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Datos informativos:
Integrantes: Apunte Denise, Espinosa Melany, Muñoz Diana, Pincay Amelia, Pinchao
Brayan, Silva Pamela
Carrera: Ingeniería Bioquímica
Ciclo Académico: Septiembre – Marzo 2017
Asignatura: Ingeniería de las Enzimas
Nivel: Octavo “U”
Área Académica: Profesional
Profesor: Ing. Cecilia Carpio
Práctica de Laboratorio N°: 8
Fecha de Realización: 09 / 01 / 2018
Fecha de Presentación: 17 / 01 / 2018
TEMA:
I. OBJETIVO:
OBJETIVO GENERAL
Evaluar los métodos de absorción en hueso calcinado y atrapamiento en alginato para la
inmovilización de invertasa de levadura.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Analizar la actividad enzimática de la invertasa de levadura tras su inmovilización en
hueso calcinado y alginato de calcio
Determinar el rendimiento de inmovilización de los métodos de absorción en hueso
calcinado y atrapamiento en alginato
II. CÁLCULOS Y RESULTADOS:
Tabla N° 1: Datos obtenidos por el método de adsorción con el hueso calcinado
Parámetros Valor
Peso Glc (g) 50.0000
Peso Sol. (g) 24,9952
Glc (mg/ml) 2,0003
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.
Vol. Std Peso Glc (g) Vol. Std Peso total Glc (mg/ml) Absorb (540
(ml) (ml) (g) nm)
0,200 0,1973 0,8000 0,9861 0,4002 0,2130
0,400 0,3912 0,6000 0,9771 0,8008 0,4400
0,600 0,5976 0,4000 0,9872 1,2109 0,6720
0,800 0,8038 0,2000 1,0007 1,6067 0,9010
1,000 0,9794 0,0000 0,9794 2,0003 1,0960
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.
Término Valor
Pendiente (a) 0,5559
Valor independiente (b) -0,0048
1/a 1,7986
-b/a 0,0088
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.
Gráfico N° 2: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del sobrenadante del
grupo 1.
Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del sobrenadante
0.6
[Glucosa] (mg/ml)
0.5
0.4
0.3 y = 0.0755x + 0.0088
0.2 R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Gráfico N° 3: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del primer lavado del
grupo 1.
0.4
0.3
y = 0.0971x + 0.0088
0.2 R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Gráfico N° 4: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del segundo lavado del
grupo 1.
0.3
0.3
0.2
0.2 y = 0.0072x + 0.0088
0.1 R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Gráfico N° 5: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del tercer lavado del grupo
1.
Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del lavado 3
0.3
[Glucosa] (mg/ml)
0.3
0.2
0.2
0.1 y = 0.0036x + 0.0088
R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Gráfico N° 6: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del sobrenadante del
grupo 2.
0.3
0.2
Gráfico N° 7: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del primer lavado del
grupo 2.
0.3
0.3
0.2
0.2 y = 0.0612x + 0.0088
0.1 R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Gráfico N° 8: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del segundo lavado del
grupo 2.
Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del lavado 2
0.3
[Glucosa] (mg/ml)
0.2
0.2
0.1 y = 0.0036x + 0.0088
0.1 R² = 1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Gráfico N° 9: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del tercer lavado del grupo
2.
0.2
0.2
0.1
y = 0.0018x + 0.0088
0.1 R² = 1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
[Glu] (mg/ml)
1.5
y = 0.4019x + 0.0115
1 R² = 0.9964
0.5
0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
𝑔
𝑚𝑔 ∗
1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 103 𝑢𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐺𝑙𝑢 1 𝑢𝑚𝑜𝑙 𝑆𝑎𝑐 𝑉𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
𝐴𝑐𝑡. = 𝑃𝑒𝑛𝑑.∗ 𝐿 ∗ ∗ ∗ ∗
𝑚𝐿 ∗ 𝑚𝑖𝑛 𝑃𝑀 𝐺𝑙𝑢 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 2 𝑢𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 𝑉𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎
𝑔
𝑚𝑔 ∗ 𝐿
1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 103 𝑢𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐺𝑙𝑢 1 𝑢𝑚𝑜𝑙 𝑆𝑎𝑐 0,3 𝑚𝐿
𝐴𝑐𝑡. = 0,4019 ∗ ∗ ∗ ∗ ∗
𝑚𝐿 ∗ 𝑚𝑖𝑛 180 𝑚𝑔 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 2 𝑢𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 0,15 𝑚𝐿
𝑈𝐼
𝐴𝑐𝑡. = 2,2327 ∗ 20 = 44,6540 𝑈𝐼/𝑚𝑙
𝑚𝐿 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜
𝑈𝐼
𝐴𝑐𝑡. = 2,2327 ∗ 0,6𝑚𝐿 = 1,3333 𝑈𝐼
𝑚𝐿 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜
1,3333 𝑈𝐼 𝑈𝐼 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑨𝒑𝒍𝒊. 𝑮𝒓𝒑. 𝟏 = = 4,4333 ∗ 20 = 88,600
0,3 𝑔 𝑔 𝑔
1,3333𝑈𝐼 𝑈𝐼 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑨𝒑𝒍𝒊𝒄. 𝑮𝒓𝒑. 𝟐 = = 4,4631 ∗ 20 = 89,2620
0,298 𝑔 𝑔 𝑔
𝑚𝑔
0,0755 𝑚𝐿 ∗ 𝑚𝑖𝑛 ∗ 1000 ∗ 0,3𝑚𝐿
𝐴𝑐𝑡. = 𝑚𝑔 ∗1
180 ∗ 0,150𝑚𝐿 ∗ 2
𝑚𝑚𝑜𝑙
𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. = 0,4194 ∗ 3𝑚𝐿 = 1,2583 𝑈𝐼
𝑚𝐿
Gráfico N° 10: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del sobrenadante del
grupo 1.
Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del sobrenadante
6.0
5.0
[Glucosa] (mg/ml)
4.0
3.0
y = 0.9934x - 0.0845
2.0 R² = 0.9981
1.0
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Gráfico N° 11: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del primer lavado del
grupo 1.
1.5
[Glucosa] (mg/ml)
1.0
y = 0.3362x - 0.1162
0.5 R² = 0.9817
0.0
0 1 2 3 4 5 6
-0.5
Tiempo (min)
Gráfico N° 12: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del sobrenadante del
grupo 2.
Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del sobrenadante
6.0
5.0
[Glucosa] (mg/ml)
4.0
3.0
y = 0.9411x + 0.1091
2.0 R² = 0.9915
1.0
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Gráfico N° 11: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del primer lavado del
grupo 2.
1.5
1.0
y = 0.3318x - 0.0526
0.5 R² = 0.9775
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
𝑚𝑔
0,9934 ∗ 1000 ∗ 0,3𝑚𝐿
𝐴𝑐𝑡. = 𝑚𝐿 ∗ 𝑚𝑖𝑛 ∗1
𝑚𝑔
180 ∗ 0,150𝑚𝐿 ∗ 2
𝑚𝑚𝑜𝑙
𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. = 5,5189
𝑚𝐿
𝑈𝐼 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑻𝒐𝒕𝒂𝒍 = 26,66 − 5,5189
𝑚𝐿 𝑚𝐿
𝑈𝐼
𝐴𝑐𝑡. 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 21,1411
𝑚𝐿
Tabla N° 9: Determinación de la actividad enzimática para el sobrenadante y lavado de los dos
grupos.
Activ. Total
Grupo Muestra Pendiente Activ. (UI/ml Enz)
(UI/ml Enz)
Sobrenadante 0,9934 5,5189 21,1411
1
Lavado 0,3362 1,8677 24,7922
Sobrenadante 0,9411 5,2283 21,4317
2
Lavado 0,3318 1,8433 24,8167
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.
1,3333 𝑈𝐸 𝑈𝐸 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑨𝒑𝒍𝒊. 𝑮𝒓𝒑. 𝟏 = = 4,4333 ∗ 20 = 88,6000
0,3 𝑔 𝑔 𝑔
1,3333𝑈𝐼 𝑈𝐼 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑨𝒑𝒍𝒊. 𝑮𝒓𝒑. 𝟐 = = 4,4631 ∗ 20 = 89,2620
0,298 𝑔 𝑔 𝑔
𝑈𝐼 𝑈𝐼 𝑈𝐼
88,600 − 5,5189 − 1,8677
𝑹𝒆𝒏𝒅. 𝒊𝒏𝒎𝒐𝒗. = 𝑚𝑙 𝑚𝑙 𝑚𝑙 ∗ 100%
𝑈𝐼
88,600
𝑚𝑙
III. DISCUSIÓN:
IV. CONCLUSIONES:
Se evaluó los métodos de absorción en hueso calcinado y atrapamiento en alginato para
la inmovilización de invertasa de levadura, teniendo que el método de absorción en hueso
calcinado y el de atrapamiento en alginato de calcio presentan una similar actividad y un
alto rendimiento de inmovilización, siendo el hueso calcinado el que presenta el mayor
rendimiento de 96,55%.
Se analizó la actividad enzimática de la invertasa en las dos matrices de inmovilización
teniendo que el hueso calcinado presento una mayor actividad que la matriz de alginato,
sin embargo, su diferencia no fue muy grande, mostrando que las dos matrices son buenas
opciones al momento de inmovilizar enzimas.
Se determinó el rendimiento de la inmovilización, teniendo valores mayores en la matriz
de hueso calcinado siendo este método el mejor dentro de la experimentación realizada
V. RECOMENDACIONES:
Pesar todo el material y registras su peso para una obtención real del rendimiento
de inmovilización
Al trabajar con las columna con hueso calcinado se debe verificar que este bien
limpia y sin humedad
En los lavados y en las diluciones se debe usar el tampón de actividad con el que
se trabaje en este caso acetato de sodio al 0,05 M
VI. BIBLIOGRAFIA