EL TUBO 1 PATRON EN EL TUBO 3
Tabla 3. Cálculo de la concentración del patrón de caseína. C1*V1=C2*V2 En el tubo 3 los 3 ml son puros
Reemplazamos de proteína por lo tanto su
(800mg/L)(0,001l)=C2(0,003l) concentración es la misma de
Ordenamos la muestra problema 800mg/L
C2=(800mg/L)(0,001l)/(0,003l)
C2=266,66mg/L

PATRON EN EL TUBO 2
C1*V1=C2*V2
Reemplazamos
(800mg/L)(0,002l)=C2(0,003l)
Ordenamos
C2=(800mg/L)(0,002l)/(0,003l)
C2=533,33mg/L

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 4. Determinen la concentración de la Muestra Problema, para esto realicen la regresión lineal de los datos y
empleen la ecuación de la recta, no olviden mencionar cual es el valor del coeficiente de regresión lineal.
CUESTIONARIO
Donde: Y es la variable dependiente (Absorbacia de la muestra problema).
m es la pendiente de la recta.
Y mx + b x es la variable controlada (concentración de la muestra problema).
b es el intercepto.

Tabla 4. Regresión lineal y cálculo de concentración de la muestra.

ECUACIÓN DE LA RECTA Y=mx+b
COEFICIENTE DE REGRESIÓN (R²) R² = 0,9992
CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA
(Presente en el calculo) 1191,45mg/L
5. Con la gráfica construida en Excel de la curva de calibración de absorbancia vs concentración recuerde que las gráficas
deben tener:
a. Tener un título de la gráfica acorde con la práctica realizada.
b. Señalar los puntos obtenidos en un color.
c. Trazar la recta obtenida por la regresión con un color diferente.
d. Señalar la concentración de la muestra problema interpolando el dato de la absorbancia. (valor entregado por el
simulador)

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 pNF
CUESTIONARIO

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CUESTIONARIO PROTEINA

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CONCLUSIONES FORMULE TRES CONCLUSIONES A PARTIR DE LAS HABILIDADES DESARROLLADAS EN LA PRÁCTICA.

Se determino que la caseína es una proteína de alto valor biológico, que se encuentra en la
leche en forma de un complejo soluble de calcio y fósforo. Representa el 80% de las
1. proteínas de la leche de vaca, y es necesaria para la absorción de calcio y fosfato en el
intestino. Las principales proteínas que forman parte de la caseína son: Beta-caseína. Alfa
S1 caseína. Alfa S2 caseína. Kappa caseína.
Se conoció que la relación entre la absorbancia y la concentración es directamente
2.
proporcional, donde la absorbancia está en función de la concentración.
Se identificó que la ecuación de la recta para una curva de calibración es: Y= mx + b, donde
3. Y es la variable de la pendiente, m es la pendiente, X es la variable controlada y b es el
intercepto.

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PROFESIONAL
Como profesionales de la salud, es importante el
APLICACIÓN

manejo del espectrómetro, el correcto uso e

interpretación de los resultados, ya que se utiliza para
el análisis de diversas moléculas y permite ser
utilizada para su identificación y cuantificación,
generando un punto de partida para llevar a cabo
terapias adecuadas al paciente y obtener los
resultados esperados.

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 MENCIONE MÍNIMO DOS FUENTES BIBLIOGRÁFICAS UTILIZADAS PARA LA RESOLUCIÓN DE LA GUÍA.
(NORMAS APA)
BIBLIOGRAFÍA
1. Bohinski, R. C. (1991). Bioquímica. Quinta Edición. Pearson Educación.

2. Murray, R. M., Mayes, P., Granner, D., Rodwell, V. Bioquímica ilustrada Harper (14a Edición ed.).
México: Manual Moderno. (2005).

3. Skoog, West, Holler, Crouch. (2005). Fundamentos de Química Analítica. 8a Edición. Editorial
Thomson, México.

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