INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA

Laboratorio de bioquímica clínica 3MM4.

Informe Práctica 5

GLUCOSA EN SUERO HUMANO: CURVA DE CALIBRACIÓN

Presenta el equipo 9 del grupo 3MM4:

Castillo Agustin Brenda
González Ceballos Sara Jessica
Guizar Portal Diego Abel

Ante los profesores:

Castillo Ortiz Alberto
Arciniega Carreon Ilse Yazmin

Fecha de entrega: 24 de mayo de 2021

 Práctica No. 5 Glucosa en suero humano: Curva de calibración
UNIDAD III. Carbohidratos y su metabolismo.

1. OBJETIVOS
1.1 Objetivo general.

1.1.1. Elaborar una Curva de Calibración para la determinación de glucosa en sangre.

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

1.2.1. Emplear un método enzimático para la cuantificación de glucosa en sangre.

1.2.2 Evaluar la importancia de los resultados obtenidos de las muestras sanguíneas y su contribución en las pruebas de
laboratorio para la determinación de patologías como la diabetes.

2. MANEJO DE RESULTADOS Y ANÁLISIS

La siguiente tabla muestra los resultados de todos los equipos, con la cual se hicieron los cálculos correspondientes.

Tabla 2.1

2.1 Resultados para la curva de calibración o curva tipo del equipo 9:

Tabla 2. 2

Concentración del estándar de glucosa en mg/dl (x) As 505 nm (y)

40 0.129
60 0.181
80 0.252
100 0.321
120 0.364
140 0.450

pág. 1
 Práctica No. 5 Glucosa en suero humano: Curva de calibración
UNIDAD III. Carbohidratos y su metabolismo.
2.2 Curva de calibración.

curva del Equipo 9

0.5

0.45

0.4

0.35
As

0.3

0.25

0.2

0.15

0.1
40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140
[Glc] (mg/dL)

Ilustración 2.1 Curva de calibración del equipo donde se relaciona las respuestas (absorbancias) con las concentraciones
estándar de las muestras, donde obtenemos una función de regresión lineal y se muestra la aproximación de la tendencia
de los datos, notamos que hay menor dispersión de estos.

2.3 Ecuación de la recta y el coeficiente de calibración del equipo:

Ec. recta: y = 0.0032x - 0.003, 𝑹² = 𝟎. 𝟗𝟗𝟒𝟕

2.4 Resultados para la curva de calibración o curva tipo de los otros equipos del grupo y cálculos de la media y la desviación
estándar de las As obtenidas para cada concentración de glucosa.

Tabla 2.3

Equipo As 505 nm
1 2 3 4 5 6
40 mg/ml 60 mg/ml 80 mg/ml 100 mg/ml 120 mg/ml 140 mg/ml
1 0.107 0.245 0.296 0.395 0.454 0.516
2 0.123 0.210 0.274 0.350 0.438 0.477
3 0.066 0.260 0.366 0.471 0.597 0.723
4 0.058 0.240 0.328 0.376 0.436 0.485
5 0.145 0.193 0.271 0.282 0.421 0.508
6 0.135 0.116 0.303 0.364 0.420 0.485
7 0.132 0.201 0.273 0.322 0.418 0.492
8 0.120 0.200 0.280 0.324 0.436 0.493
9 0.129 0.181 0.252 0.321 0.364 0.450
10 0.410 0.191 0.257 0.312 0.384 0.418
𝑥̅ 0.1156 0.2037 0.290 0.3517 0.4368 0.5047
pág. 2
 Práctica No. 5 Glucosa en suero humano: Curva de calibración
UNIDAD III. Carbohidratos y su metabolismo.
𝑠 0.030295581 0.040464113 0.03490304 0.053622238 0.062303558 0.081747647

2.5 Nueva curva de calibración a partir de las medias calculadas.

Curva grupal sin procesar

0.55

0.5

0.45

0.4

0.35
As

0.3

0.25

0.2

0.15

0.1
40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140
[Glc] (mg/dL)

Ilustración 2.2 Curva de calibración grupal donde se relaciona las medias de las respuestas (absorbancias) con las
concentraciones estándar de las muestras, donde obtenemos una función de regresión lineal y se muestra la
aproximación de la tendencia de los datos, donde notamos que hay poca dispersión de estos.

2.6 Ecuación de esa recta y el coeficiente de calibración.

Ec. Recta: y = 0.0039x - 0.0309, R² = 0.9974

2.7 Cálculos de los valores de Qr tomando en cuenta una confianza de 90% por lo tanto, 10 tubos corresponden a
Q=0,4102.

Tabla 2.4

n Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6

1 0.096385542 0.503875969 0.065789474 0.265486726 0.222222222 0.326530612
2 0.49398 0.07751938 0.184210526 0.079646018 0.377777778 0.275510204
3 0.156626506 0.015503876 0.026315789 0.008849558 0.022222222 0.081632653
4 0.036144578 0.054263566 0.013157895 0.017699115 0.011111111 0
5 0.072289157 0.007751938 0.078947368 0.230088496 0.166666667 0.071428571
6 0.036144578 0.069767442 0.210526316 0.123893805 0 0.010204082
7 0.036144578 0.23255814 0.092105263 0.10619469 0.022222222 0.153061224
8 0.072289157 0.03875969 0.328947368 0.168141593 0.177777778 0.081632653
9 0.048192771 0.11627907 0.5 0.672566372 1.588888889 2.112244898
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 Práctica No. 5 Glucosa en suero humano: Curva de calibración
UNIDAD III. Carbohidratos y su metabolismo.
10 0.050633 0.18987 0.34862 0.47799 0.67136 0.75824

