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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS


SISTEMAS DE CONTROL DE CALIDAD

MATERIAL DE CALIBRACIN Y MATERIAL PARA CONTROL


DE CALIDAD

Arias Gamarra Citlali Yolotzin

Equipo 2
Seccin 2

Dr. Luis Carreo Duran


Dra. Berenice E. Oseguera Guerra
Q.B.P. Aura Hernndez Olicn

Grupo: 5QV1

18- Octubre- 2017


Introduccin
La gestin de la calidad en laboratorios de anlisis clnicos est, en la actualidad,
generalmente sujeta a guas nacionales e internacionales de buenas prcticas de
laboratorio con el fin de asegurar y controlar la calidad, es decir proporcionar confianza
en que se cumplirn los requisitos de la calidad (1).

El aseguramiento de la calidad se da mediante un control de calidad interno y a una


evaluacin externa de la calidad, en este caso, trataremos el control de calidad interno,
donde el laboratorio debe disear procedimientos de control de calidad que verifiquen el
cumplimiento de la calidad prevista de los resultados, se recomienda que se examinen
los materiales de control de la calidad con una frecuencia que refleje la estabilidad del
procedimiento de examen y tenga en cuenta las consecuencias de los daos sobre los
pacientes si se producen resultados errneos. El laboratorio deber aplicar reglas de
control estadstico para tomar decisiones sobre la aceptabilidad de los resultados
analticos y la necesidad de rechazar corridas analticas y repetir las pruebas de pacientes
(2).

Una corrida analtica de define como el conjunto de muestras analizadas en forma


continua, bajo las mismas condiciones experimentales, donde se evala un calibrador
(material de referencia cuyo valor es usado como variable independiente en una funcin
de calibracin, controles que son un producto de control con una concentracin fisiolgica
normal o anormal de un mensurando en particular, una muestra y un blanco que
contendr todo lo que contiene las muestras a analizar, excepto el analito.

Objetivo
Realizar una corrida analtica completa para la determinacin de un analito de inters
controlando el proceso analtico y la calidad de los resultados, a travs de comprender la
diferencia entre calibradores y controles.

Fundamento del mtodo (3)


Para el mtodo de la glucosa oxidasa:

La glucosa de la muestra, es oxidada a cido glucnico por accin de la glucosa oxidasa.


El perxido de hidrgeno producido en esa reaccin en presencia de peroxidasa, 4-
aminofenazona (4-AF) y fenol, forma una quinonimina con un pico de absorcin a 505nm
la intensidad de color es proporcional a la concentracin de glucosa de la muestra.

El reactivo puede tomar una ligera coloracin rosada, lo que es normal, pero una
coloracin rojiza puede indicar deterioro. De acuerdo a las buenas prcticas de
laboratorio, se debe considerar lo siguiente para que la estabilidad del reactivo no se
afecte: se debe sacar del refrigerador nicamente durante su uso, reintegrando al mismo
inmediatamente despus de usado; en caso de trasvasar el reactivo a otro recipiente,
como en el caso de los analizadores automticos, no volver sobrantes al frasco original
provisto; En caso de usar pipetas, stas deben estar escrupulosamente lavadas,
enjuagadas con agua destilada y secas y se debe tapar inmediatamente despus de
pipetear.
Mtodo Colocarse guantes

Curva tipo Qu Corrida analtica


realizar?

Etiquetar tubos Etiquetar tubos (Blanco,


(Estndar 1, 2, 3, Control 2, Control 3,
etc.) Muestra 1 o 2.

Adicionar 1mL de
reactivo GOD.

Adicionar 10L de estndar, control


o muestra segn corresponda.

Mezclar

Incubar a temperatura
ambiente por 25 minutos.

Ajustar espectrofotmetro a cero


con reactivo GOD a 500nm

Tomar lecturas y registrar

Construir curva tipo

Obtener concentraciones de controles y muestra interpolando


en curva tipo, con ecuacin de la recta y factor.

