Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Química Farmacéutico Biológica

Laboratorio de Bioquímica Celular y de los
Tejidos I

Informe de práctica:
“Curva estándar de proteínas”
Profesora: Araceli García del Valle

Equipo 6:
- Andrade Ayala Valeria
- Miranda Aguilar Melissa
- Quintos Alba Jannet

Grupo: 1401

Fecha de entrega: 07 de septiembre de 2022

 Curva estándar de proteínas

Objetivos
- Desarrollar y analizar una curva estándar.
- Determinar la concentración de albúmina en la clara de huevo por el método de
Lowry.

Resumen
Se realizó una curva estándar de proteínas a partir de distintas disoluciones con
concentraciones conocidas.
Para realizar esta práctica se empleó el método colorimétrico de Lowry, utilizando tubos de
ensayo que contenían la solución problema realizada con albúmina de huevo y otras
disoluciones preparadas usando el espectrofotómetro.
Primero se colocaron tres sustancias (agua destilada, solución cupro-alcalina y una disolución
de reactivo de Fenol-Ciocalteu con NaOH 0.1 N) en el blanco, completando los 3.1 mL
necesarios.
En los tubos 1, 2 y 3 se colocaron 0.3, 0.5 y 0.7 mL de la solución problema de proteínas
respectivamente; 1.7, 1.5 y 1.3 mL de agua destilada y para completar, 1.0 mL en cada tubo
de solución cupro-alcalina, con ayuda de las micropipetas,
Después en los tubos 4, 5, 6 y 7, se colocaron 0.1, 0.2, 0.4 y 0.8 mL de la solución patrón con
una micropipeta y de igual manera se completó el volumen de 3 mL con solución
cupro-alcalina y agua destilada. Al terminar de llenar los tubos de ensayo, se agitaron y se
dejaron reposar durante 10 minutos. Posteriormente se agregó 0.1 mL de la disolución del
reactivo de Fenol-Ciocalteu con NaOH 0.1 N, con ayuda de una una micropipeta en los tubos
numerados del 1-7. Se agitaron inmediatamente y se dejaron reposar por 20 minutos.
Finalmente se midió la absorbancia a 640 nm en el espectrofotómetro usando celdas de
referencia.

Resultados
 Figura 1. Reacción entre una proteína con el reactivo de Biuret y de Folin-Ciocalteu.

Fotografía 1. Evidencia del laboratorio tubos problemas de curva estándar.

Fotografía 2. Evidencia del laboratorio curva estándar proteína

Tabla 1. Contenido teórico para la preparación de cada tubo muestra.

Tubo Blanco 1 2 3 4 5 6 7
Solución - 0.3 0.5 0.7 - - - -
problema
de
proteínas
(mL)

Solución - - - - 0.1 0.2 0.4 0.8

patrón de
proteínas
(mL)

Agua 2.0 1.7 1.5 1.3 1.9 1.8 1.6 1.2

destilada

Reactivo 3 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Agitar y dejar reposar 10 minutos

Reactivo 4 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

Agitar inmediatamente y dejar reposar 20 minutos

En la siguiente tabla se muestran los valores obtenidos en cada tubo muestra, cuyos datos se
usaron para realizar la curva estándar de proteínas, absorbancia en función de la
concentración de la solución patrón de la albúmina.

Tabla 2. Valores de concentración y absorbancia de la solución problema y solución patrón.

Tubo Solución Solución patrón Concentración Absorbancia
problema (mL) (mL)

Blanco — — 0 0

1 0.3 — 0.055 0.139

2 0.5 — 0.078 0.197

3 0.7 — 0.00875 0.243

(0.019-Diluida)

4 — 0.1 0.01 0.010

5 — 0.2 0.02 0.011

6 — 0.4 0.04 0.115

7 — 0.8 0.08 0.213

A continuación se presenta la gráfica de la curva estándar de la absorbancia en función de la