2.8 Datos aceptados en tabla global del grupo, con los cálculos de la media y la desviación estándar.

Tabla 2.5

Equipo As 505 nm
1 2 3 4 5 6
40 mg/ml 60 mg/ml 80 mg/ml 100 mg/ml 120 mg/ml 140 mg/ml
1 0.096385542 0.07751938 0.065789474 0.265486726 0.222222222 0.326530612
2 0.156626506 0.015503876 0.184210526 0.079646018 0.377777778 0.275510204
3 0.036144578 0.054263566 0.026315789 0.008849558 0.022222222 0.081632653
4 0.072289157 0.007751938 0.013157895 0.017699115 0.011111111 0
5 0.036144578 0.069767442 0.078947368 0.230088496 0.166666667 0.071428571
6 0.036144578 0.23255814 0.210526316 0.123893805 0 0.010204082
7 0.072289157 0.03875969 0.092105263 0.10619469 0.022222222 0.153061224
8 0.048192771 0.11627907 0.328947368 0.168141593 0.177777778 0.081632653
9 0.050633 0.18987 0.34862 0.47799 0.67136 0.75824
𝑥̅ 0.067205541 0.089141456 0.149846667 0.164221111 0.185706667 0.19536
𝑠 0.039417243 0.077268199 0.12540977 0.14612274 0.221623032 0.23872786

2.9 Tercera curva de calibración.

Curva con datos aceptados

0.2

0.18

0.16

0.14
As

0.12

0.1

0.08

0.06
40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140
[Glc] (mg/dL)

Ilustración 2.3 Curva de calibración grupal donde se relaciona las medias (absorbancias) de los datos aceptados con las
concentraciones estándar de las muestras, donde obtenemos una función de regresión lineal y se muestra la
aproximación de la tendencia de los datos, notamos que hay mayor dispersión de los mismos.

2.10 Ecuación de esa recta y el coeficiente de calibración.

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 Práctica No. 5 Glucosa en suero humano: Curva de calibración
UNIDAD III. Carbohidratos y su metabolismo.
Ec. Recta: y = 0.0013x + 0.0204, R² = 0.9308

2.11 Ecuación y el coeficiente de correlación que describe la mejor curva tipo.

Tabla 2.3

Datos Ecuación r
Solo del equipo y = 0.0032x - 0.003 0.99734
Grupal sin procesar y = 0.0039x - 0.0309 0.99869
Grupal con datos aceptados y = 0.0013x + 0.0204 0.96477

2.12 Valor de la concentración del patrón de glucosa y de la concentración de glucosa en la muestra de suero (muestra
problema). Para obtener el valor se despejó x en las ecuaciones obtenidas, quedando la siguiente ecuación:
𝑦−𝑏
[𝑥] =
𝑚
Donde “x” es la concentración de Glc y “y” la absorbancia.

Tabla 2.4

Ecuación Concentración real del Concentración del patrón Concentración de Glc. en la

patrón de Glc. de Glc. obtenida muestra de suero
Solo del equipo 100 24.75 43.86
Grupal 100 16.35 34.11
Grupal con datos 100 32.50 63.19
aceptados

2.13 Porcentaje de error.

Error Concentración del patrón de Glc. Obtenida.

Solo del equipo 32%
Grupal 47.91%
Grupal con datos aceptados 16.85%

3. DISCUSIÓN
Para el análisis analítico usamos las curvas de calibración o curva tipo el cual se define como “el método para determinar
la concentración de una sustancia problema. Este método se basa en la relación proporcional entre la concentración y una
determinada señal analítica.” (Padial, 2016)

Esta relación la podemos ver en cada gráfica en donde las concentraciones con las que se relaciona las medidas obtenidas
por medio de un espectrofotómetro son aquellas soluciones estándar encontradas en la página 46 de nuestro manual, se
le llaman soluciones estándar debido a que su concentración es conocida y exacta, una de las características que debe de
cumplir una solución estándar.
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 Práctica No. 5 Glucosa en suero humano: Curva de calibración
UNIDAD III. Carbohidratos y su metabolismo.
Dicho lo anterior, de forma general se analizaron las curvas con la ecuación de la recta por el método matemático y por el
método gráfico se analizaron por interpolación. Con el método matemático se obtuvo una ecuación la cual fue utilizada
para determinar la concentración y el coeficiente de correlación lineal para obtener un análisis confiable, sabemos que es
confiable cuando se aproxima a 1. Dentro del análisis grafico se tiene una interpolación debido a que tenemos un rango
útil, en el cual obtenemos variables que se acercan a la línea de tendencia, entre menor sea la dispersión de estos puntos
mayor confiabilidad hay en los resultados, por lo tanto, no es recomendable usar extrapolación.

