Tercera Unidad Metabolismo de los Lípidos

- HIPERLIPIDEMIA EXPERIMENTAL --
INTRODUCCION:
El aumento de los lípidos sanguíneos o hiperlipidemia constituye una situación metabólica de riesgo, especialmente coronario.
Se considera aterogénicos el aumento del colesterol y de los triglicéridos. Las hiperlipidemias pueden ser primarias o familiares
como lahipercolesterolemia familiar, la hiperlipidemia familiar combinada, la hipertrigliceridemia familiar etc. Pero también
secuandaria a otras patologías como la diabetes, hipotiroidismo, sidrome nefrotico, etc.

En todos los casos el control dietético es importante según lo establece el III panel de expertos (2001), que incluye la reducción
de la ingesta de grasas y colesterol. La ingesta recomienda en función de las calorías totales: grasas saturadas menor del 7%,
grasas poliinsaturadas hasta el 10% de las calorías totales, grasas monoinsaturadas hasta el 30% de las calorías totales, grasas
totales 25%-35%, carbohidratos 50-60% de las calorías totales, proteínas aproximadamente el 15%, colesterol menor de 200mg,
calorías totales para mantener el peso deseable.

Por ello se desea resaltar el efecto de una dieta rica en grasa saturada en la producción de una hiperlipidemia experimental en
ratas.

FINALIDAD:
▪ Demostrar el efecto de una dieta rica en grasas sobre la concentración sérica de lípidos.

MATERIAL Y EQUIPOS
▪ Muestra: suero sanguíneo de ratas.
▪ Material biológico:
• ratas Wistar con peso aproximado de 200 gramos.
• Sebo de pollo.
• Dieta standard para ratas a base de maíz.
▪ Material: de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimetradas.
▪ Equipo de extracción de muestra: guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5 cc.
▪ Equipos: centrífuga, micropipetas, baño maría, espectrofotómetro.
▪ Reactivos:
• Kit enzimático para la determinación de colesterol.
• Kit enzimático para la determinación de triglicéridos.

PROCEDIMIENTO
1) Tratamiento Experimental:
Se dispondrá de 20 ratas albinas adultas de la raza Wistar, con un peso aproximado de 200gr. Se dividirán en dos grupos en
forma aleatoria. 10 de ellas seguirán su dieta habitual (grupo control), las diez restantes (grupo experimental) recibirán
adicionalmente 1.5cc de aceite preparado de sebo de pollo. El tratamiento será por 15 días.

2) Extracción de las muestras:

Con la ayuda del personal de la sección cada mesa obtendrá de cada rata control y experimental una muestra sanguínea de la
cola, antes del tratamiento y otra al final. Se extraerá el suero y a cada uno se determinará la concentración de colesterol y
triglicéridos por el método enzimático.

3) Determinación de Colesterol Sanguíneo:

▪ Para la determinación de colesterol total: Se trabajará con sueros de las ratas control y experimental antes y después de
recibir el estímulo y en 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido), se debe colocar:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES
B S D1 D2
Muestra (suero / ul) -- -- 10 10
Estándar (ul) -- 10 -- --
Reactivo A (ml) 1.0 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura ambiente (18 a 25 °C). Leer
en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con el Blanco.

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4) Determinación de Triglicéridos:
▪ Para la determinación de triglicéridos: Se trabajará con sueros de las ratas control y experimental antes y después de recibir
el estímulo y en 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido), colocar:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES
B S D1 D2
Muestra (suero / ul) -- -- 10 10
Estándar (ul) -- 10 -- --
Reactivo A (ml) 1.0 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura ambiente (18 a 25 °C). Enfriar
y leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua destilada.

5) Resultados:
▪ Lecturas de las muestras en el espectrofotómetro de Colesterol:
Lecturas de Absorbancia - Colesterol [505 nm]
Blanco 0.018 Estandar 0.235
Grupo Control Grupo Experimental
Ratas
Lect. Inicial Lect. Final Lect. Inicial Lect. Final
1 0.165 0.17 0.145 0.265
2 0.136 0.138 0.139 0.278
3 0.126 0.127 0.122 0.295
4 0.154 0.153 0.127 0.298
5 0.138 0.134 0.132 0.294
6 0.176 0.177 0.141 0.289
7 0.198 0.174 0.138 0.292
8 0.143 0.134 0.14 0.295
9 0.123 0.13 0.136 0.288
10 0.183 0.189 0.131 0.285

▪ Lecturas de las muestras en el espectrofotómetro de Triglicéridos:

Lecturas de Absorbancia - Triglicéridos [505 nm]
Blanco 0.025 Estandar 0.317
Grupo Control Grupo Experimental
Ratas
Lect. Inicial Lect. Final Lect. Inicial Lect. Final
1 0.119 0.125 0.123 0.259
2 0.143 0.144 0.141 0.28
3 0.118 0.128 0.12 0.276
4 0.155 0.162 0.135 0.269
5 0.164 0.167 0.134 0.273
6 0.167 0.171 0.147 0.271
7 0.168 0.17 0.158 0.267
8 0.162 0.164 0.151 0.287
9 0.137 0.146 0.143 0.284
10 0.145 0.149 0.147 0.281

6) Actividades a desarrollar por el alumno:

- Calcular el factor tanto de colesterol y triglicéridos.
- Calcular la concentración de colesterol y triglicéridos.
- Interpretación de los resultados.
- Explique bioquímicamente lo encontrado.

PREGUNTAS DE APLICACIÓN.
1) ¿Cuál fueron los objetivos de la práctica?
2) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
3) Identifique los componentes del sistema empleado en la práctica y señale sus principales características.

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4) ¿Qué tipo de la muestra se empleó para la realización de las pruebas?
5) Haga una lista de 10 alimentos ricos en grasas saturadas.
6) Confeccione un cuadro con las principales hiperlipidemias primarias, e indique sus principales características semiológicas.
7) Confeccione un cuadro con las hiperlipidemias secundarias e indique sus características semiológicas principales.
8) Confeccione un gráfico con la dieta recomendada por expertos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011