QUÍMICA ANALÍTICA GENERAL

Informe
TRABAJO PRÁCTICO N° 4

ESPECTROFOTOMETRÍA

Alumnas: Melina Alfaro Meriles, Leila Mailén Acosta, Florencia Garetto

-2020-
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INTRODUCCIÓN

En el siguiente trabajo práctico se realizó una cuantificación

espectrofotométrica de colorantes presentes en gelatinas comerciales. En
particular se utilizó la técnica de espectrofotometría de absorción UV visible,
con el objetivo de cuantificar los colorantes amarillo ocaso y amaranto
presentes en las gelatinas comerciales.

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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Preparación de las soluciones:

AMARANTO: solución madre (0.1988 ± 0.0002) g/L

Solución Solución madre Volumen final Concentración

amaranto (mL) (mL) (g/L)
1 0.1 50 0.0003976
2 1.0 50 0.003976
3 2.0 50 0.007952
4 3.0 50 0.011928
5 4.0 50 0.015904
6 5.0 50 0.01988

Cálculo de concentraciones:

0.1988 g ------------- 1000 mL 1.988x10-5 g ---------- 50 mL

1.988x10-5 g =x---- 0.1 mL 3.976x10-4 g =x --- 1000 mL

El procedimiento se repite con el resto de las soluciones, en el volumen

correspondiente de la solución madre, ya que todas se enrazan en un matraz
de 50 mL.

AMARILLO OCASO: solución madre (0.2001 ± 0.0002) g/L

Solución Solución madre Volumen final Concentración

amarillo ocaso (mL) (g/L)
(mL)
1 0.1 50 0.0004002
2 1.0 50 0.004002
3 2.0 50 0.008004
4 3.0 50 0.012006
5 4.0 50 0.016008
6 5.0 50 0.02001

Cálculo de concentraciones:

0.2001 g --------------- 1000 mL 2.001x10-5 g ---------- 50 mL

2.001x10-5 g =x ----- 0.1 mL 4.002x10-4 g =x -------- 1000mL

El procedimiento se repite con el resto de las soluciones, en el volumen

correspondiente de la solución madre, ya que todas se enrazan en un matraz
de 50 mL.

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 2. Obtención de las curvas espectrales:

Para ello, se debe hacer correr la línea de base con agua destilada entre 600
nm y 380 nm para obtener el “cero de absorbancia”.
Posteriormente, tomar la solución número 4 de cada colorante en el mismo
rango (600-380) nm; las cuales son soluciones de concentración intermedia,
por lo cual nos será de mayor “precisión” para obtener las longitudes de onda
de cada colorante y así obtener el valor del máximo de la longitud de onda.

Recordar que, las gelatinas contienen ambos colorantes y a pesar de que sus
máximos se encuentran a diferente longitud de onda, ambos colorantes
absorben a las dos longitudes de onda. Entonces, se debe realizar la curva de
calibración para cada colorante, a cada longitud de onda.

3. Curvas de calibración de ambos colorantes:

Recordar que se empieza a medir las Abs en el espectrofotómetro, desde el

valor menor a mayor concentración. De esta forma, se obtendrán los valores
del Coeficiente de extinción (Ɛ) a las diferentes longitudes de onda para
finalmente calcular las concentraciones de los colorantes, en los productos
comerciales, gelatinas de marca Godet – sabor frutilla y Exquisita – sabor
cereza.
Curvas de calibración obtenidas en el laboratorio, medidas con “Autozero”.

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Grafico 1.1: Curva de calibración del colorante Amaranto, a 520,5 nm.

Grafico 1.2: Curva de calibración del colorante Amaranto, a 482,5 nm.

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Tabla 1.1: Datos recolectados del colorante Amaranto a 520,5 nm y 482,5
nm.

