UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICAS

CARRERA DE BIOQUIMICA
CATEDRA DE BIOTECNOLOGIA

INFORME N°3
DETERMINACION DE ENZIMAS HIDROLITICAS POR
DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES - TÉCNICA DE
DINITRO SALICILICO

NOMBRE: UNIV. KATHLEN RODRÍGUEZ ZAMBRANO

AUXILIAR: LUIS ANGEL CHURATA CHAVEZ

DOCENTE: DRA. TERESA ALVAREZ ALIAGA

DIA-LAB.: LUNES

SUB-GRUPO: A

2021
 DETERMINACION DE ENZIMAS HIDROLITICAS POR
DETERMINACION DE
AZUCARES REDUCTORES - TÉCNICA DE DINITRO SALICILICO

A. INTRODUCCIÓN:
La celulasa es una enzima hidrolasa que realiza la hidrólisis de la celulosa en moléculas
de glucosa libre.
La celulosa es un componente de la pared celular vegetal muy resistente a la hidrólisis, y
por tanto a la digestión. La celulosa está formada por un polímero de unidades
de glucosa unidas mediante enlaces glucosídicos tipo β-1,4. Las plantas contienen entre
un 35 y un 50% de celulosa. La celulasa actúa rompiendo estos enlaces β-1,4glicosídicos
de la celulosa transformándola en glucosa libre.  
Para la hidrólisis de la celulosa se necesita la acción sinérgica de un grupo de celulasas.
El sistema de celulasa típico se compone de tres tipos de enzimas: la endo- β- 1,4-
glucanasa, exo- β- 1,4-glucanasa y la β-1,4-glucosidasa. Estas enzimas son producidas
por bacterias y hongos, como por ejemplo, Aspergillus, Cladosporium, Fusarium,
Penicilium o Neurospora. Aunque también las pueden producir otros tipos de organismos
como las termitas.
La celulasa es una hidrolasa que puede degradar la celulosa de los alimentos vegetales
mejorando el valor nutricional de los alimentos y permitiendo la digestión de parte de la
fibra presente en los alientos. Ingerir enzimas celulasas ayuda a romper las paredes
celulares de las plantas, esto permite obtener una mayor cantidad de energía, al convertir
la celulosa en unidades de glucosa. La glucosa es la principal fuente de energía para el
cuerpo humano, por lo tanto la celulasa nos ayuda a obtener mayor energía de las
plantas. Además, la glucosa que proporciona la celulosa se libera lentamente del cuerpo y
nos permite mantener unos niveles óptimos de glucemia durante más tiempo.
El consumo de celulasas también puede ayudar a disminuir la viscosidad intestinal
acelerando la digestión de absorción de otros nutrientes que verían su absorción
ralentizada por efecto de la fibra.
Por último se ha utilizado celulasa en el tratamiento de materias extrañas no digeridas
localizadas en el tracto intestinal (benzoares), aunque no existe consenso acerca de la
efectividad del tratamiento con esta enzima.

Método ácido dinitrosalicílico (DNS):

En disolución alcalina el azúcar se hidroliza produciendo un compuesto que se reduce a
un grupo nitro del DNS, para dar el producto monoamino correspondiente. Esta reacción
da un producto colorido en solución alcalina. El original procedimiento de Dahlquist ha
sido modificado en un proceso automatizado para análisis de azucares 26 totales
producidos por la hidrólisis de polisacáridos que no contengan almidón. Para este se
requiere tener estándares similares a la muestra.
Este método determina la presencia de grupos carbonilos libres (C=O), los llamados
azúcares reductores. Se basa en la utilización de ácido 3,5- dinitrosalicílico para provocar
la oxidación de los azúcares y, al mismo tiempo, su propia reducción, desarrollándose la
siguiente reacción:
 Un mol de azúcar reaccionará con un mol de ácido 3,5-dinitrosalicílico, dando lugar a una
relación estequiométrica que permite conocer la cantidad de azúcares reductores
presentes en la muestra. Esta reacción, además, se puede seguir fácilmente al
espectrofotómetro ya que da lugar a una reacción colorimétrica: el ácido 3,5-
dinitrosalicílico es de color amarillo, mientras que la aparición del ácido 3-amino, 5-
nitrosalicílico provoca un viraje a pardo oscuro-marrón, cuya intensidad será, proporcional
a la cantidad de azúcares reductores.