concentración de la solución patrón con base en los datos obtenidos en la práctica
experimental. Esta gráfica se ajusta a un modelo lineal de la forma 𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
Análisis de resultados
La reacción que se muestra en la figura 1 es la reducción de iones de cobre en soluciones
alcalinas, lo que forma un complejo con los enlaces peptídicos. Posteriormente se tiene la
reducción del reactivo de Folin-Ciocalteu por el complejo cobre-enlace peptídico, la cual
causa un cambio de color azulado en la solución, con una absorción en el rango de 640 a750
nm.
Una vez realizada la curva estándar se interpola la absorbancia de la solución problema para
obtener la concentración real de esta. Los resultados de la interpolación para el valor real de
la concentración van desde el 0.055, 0.078 y 0.00875 par años tubos problemas 1, 2 y 3
respectivamente. Este último resultado siendo más bajo que el resto debido a la dilución
realizada.
Se tomaron solo 3 puntos para realizar la gráfica de la curva estándar de proteínas, ya que
hubo un error aleatorio en los tubos 4 y 5 al medir 0.1 y 0.2 mL de la solución patrón de
proteínas, el error se cometió al medir con la micropipeta de 200 mL; no se realizó bien la
conversión quedando menos de los 3.1 mL necesarios; 10 minutos después se agregaron los
mL faltantes para completar los 0.1 y 0.2 mL y se dejó reposando 20 minutos más, sin
embargo, no hubo reacción alguna, por lo que al medir la absorbancia en el espectrofotómetro
arrojó un valor muy bajo.
Para el tercer tubo se hizo una dilución (50:50) ya que el valor de concentración fue muy alto,
por lo que no entraba dentro del rango de la curva estándar, teniendo que colocar 2 mL de la
solución y 2 mL de agua destilada disolviendo muy bien, por ello en la tabla 2 la absorbancia
se dividió entre 2 y de igual manera se interpola (el valor entre 2) en la gráfica.

En seguida se tomaron dichas concentraciones para calcular cuantos gramos habían en cada
muestra obteniendo los siguientes resultados:
1. 0. 043 𝑚𝑔/0. 3 𝑚𝐿 𝑐𝑙𝑎𝑟𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑖𝑑𝑎 (1: 1000)
𝑥1000
43 𝑚𝑔/0. 3 𝑚𝐿 𝑐𝑙𝑎𝑟𝑎
𝑥 − 100 𝑚𝐿
𝑥 = 14333. 33/1000
14.33 g/100 mL

2. 0. 07 𝑚𝑔/0. 5 𝑚𝐿 𝑐𝑙𝑎𝑟𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑖𝑑𝑎 (1: 1000)

𝑥1000
70 𝑚𝑔/0. 5 𝑚𝐿 𝑐𝑙𝑎𝑟𝑎
𝑥 − 100 𝑚𝐿
𝑥 = 14000/1000
14 g/100 mL

3. (0. 039 𝑥2)𝑃𝑜𝑟 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑒𝑐𝑡𝑢𝑟𝑎

0. 078 𝑚𝑔/0. 7 𝑚𝐿
𝑥1000
 78 𝑚𝑔/0. 7 𝑚𝐿 𝑐𝑙𝑎𝑟𝑎
𝑥 − 100 𝑚𝐿
𝑥 = 11142. 86/1000
11.14 g/100 mL

Media: 13.16 g/100 mL

Notamos que de los cálculos por separado el más cercano a 11 g/100 mL es el tercero, que
fue el tubo diluido.
El valor de la media, se acerca un poco más, pero tampoco entra en el rango de la
concentración.
Teniendo el valor teórico promedio de concentración de la albúmina reportado en la literatura
que es de 11 g/100 mL, podemos notar que los resultados obtenidos experimentalmente
comparados con el teórico se encuentran por encima, esto se puede presentar por distintas
variaciones como lo son; las condiciones de vida de la gallina o que el huevo tuvo una mayor
maduración o incluso el tratamiento antes de la comercialización aumentando su
concentración.
También se toma en cuenta el almacenamiento, temperatura, humedad, posición, entre otras
cosas.

Conclusiones
Los objetivos de la práctica se cumplieron, ya que se logró desarrollar y analizar la curva
estándar de una proteína, que en este caso fue la albúmina y a su vez determinar la
concentración de la clara de huevo por el método colorimétrico y cuantitativo de Lowry.
La curva estándar es un proceso analítico que relaciona la absorbancia en función de la
concentración, de modo que la calibración se realiza para obtener la señal de respuesta como
función de la concentración real del analito.
El método de Lowry es un método colorimétrico cuantitativo de proteínas basado en la rx de
Biuret y en la rx de reducción dada por el reactivo de Folin-Ciocalteu, favoreciendo la
producción de una solución color azul, que aunque resulta ser muy sensible ante muestra
diluidas, se debe dejar reposar con el objetivo de obtener la intensidad adecuada del color
proporcional a la concentración proteica de la muestra.

Referencias
1. Aguilar L, García A, Corona T. Manual de Prácticas de Bioquímica Celular y de los
Tejidos I. Versión 1. Ciudad de México; 2018.