Discutir resultados y establecer la


diferencia entre controles y calibradores.
Resultados
Bitcora de resultados Fecha:11/Octubre/2017
Resultados y observaciones
Corrida analtica
Determinacin de: Glucosa Mtodo: Glucosa oxidasa (GOD)
Unidades: mg/dL
Blanco utilizado: reactivo de glucosa oxidasa
seleccionada: 500nm

Datos de estndar
Estndar Concentracin Absorbancia Concentracin %Error
del estndar obtenida del estndar
(mg/dl) calculada
(mg/dl)
1 25 0.109 34.6 38.4
2 50 0.177 54.6 9.2
3 100 0.338 102 2.0
4 200 0.644 192 -4.0
5 300 0.991 294.1 -2.0
6 400 1.377 407.6 1.9
7 700 2.159 637.6 -8.9

Linealidad: Si de 50 a 400 mg/dL.

Clculos para obtencin de la concentracin calculada del estndar en mg/dL


500 + 0.0088
= [ ] = = /
0.0034
0.109 + 0.0088
1 = [ ] = = 34.6 /
0.0034
Clculos para determinar el % de error


= % = 100

34.6 25
1 = % = 100 = 38.4%
25
1.6 2.5
y = 0.0034x + 0.0049 y = 0.0031x + 0.0413
1.4
r=0.998 0.9979
2
1.2

1 1.5

A500nm
A500nm

0.8
1
0.6

0.4
0.5
0.2

0 0
0 100 200 300 400 500 0 200 400 600 800
A Concentracin de estndar (mg/dL) B Concentracin de estndar (mg/dL)

2.5

y = 0.0031x + 0.0456
2 r=0.9975

1.5
A500nm

0.5

0
0 200 400 600 800
C Concentracin de estndar (mg/dL)

Fig. 1 Curvas tipos de estndares de glucosa realizadas a diferentes puntos, cada una incluye ecuacin de la recta y r correspondiente. (A)
Incluye estndares de 25 a 400 mg/dL, (B) Incluye estndares de 25 a 700mg/dL, (C) Incluye estndares de 50 a 700mg/dL.
1.6

y = 0.0034x - 0.0088
1.4 r=0.998

1.2

1
Estndares
A500nm

Control 2
0.8
Control 3
Muestra 2
0.6
Linear (Estndares)

0.4

0.2

0
0 100 200 300 400 500
Concentracin de glucosa (mg/dL)

Fig. 2 Curva tipo de estndar de glucosa, la cul va de 50 a 400 mg/dL, en ella se incluyen los controles y muestra medidos.

450.0
y = 1.0003x - 0.0014
Concentracin calculada (mg/dL)

400.0
R=0.9999
350.0
m=1.0003
300.0
250.0
200.0
150.0
100.0
50.0
0.0
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450
Concentracin terica (mg/dL)

Fig. 3 Grfico para determinar la linealidad del mtodo de 50 a 400 mg/dL.


Datos del suero control
Suero control Conc. del Intervalos Absorbancia Conc. Del
suero mg/dl mg/dL obtenida estndar
calculada
mg/dL
Normal 114 96-132 0.333 100.5
Patolgico 281 240-322 0.782 232.6
alto

Suero control utilizado:


Control 2 = Control normal
Control 3= Control patolgico alto

Datos de las muestras


Conc. obtenida de la muestra
Muestra Conc. real de la
Absorbancia
problema Curva tipo Ecuacin de Factor muestra mg/dL
mg/dl la recta mg/dl mg/dL
1 0.583 170 169.6 177.2 184
2 0.288 88 87.3 85.2 103

Caractersticas de la muestra:
La muestra dos se observaba de color amarillo y un poco menos turbia en comparacin con la
muestra uno, en realidad no podemos describir ms la muestra debido a que se encontraba en
tubos Eppendorf.

Factor utilizado: Estndar de 100mg/dL


= = []
(100)
0.288
2 = = [100] = 85.2/
0.338

Mtodos para calcular la concentracin de controles y muestras problemas:


Interpolacin en la curva tipo
Obtencin de la ecuacin de la recta
Factor de concentracin

Mtodo con mayor error: Interpolacin en la curva tipo


Mtodo con menor error: Ecuacin de la recta
Mtodo ideal para calcular la concentracin de las muestras: Ecuacin de la recta
Anlisis del procesamiento
Identificacin de puntos crticos del Acciones correctivas
proceso
No adicionar el volumen de reactivo Mejorar la tcnica de pipeteo
necesario y el respectivo mensurando

No mezclar de forma adecuada Mezclar por inversin para tener


muestras homogneas

No incubar a la temperatura de Incubar el tiempo especificado por el


anlisis correspondientes, es decir fabricante, si una muestra se debe
dejar que transcurra ms tiempo de incubar 25 minutos y se deber
incubacin entre cada lectura, por respetar el mismo tiempo de lectura
ejemplo, leer una muestra a 30 para todas.
minutos de realizada la reaccin y otra
a 45 minutos.

No ajustar el espectrofotmetro, con el Verificar que el espectrofotmetro este


blanco correspondiente verdaderamente ajustado a cero con
el blanco correspondiente de la
muestra a leer.
Acciones preventivas:
Se debe verificar que las micropipetas se encuentren en el volumen requerido, as como
identificar qu tipo de pipeta se est usando (serolgica o Mohr), del mismo modo la mejor
manera de homogeneizar una muestra es mediante inversin, por lo que siempre deber
realizarse de esta manera, se debe verificar las instrucciones del fabricante para seguir el mismo
mtodo y de esta manera tener resultados muy cercanos a los esperados, siempre se debe
corroborar que el espectrofotmetro este ajustado para evitar errores en las lecturas de
absorbancia.
Importancia del uso de los materiales de control
Calibradores Controles
Validan el mtodo. Validan los resultados del paciente
Se necesita para proceder a analizar Tras analizar el calibrador, se necesita
los controles. para poder analizar la muestra
Diferencias entre los materiales de control
Tienen una concentracin nica y Presenta un intervalo de valores.
exacta Es de material similar al del paciente.
Se usan para la calibracin analtica, Compuesto por uno o varios
es decir realizar curvas tipo mensurandos.
Se usa para validar o asegurar los
resultados de los pacientes y controlar
el sistema analtico (analito, analista,
equipo, reactivos, etc.)
Tabla 1. Resultados grupales para la determinacin de la validacin de resultados, as como el mejor intervalo de concentraciones del
mtodo para la determinacin de concentracin de los controles y muestras. V=Valida.

S E Integrantes valor r sel. V? C2 V? C3 V? m1 m2


mejor r
1 1 Josu 0.9992 50-400 Si 92 No 219 No 86
1 Lesslie 0.994 50-400 No 85 No 221 No 156
2 Jocelyn 0.999 50-400 si 137 No 289 Si 109
2 Lizeth 0.999 50-400 Si 80 No 143 No 254
3 lvaro 0.9996 50-400 Si 85 No 205 No 91
3 Maribel 0.999 50-400 si 92 No 236 No 164
4 Valentina 0.9913 50-400 No 112 Si 229 No 112
4 Brenda 0.999 50-400 No 97 Si 236 No 262
5 Ana 0.9988 50-400 S 102 s 227 No 161
Paulina
5 Giovanny 0.9997 50-400 S 84 No 209 No 82

2 1 Eliseo 0.998 50-400 s 91 Si 248 Si 153 99


1 Jorge 0.9985 50-400 S 67 No 216 No 163
2 Citlali 0.998 50-400 S 100 Si 232 No 85
2 Janet 0.9992 50 - 400 S 95 No 266 Si 169
3 Juan 0.999 50 - 400 S 102 Si 222 No 158
3 Hcmar 0.9989 50-400 S 94 No 235 No 87
4 Alma 0.9988 25-400 S 86 No 221 No 198
4 Gabriela 0.9983 50-400 S 90 No 249 Si 67
5 Aarn 0.9999 50-400 si 105 Si 250 Si 92

