Determinación de las

condiciones óptimas
para la actividad de α-
amilasa
Integrantes:
Sebastián García
Sergio Tapia
José Acuña
Docentes:
Leyla Asserella
Cristopher Low
Fecha: 26 de Octubre, 2022
 Introducción
● Las enzimas participan en todos los procesos biológicos
acelerando las reacciones metabólicas, además de no
consumirse en las reacciones que catalizan. (La
importancia del entorno en la catálisis enzimática., s. f.) (1).

● La determinación de la actividad enzimática tiene una

aplicación importante para el diagnóstico, tratamiento y
pronóstico de la enfermedad del paciente.​

● La alteración de la concentración sérica de un enzima

determinada orienta sobre qué tejidos están más
probablemente afectados. ​

● Elevaciones debido al aumento de permeabilidad celular por

el daño tisular.​

● Disminuciones debido a enfermedades crónicas que originan

disfunción celular.​
Objetivos
 Evaluar la cinética de una enzima a través de la realización de una curva de progreso de
reacción enzimática mediante espectrofotometría.​

 Evaluar efecto de concentración de enzima y sustrato en cinética enzimática.​

 Comprender el concepto de hidrólisis de sustrato y de velocidad de reacción.​

 Comprender el uso de dos concentraciones de enzimas sobre una concentración de

sustrato saturante.
 Materiales y Soluciones

Reactivos • Micropipetas
(1000 ul - 200 ul)
• Amilasa (1000 ul)
• Valtrol CII (25 ul) • Tubos Eppendorf

Baño María Espectrofotómetro

 Metodología
1. Preparar y leer los insertos de los reactivos a utilizar.
2. Preprara la solución con 1000 ul de "Valtrol" y 25 ul de "Amilasa" en un tubo
Eppendorf.
3. LLevar el reactivo a temperatura de reacción (37°C.) durante 60 segundos.
4. Poner el espectrofotómetro en cero contra blanco de agua destilada.
5. Leer Absorbancia a 405 nm.
6. Repetir las lecturas en intervalos de 30 segundos.
 Resultados
 
• Una vez realizada la solución, se procedió a medir en el espectrofotómetro a 405nm,
midiendo la absorbancia cada 30 segundos durante 25 minutos.

• Se realiza una tabla comparativa entre el tiempo (25 minutos), la Absorbancia, la Δ

Absorbancia, el Producto y el Sustrato de la reacción enzimática.

• Se realizan dos gráficos, el primero es la comparativa entre las Concentraciones

(Producto y Sustrato) vs el Tiempo, mientras que, el segundo es la comparativa entre la
Δ Absorbancia vs el Tiempo.
Tiempo (seg) Absorbancia * Absorbancia Producto Sustrato
0,249 198,9 198,9
30 0,289 0,04 32,0 166,9
60 0,3 0,051 35,1 163,8
90 0,31 0,061 40,4 158,5
120 0,319 0,07 44,9 154,0
150 0,328 0,079 49,3 149,6
180 0,337 0,088 53,4 145,5
210 0,347 0,098 57,8 141,1
240 0,359 0,11 63,1 135,8
270 0,368 0,119 65,9 133,0
300 0,376 0,127 68,6 130,3
330 0,385 0,136 71,9 127,0
360 0,394 0,145 74,9 124,0
390 0,403 0,154 77,7 121,2
420 0,411 0,162 80,0 118,9
450 0,42 0,171 82,8 116,1
480 0,429 0,18 85,2 113,7
510 0,438 0,189 87,6 111,3
540 0,446 0,197 89,5 109,4
570 0,457 0,208 92,8 106,1
600 0,465 0,216 94,0 104,9
630 0,473 0,224 95,8 103,1
660 0,483 0,234 98,4 100,5
690 0,491 0,242 99,7 99,2
Curvas de progreso
Discusión
● Se puede apreciar que la concentración de producto va aumentando a medida que la enzima
va consumiendo el sustrato hasta agotar este mismo. ​Es decir, el producto es proporcional a
la cantidad de enzima, sin embargo, es inversamente proporcional al sustrato.​

● La incubación a 37° grados nos ayuda a activar en cierta manera la enzima. Porque estas
necesitan de las condiciones adecuadas para llevar acabo sus funciones, y si estás se
alteran las destruimos. (Villén, 2012) (2).

● La α-amilasa es una enzima multifuncional que ayuda a romper en unidades más cortas el
almidón; se une a tipos de bacterias que ayudan a la limpieza bacteriana de la cavidad
oral. (Zetina, s. f) (3).​
Referencias Bibliográficas
1. Cardona Serrate, F. (2020). Los enzimas. Introducción a la enzimología.
https://riunet.upv.es/handle/10251/146362

2. ¿Qué son las enzimas? ¿Por qué son tan importantes? (2012, abril 2). Blog Conasi.
https://www.conasi.eu/blog/consejos-de-salud/que-son-las-enzimas/

3. Saliva y enzima alfa amilasa: Esenciales para la digestión. (s. f.). Recuperado 26 de

octubre de 2022, de
https://www.sabermas.umich.mx/archivo/articulos/235-numero-27/421-saliva-y-enzi
ma-alfa-amilasa-esenciales-para-la-digestion.html