Informe Laboratorio de Bioquímica, 25 de noviembre, 2019 - 27 de enero, 2020.

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PROTEÍNAS

*Estudiantes de Ingeniería Ambiental, Facultad de Ingeniería Civil, Universidad del Cauca. Grupo No 1.

1. CÁLCULOS Y RESULTADOS.
Durante el desarrollo experimental se debió tener en cuenta la concentración para cada muestra
empleada, por ende, en la Tabla 1 se exponen las cantidades que se emplearon para cada caso.

Tabla 1. Datos para la preparación de las muestras.

No tubo Bco 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Sln patrón 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00

(mL)

H2O (mL) 2.00 1.75 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00

Para lograr determinar la concentración de las muestras (C2) que se muestran en la Tabla 2, se
realiza el siguiente dato tipo para la concentración de la muestra 2:

C1 = 1000 ppm, concentración del patrón. V1 = 5.50 mL, volumen final de la muestra.

V2 = Volumen adicionado de sln patrón

𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2
1000 𝑝𝑝𝑚 ∗ 0,25 𝑚𝑙
𝐶2 =
5.5 𝑚𝑙

𝐶2 = 45.45 𝑝𝑝𝑚

Cabe resaltar que, para el caso del blanco (muestra 1) no se realizó el cálculo anterior, debido a
que su concentración es 0.

Para determinar la absorbancia a partir de la transmitancia obtenida de cada una de las muestras,
se realiza el siguiente cálculo, tomándose como ejemplo en caso de muestra 2:

100
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 = 𝐿𝑜𝑔 ( )
𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠𝑚𝑖𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
Reemplazando el valor, se tiene que:
100
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 = 𝑙𝑜𝑔 (42.7) = 0,37

Tabla 2. Registro del valor de absorbancia y concentración en las muestras.

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No tubo Bco 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Trans (nm) 0.00 42.7 29.1 25.6 14.3 12.3 8.8 4.5 3.6

Abs (nm) 0.00 0.37 0.54 0.59 0.84 0.91 1.06 1.35 1.44

[X] (ppm) 0.00 45.45 90.91 136.36 181.82 227.27 272.73 318.18 363.64

De esta forma, la Ecuación de la recta según la gráfica es: 𝑌 = 0,0037𝑥 + 0,1182

Y el Coeficiente de correlación lineal es: 𝑅 2 = 0,9756

Ahora, para encontrar la concentración de la albumina bovina presente en las muestras problema,
se realiza el siguiente proceso para el caso de P1, teniendo en cuenta que 𝑌 es la absorbancia
obtenida experimentalmente para cada muestra.

𝑌 − 0,1182
𝑥=
0,0037
0,14 − 0,1182
𝑥=
0,0037

𝑥 = 5,89

Para este caso, la absorbancia se determina de igual forma que en el caso anterior, obteniendo los
siguientes datos expuestos en la tabla 3:

Tabla 3. Concentraciones de las muestras problema determinadas en función de la curva de

calibración.

MUESTRAS MP1 MP2 MP3 MP4

DATOS

Transmitancia 71.9 62.3 49.2 31.0

Absorbancia (nm) 0.14 0.2 0.31 0.51

Concentración (ppm) 5.89 22.11 51.84 105.89

2. ANALÍSIS DE RESULTADOS.

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La albúmina sérica o también denominada seroalbúmina bovina, es una proteína de gran tamaño
presente en la proteína de suero rica en aminoácidos esenciales y compuestos con puentes
disulfuro y grupos tiol (grupos azufrados).

En general, las albúminas se caracterizan por presentar un bajo contenido de triptófano y

metionina y un alto contenido en cisteína y aminoácidos cargados, como los ácidos glutámico y
aspártico, lisina o arginina. Para poder desarrollar esta práctica experimental, se debe tener en
cuenta que los aminoácidos aromáticos que conforman este tipo de albúmina, como lo es el
triptófano, presentan nubes electrónicas, y por ello absorben un máximo de luz ultravioleta a una
longitud de onda de 280 nm. (Fernández, 2015)

Para determinar la concentración de las muestras problemas, se realizó una curva de calibrado
utilizando la proteína patrón, la cual es la seroalbúmina bovina, empleando el método de Lowry,
que consiste en una combinación de las reacciones entre la proteína con el reactivo de Biuret y
de Folin, las cuales se desarrollan en dos etapas: