Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Agronomía
Área de Ciencias
Subárea de Ciencias Químicas
Laboratorio de Bioquímica

Hoja de trabajo práctica 3.

Estudio cuantitativo de proteínas
Nombre: Carné

Cynthia Abigail Mejicanos López 201905021

Instrucciones: Realice la siguiente hoja de trabajo. Deje constancia de sus cálculos en donde sea
necesario. Evite copiar textos donde se le solicita analizar. Adjunte el archivo en formato pdf previo al
día y hora límites indicadas en el aula virtual.

SERIE I
Instrucciones: Responda los siguientes cuestionamientos en base al video
https://youtu.be/MPWLQxa0Eio .

a) ¿Cuál es el valor de la absorbancia y la transmitancia de la solución D y F? Incluya el uso de

la fórmula 2 - log(transmitancia) y compare resultados.

D: Transmitancia 97 Absorbancia 0.015

F: Transmitancia 98 Absorbancia 0.010

D: 2 - log (97) = 0.013

F: 2 - log (98) = 0.0087

b) ¿Por qué es importante calibrar el espectrofotómetro?

Esto permite medir con un mayor porcentaje de certeza y precisión la absorbancia de radiación
de la solución reveladas a través del reactivo de biuret.

c) ¿De qué se compone la muestra No 4, 5, y 7? Indique sustancia y el objetivo de ellas.

Las tres muestras presentan: 2 ml de la solución que se preparó anteriormente (9.5 mL de

sulfato de sodio al 26.6% y 0.5 mL de muestra a analizar) y 8 mL Reactivo de biuret
SERIE II
Instrucciones: Diríjase al simulador virtual http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm y de acuerdo a
lo visto en el laboratorio, realice las siguientes actividades (también puede guiarse en el panel de
instrucciones presentes en el simulador). Trabaje de manera clara, ordenada y legible cada uno de los
aspectos.

ACTIVIDAD I Relación entre absorbancia y concentración utilizando el reactivo para-nitrofenol (pNF).

Cuadro 1. Resultados obtenidos de la relación entre absorbancia y concentración.

Muestra mL de pNF mL de agua mL total Absorbancia Concentración

1 1 2 3 0.533 28.91

2 2 1 3 1.078 58.47

3 3 0 3 1.604 87

a) Análisis cualitativo (10 puntos):

Observe los resultados obtenidos y la relación entre el color de las cubetas y el valor de la
absorbancia, explique con base científica esta relación (cite la autoría).

En el tubo con la muestra numero 1 pudimos observar una mayor dilución con el reactivo con la
coloración más pálido y de igual forma con una menor concentración, a su nivel de absorción. En el
tubo con la muestra numero 2 poseía una coloración un poco más intensa que la contenida en el tubo
número 1 y de igual forma su absorción es mayor ya que tiene una concentración mayor. En la muestra
número 3 con una concentración mayor a la de las primeras dos muestras en los tubos, su coloración
era de mayor intensidad al igual que su absorción. Se concluyó que la absorción de poseer una
relación con la concentración de pNF, a mayor concentración más intenso es el color y a menor
concentración menor será la intensidad de la coloración. (StuDocu, 2016)

b) Análisis cuantitativo (10 puntos):

Calcule la concentración de pNF en la mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en
la botella es de 87 µM pNF. Realice una curva en Excel ponderando los resultados de concentración
frente absorbancia.

0.533/1.604=C1/87 C1 = 0.533*87/1.604 = 28.91

1.078/1.604=C2/87 C2 = 1.078*87/1.604 = 58.47

 Absorbancia
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0.533 1.078 1.604

ACTIVIDAD II Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas (ensayo de Bradford)

Cuadro 2. Resultados del ensayo de cuantificación de proteínas (ensayo de Bradford)

Muestra Absorbancia Concentración de proteínas

Blanco 0 0

1 0.185 125.0796

2 0.351 237.3133

3 0.539 382

a) Análisis cualitativo (15 puntos): Observe los resultados obtenidos y la relación entre el
color de las cubetas y el valor de la absorbancia, explique con base científica esta
relación (cite la autoría).

El color que se mostró en la muestra 1, fue una coloración opaca, teniendo una concentración menor
de proteínas junto con su absorción. En la segunda muestra presento una coloración intermedia ya
que su concentración y absorción de proteína era mayor a la de la muestra 1. En la tercera muestra
solo se contenía proteína y por eso su coloración era de mayor intensidad que las primeras dos
muestras observadas con anterioridad al igual que su absorción. Se concluyó que la mayor absorción
de proteína se da cuando hay una gran concentración de ella, de igual forma el color de las muestras
está relacionada con la concentración de la proteína dando una menor intensidad o una mayor
intensidad en su coloración.
 b) Análisis cuantitativo (15 puntos): calcule la concentración de proteínas en la mezcla
final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de 382 mg/L.
Realice una curva de sus resultados en Excel representando concentración vs
absorbancia.

A1/A2=C1/C2
C1= 0.185*382/0.565 = 125.0796
C2= 0.351*382/0.565 = 237.3133

Absorbancia
450
400
350
300
250
200
150
100
50
0
0.185 0.351 0.539

Uso de la curva patrón (20 puntos)

Haga uso de su curva realizada en el inciso anterior (ensayo de Bradford) y determine la concentración
de proteínas a partir de los siguientes datos de transmitancia (Utilice la fórmula 2 – log(transmitancia)).
Inserte la curva realizada y especifique de forma clara y ordenada cómo obtuvo los resultados.
Muestra Transmitancia Concentración de proteínas

1 98 0.0087

2 97 0.0132

3 99 0.0043

2 – log (98) = 0.0087

2 – log (97) = 0.0132
2 – log (99) = 0.0043
 Curva de Absorbancia
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014