3 1 Irving 0.9985 25-400 S 81 No 214 No 171


2 Yuriko 0.9996 25-400 S 96 Si 233 No 162
2 Edgar 0.9995 50-400 Si 100 Si 231 No 159 93
3 Andrea 0.9989 50-400 si 93 No 218 No 166 94
3 Paola 0.99 25-400 Si 93 No 255 Si 174 93
4 Jacqueline 0.9989 25-400 Si 107 Si 222 No 93
4 Carlos 0.9985 50-400 Si 108 Si 247 Si 195
Discusin
Se ha mencionado que el aseguramiento de la calidad se lleva a cabo mediante el control
de calidad interno y la evaluacin instituciones externas; con el fin de conocer cmo se
lleva a cabo la evaluacin interna en los laboratorios se realiz el mtodo de la glucosa
oxidasa.
En los laboratorios usualmente no se tienen kits de estndares de diferentes
concentraciones, sin embargo en este caso los ocupamos para poder realizar una curva
tipo, con las cuales obtuvimos diferentes grficas (Fig. 1) al considerar diferentes
intervalos de concentraciones, donde el figura 1A podemos observar una r de 0.998,sin
embargo la ecuacin de la recta de esta no fue considerada debido a que se evalan de
los 25 a los 400mg/dL, mientras que el fabricante de los estndares ocupados nos dice
que su mtodo tiene linealidad de concentraciones de 50 a 400 mg/dL, lo cual podemos
corroborar con la figura 3 al determinar la pendiente muy cercana a la unidad (1.0003), si
se ocupara la ecuacin de la recta de la figura 1A no podramos calcular las
concentraciones con confiabilidad debido a que se estara integrado un punto (25mg/dL)
que modificara la linealidad del mtodo y con ellos los resultados de concentracin. Por
la misma razn las curvas tipo de la figura 1B (25-700 mg/dL) y la figura 1C (50-700
mg/dL) no fueron consideradas agregando que su r es menor a 0.998.
Aun considerando la curva tipo con la mejor r, de acuerdo al intervalo donde el fabricante
afirma que su mtodo es lineal se tuvieron porcentajes de error significativos a los 50 y
200, sin embargo estos podemos adjudicarlos a errores sistemticos o del analista,
mientras que el primer y ltimo punto (25 y 700 mg/dL) adems de sumar el error del
analista se debe a que estos punto no se encuentran del intervalo donde el analista refiere
linealidad, verificando as que cumple con los parmetros establecidos.
Con la curva tipo seleccionada se llevaron a cabo clculos para la determinacin de la
concentracin de un control normal, un control patolgico y una muestra, para el control
normal la concentracin obtenida (100.5 mg/dL) cae dentro del intervalo de
concentraciones para el mismo (96-132 mg/dL), mientras que el control patolgico alto
no se encuentra dentro de su intervalo de concentraciones permitido (240-322), con
estos resultados, no podramos validar los resultados obtenidos de nuestras muestras,
que en este caso, para la muestra dos fue 87.3 mg/dL, cuando debera ser de 103 mg/dL,
pero para este caso consideremos tambin los errores del analista al pipetear, de los
cuales an no estamos exentos, sin embargo en el caso hipottico que se trabajara
adecuadamente de tendra que determinar en qu parte del mtodo se encuentra el error,
se debera evaluar nuevamente los controles y con ello determinar si se desechan o se
siguen utilizando, o determinar si es un error por parte del equipo.
De manera grupal observamos en la tabla 1, que ninguno pudo determinar la verdadera
concentracin de las muestras, aun los pocos cuyas concentraciones tanto de estndar
como de control se encuentran dentro de los parmetros establecidos, sin embargo no
conocemos la linealidad de su mtodo, por lo tanto no sabemos si podra deberse a eso
o a errores del analista, aunque existe una mayor posibilidad de que se deba a este
ltimo.
Conclusiones
El mtodo de la glucosa oxidasa, de este fabricante si es lineal de 50 a 400 mg/dL.
No se pueden validar los resultados de la muestra dos.
Se siguen cometiendo errores sistemticos, por parte del analista.
REFERENCIAS
1. Westgard, J. (2013). Prcticas Bsicas de Control de la Calidad. Edicin Wallace
Coulter. Pp. 3-5
2. Westgard, J. (2014). Sistemas de Gestin de la Calidad para el Laboratorio Clnico.
Edicin Wallace Coulter. Pp.24-25
3. GT-Lab. GLUCOSA Liquis plus. Disponible en:
http://www.gtlab.com.ar/UserFiles/mediaManager/1/b180b50d7d709df5b606a3a7
2988ad86fdeabae4_cf9dc0b65e16472e907b45147bbbaa8a12a6c947.pdf

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