Solución madre Concentración

Solución λ=520,5 nm λ=482,5nm
Amaranto (ml) (g/L)
1 0,1 0,0003976 0,011 0,011
2 1 0,003976 0,107 0,103
3 2 0,007952 0,252 0,203
4 3 0,011928 0,396 0,293
5 4 0,015904 0,541 0,399
6 5 0,01988 0,729 0,506
Pendiente ε * b
(L/g . cm) 36,74915736 25,17333299

Ordenada -0,028388535 0,000608917

Grafico 2.1: Curva de calibración del colorante Amarillo Ocaso, a 520,5 nm.

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Grafico 2.2: Curva de calibración del colorante Amarillo Ocaso, a 482,5 nm

Curva de calibración – Amarillo Ocaso a 482,5 nm

Tabla 1.2: Datos recolectados del colorante Amarillo Ocaso a 520,5 nm y

482,5 nm.

Solución madre
Concentración
Solución Amarillo Ocaso λ=520,5 nm λ=482,5nm
(g/L)
(ml)
1 0,1 0,0004002 0,009 0,019
2 1 0,004002 0,081 0,168
3 2 0,008004 0,156 0,32
4 3 0,012006 0,245 0,502
5 4 0,016008 0,317 0,65
6 5 0,02001 0,412 0,833
Pendiente ε * b
(L/g . cm) 20,37051048 41,27333687
Ordenada -0,001832337 -0,000359334

4. Determinación de la absorbancia de las muestras:

Gelatina Exquisita de cereza Gelatina Godet de frutilla

Masa: (2,5181 ± 0,0002) g Masa: (2,5359 ± 0,0002) g
Dilución: 1/10 Dilución: 1/10
Absorbancia Absorbancia
520.5 nm 482.4 nm 520.5 nm 482.4 nm
0.493 0.288 0.133 0.441
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 5. Cálculo del contenido de colorante en las muestras analizadas:

Lambert & Beer: 𝐴𝜆 = 𝜀𝜆 ∙ 𝑏 ∙ 𝐶

𝐴𝜆1 𝑇 = 𝐴𝜆1 𝑋 + 𝐴𝜆1 𝑌

𝐴𝜆2 𝑇 = 𝐴𝜆2 𝑋 + 𝐴𝜆2 𝑌

Para cada gelatina:
- Amaranto Amarillo Ocaso
λ de trabajo / Ordenada al Ɛ (L/g) Ordenada al Ɛ (L/g)
nm origen origen
482,5 0,0006 25,173 -0,0004 41,273
520,5 -0,0284 36,749 -0,0018 20,371

𝐴482,5 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 𝜀𝐴𝑚𝑎𝑟482,5 ∙ 𝑏 ∙ [𝐴𝑚𝑎𝑟] + 𝜀𝐴.𝑂𝑐482,5 ∙ 𝑏 ∙ [𝐴. 𝑂𝑐]

𝐴520,5 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 𝜀𝐴𝑚𝑎𝑟520,5 ∙ 𝑏 ∙ [𝐴𝑚𝑎𝑟] + 𝜀𝐴.𝑂𝑐520,5 ∙ 𝑏 ∙ [𝐴. 𝑂𝑐]

Recordando que: 𝐴𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 = 𝐴482,5 + 𝐴520,5

Si bien inicialmente se iba a determinar la concentración de ambos colorantes

en cada gelatina, se ha decidido sólo determinar la concentración del colorante
Amaranto en cada gelatina.

Entonces, para el cálculo de la concentración del colorante se determina

directamente desde la ecuación de Lambert & Beer:
𝐴𝜆 = 𝜀𝜆 ∙ 𝑏 ∙ 𝐶

Sabiendo que el Amaranto absorbe a 520,5 nm, se utilizara las absorbancias a

esa longitud de onda para la determinación del colorante presente.