B. OBJETIVOS:
 OBJETIVO GENERAL:
Obtener la actividad enzimática de la enzima celulasa, para observar la presencia o no de
azucares reductores, debido a la degradación de la celulosa

 OBJETIVO ESPECÍFICO:
 Realizar el método de ácido dinitrosalicílico (DNS) que ayuda a determinar la
presencia de azucares reductores en la muestra

C. METODOLOGIA:

Actividad enzimática:

2% del
inoculo Colocar
Poner 3ml
papel filtro

100ml de
T0 T24 T48 T72
H2O

Llevarlo a
centrifugar a
5000rpm por
10min
B C T0 T24 T48 T72
 M S H2O
Blanco 450µL 50µL 50°C
Control 450µL
Test 1, 2, 3 y 4 50µL 450µL Poner papel filtro 60min
en los tubos Incubar

M DNS
Blanco 750µL
Control 50µL 750µL
Test 1, 2, 3 y 4 750µL

Llevarlo a Leer a 540nm y

ebullición anotar sus
durante 5 min. absorbancias.

D. RESULTADOS:

Actividad Enzimática:
Abs.
Blanco 1,250
Control 0,181
Test 1 0,341
Test 2 0,197
Test 3 0,203
Test 4 0,136

Calculos:
TEST- CONTROL= Abs real
0,341 – 0,181= 0,16
0,197 – 0,181= 0,016
0,203 – 0,181= 0,022
0,136 – 0,181= -0,045

[C] g/L ABS

0,1 0,181
0,2 0,16
0,4 0,016
 0,6 0,022
0,8 -0,045

0.2
0.15 f(x) = − 0.324939024390244 x + 0.203274390243902
R² = 0.892237013188583

Absorbancias
Y= -0,3249x+0,2033 0.1
Test 1: 0.05
Y= -0,3249x+0,2033
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
-0.05
-0.1
[C] g/L

y−0,2033 0,16−0,2033
x= = =0,133 g/ L
−0,3249 −0,3249
1mol Glu 1 μmol Glu 1L μmol
0,133 g/ L× × × =0,738
180 g Glu 1 ×10 mol Glu 1000 mL
−6
mL
μmol
0,738
mL UI
UI /mL= × 25=0,3075
60 min mL

Test 2:
Y= -0,3249x+0,2033
y−0,2033 0,016−0,2033
x= = =0,576 g/ L
−0,3249 −0,3249
1 mol Glu 1 μmol Glu 1L μmol
0,576 g/ L × × × =3,2
180 g Glu 1 ×10 mol Glu 1000 mL
−6
mL
μmol
3,2
mL UI
UI /mL= ×25=1,33
60 min mL

Test 3:
Y= -0,3249x+0,2033
y−0,2033 0,022−0,2033
x= = =0,558 g / L
−0,3249 −0,3249
1 mol Glu 1 μmolGlu 1L μmol
0,558 g/ L× × × =3,1
180 g Glu 1 ×10 mol Glu 1000 mL
−6
mL
μmol
3,1
mL UI
UI /mL= ×25=1,292
60 min mL

Test 4:
Y= -0,3249x+0,2033
 y−0,2033 −0,045−0,2033
x= = =0,764 g /L
−0,3249 −0,3249
1 mol Glu 1 μmol Glu 1L μmol
0,764 g / L × × × =4,24
180 g Glu 1×10 mol Glu 1000 mL
−6
mL
μmol
4,24
mL UI
UI /mL= ×25=1,76
60 min mL

E. DISCUSIÓN:
Al obtener las absorbancias se pudo observar que no se obtuvo los resultados esperados,
ya que el blanco resulto tener una mayor absorbancia, mientras que los test y el control
obtuvieron una menor absorbancia. Esto puede ser debido al mal cargado de las
muestras en los tubos, pudiéndose existir una contaminación de los mismos.

F. CONCLUSIÓN:
Se obtuvo la actividad enzimática de la enzima celulasa, y además se realizó con el
método de DNS para observar la presencia o no de azucares reductores, debido a la
degradación de la celulosa y su respectivo reaccion redox.

G. BIBLIOGRAFIA:

 Borrero, F. (2012) Determinación de la Demanda Química de Oxígeno en Aguas

Naturales o de Desperdicios. Revisado de:
https://sites.google.com/site/portafolioelectronicochem350/laboratorio/
determinacion-de-la-demanda-quimica-de-oxigeno-en-aguas-naturales-o-de-
desperdicios
 a/a (2006) Biorremediación: organismos que limpian el ambiente. Revisado de:
https://www.porquebiotecnologia.com.ar/Cuadernos/El_Cuaderno_36.pdf