Gelatina de cereza – Exquisita:

𝐴520,5 = 𝜀520,5 ∙ 𝑏 ∙ [𝐴𝑚𝑎𝑟𝑎𝑛𝑡𝑜] + 𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛𝑎𝑑𝑎 𝑎𝑙 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛

b= 1cm
Ordenada al origen= -0,0284
Ɛ520,5= 36,749 L·g-1·cm-1
A520,5= 0,493

0,493 + 0,0284
[𝐴𝑚𝑎𝑟𝑎𝑛𝑡𝑜] = = 0,014188 𝑔/𝐿
36,749 ∙ 𝐿 ∙ 𝑔−1 ∙ 𝑐𝑚−1 ∙ 1𝑐𝑚

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 ∆𝑉 𝑚𝑎𝑡𝑟𝑎𝑧 ∆𝑉 𝑚𝑎𝑡𝑟𝑎𝑧 ∆𝑉 𝑏𝑎𝑙𝑙 𝑝𝑖𝑝𝑒𝑡𝑎 ∆ 𝑚 𝑏𝑎𝑙𝑎𝑛𝑧𝑎
[∆𝑀] = [ + + + ] 𝑥 [𝐴𝑚𝑎𝑟𝑎𝑛𝑡𝑜]
1000 𝑚𝐿 10𝑚𝐿 1 𝑚𝐿 𝑚𝑎𝑠𝑎
0,05 𝑚𝐿 0,02 𝑚𝐿 0,006𝑚𝐿 0,0002 𝑔 𝑔
[∆𝑀] = [ + + + ] 𝑥 0,014188 = 1,288𝑥10−4 𝑔/𝐿
50 𝑚𝐿 10𝑚𝐿 1 𝑚𝐿 2,5181 𝐿

[𝑨𝒎𝒂𝒓𝒂𝒏𝒕𝒐] = (𝟎, 𝟎𝟏𝟒𝟐 ± 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟏)𝒈/𝑳

Gelatina de frutilla – Godet:

𝐴520,5 = 𝜀520,5 ∙ 𝑏 ∙ [𝐴𝑚𝑎𝑟𝑎𝑛𝑡𝑜] + 𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛𝑎𝑑𝑎 𝑎𝑙 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛

b= 1cm
Ordenada al origen= -0,0284
Ɛ 520,5 = 36,749 L·g-1·cm-1
A 520,5= 0,133

0,133 + 0,0284
[𝐴𝑚𝑎𝑟𝑎𝑛𝑡𝑜] = = 0,004392 𝑔/𝐿
36,749 ∙ 𝐿 ∙ 𝑔−1 ∙ 𝑐𝑚−1 ∙ 1𝑐𝑚

0,05 𝑚𝐿 0,02 𝑚𝐿 0,006𝑚𝐿 0,0002 𝑔 𝑔

[∆𝑀] = [ + + + ] 𝑥 0,004392 = 3,987𝑥10−5 𝑔/𝐿
50 𝑚𝐿 10𝑚𝐿 1 𝑚𝐿 2,5359 𝑔 𝐿

[𝑨𝒎𝒂𝒓𝒂𝒏𝒕𝒐] = (𝟎, 𝟎𝟎𝟒𝟑𝟗 ± 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟎𝟒)𝒈/𝑳

CONCLUSIÓN

La determinación de la concentración por el método espectrofotométrico resulta

beneficioso, siendo que no destruye la muestra de trabajo. Por ende, una vez
finalizada su estudio se puede conservar para su posterior utilización.
En el práctico, tras la obtención de la curva espectral de los colorantes
amaranto y amarillo ocaso se dejó en manifiesto que, a las longitudes de onda
520.5 nm y 482.5 nm respectivamente, tienen un máximo de absorbancia.
Luego se realizan las curvas de trabajo, al máximo correspondiente para cada
uno de los colorantes, utilizando las distintas diluciones de concentración
conocidas.
Posteriormente, se hizo una medición fotométrica de las gelatinas a analizar.
Se llegó a la conclusión de que la muestra necesita ser diluida para realizar
esta medición, ya que el equipo satura por su alta concentración que fue
tomada de la solución “madre” contenida en un matraz de 50 mL. Entonces,

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para su correcta medición, se ha diluido 1 mL de la solución en un matraz de
10 mL.
Finalmente, queda en evidencia la alta concentración del colorante amaranto
presente en la gelatina de cereza, otorgándole su color característico.

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