En cada grafica podemos observar una proporcionalidad, por lo tanto, es lineal ya que, a mayor concentración mayor es
la absorbancia. Lo único diferente entre estas gráficas es la dispersión de los puntos antes y después del análisis de Dixon.

En la curva de calibración o curva tipo del equipo 9, obtuvimos un coeficiente de correlación de 0.99734, con la línea de
tendencia notamos que no hay tanta dispersión de los resultados obtenidos, esto indica que es confiable el análisis al igual
que la curva de calibración de los resultados grupales.

Para el análisis de las curvas de los resultados obtenidos del grupo y del análisis de Dixon fue necesario sacar la media y la
deviación estándar. La media indica un promedio de los datos, mientras que la desviación estándar indica que tan
dispersos están los datos alrededor de la media, ambas se relacionan ya que nos indican que tan confiables son los
resultados obtenidos.

El análisis de Dixon se usa cuando creemos que tenemos valores sospechosos que son atípicos o anómalos y con esta
prueba rechazamos o aceptamos los resultados. “Un valor atípico es una observación extrañamente grande o
pequeña.” (Minitab, 2019) Debemos de tener en cuenta que este análisis tuvo que ver con la media de los resultados, ya
que entre más alejados estén de la media o más dispersos de la línea de tendencia son posibles resultados atípicos.

Dentro del análisis matemático de Dixon se ordenaron los datos y se tomaron los extremos en la fórmula debido a que
pueden ser valores atípicos, volviendo hacer énfasis en el alejamiento de la media. Se rechazó al menos un resultado en
cada tubo para posteriormente hacer los cálculos de la media y la desviación estándar de los datos aceptados. Finalmente,
se realizó una nueva curva de calibración en donde notamos que hay mayor dispersión en los resultados, esto puede
deberse a errores sistemáticos. “El error sistemático o sesgo se asocia con debilidades del diseño metodológico o la
ejecución del estudio, afectando su validez.” (Barraza, 2019)

Los tampones fisiológicos son la primera línea de defensa frente a los cambios de pH de los líquidos corporales, entre los
que destacan: el tampón fosfato, el tampón bicarbonato y el tampón hemoglobina.

La glucosa es una molécula no ionizada denominada hexosa, la cual es fácil de manipular con base a métodos indirectos
analísticos debido a que la forma en que se desempeña no es lineal y tiende a ser inestable, debido a la reactividad de
esta molécula. La grafica más adecuada mediante el análisis estadístico es la denominado curva tipo, debido a la exactitud
por la cual identifica la sustancia y de qué manera se pueden desarrollar estándares para el cálculo adecuado del reactivo.

Al realizar una experimentación, siempre vamos a presentar un rango de error, sin embargo, en esta experimentación
nuestro error fue mínimo, además de que influye que los datos proporcionados son exactos no cometemos el tradicional
error humano, al intentar identificar el reactivo y la forma en que se desarrolla

La NORMA Oficial Mexicana NOM-015-SSA2-2010, Para la prevención, tratamiento y control de la diabetes mellitus define
la Diabetes, brinda estadísticas y porcentajes según encuestas entre ellas la Encuesta Nacional de Salud entre otras en la
cual se observa el incremento que ha tenido esta patología dando como uno de los resultados que sea México el país que
ocupa el primer lugar en número de defunciones por año. De igual manera define los procedimientos y acciones para la
prevención, detección, diagnóstico y tratamiento de la prediabetes y diabetes mellitus tipo 2 y tipo 1, tendientes a
disminuir la incidencia de esta enfermedad y para establecer programas de atención médica idóneos a fin de lograr un
control efectivo de los padecimientos y reducir sus complicaciones y su mortalidad.

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UNIDAD III. Carbohidratos y su metabolismo.

4. CONCLUSIONES
Al realizar la simulación en el sitio web propuesto pudimos utilizar simuladamente el equipo y método de
espectrofotometría desde preparar las soluciones hasta poder realizar la curva de calibración correspondiente
dependiendo de los datos obtenidos. De igual manera al emplear un método enzimático y con los datos proporcionados
fue posible conocer la cuantificación de la glucosa en sangre.

Finalmente tener en cuenta que los datos o resultados que se obtienen en las muestras sanguíneas son de suma
importancias ya que los distintos niveles de sustancias como la glucosa en la muestra sanguínea nos podría ayudar para
afirmar o descartar patologías como la diabetes o en su caso lograr diagnosticarla a tiempo y poder tratarla correctamente
para evitar complicaciones ya que recordemos que la diabetes es una de las principales razones de mortalidad en el país
y en el mundo entero.

5. REFERENCIAS
Arilla E (1998): Preparación de disoluciones. En: González de Buitrago JM, Arilla E, Rodríguez-Segade M, Sánchez A (eds):
“Bioquímica Clínica”, 1ª ed. Editorial Alhambra (Madrid, España), pp. 529 – 552.
Berezov TT, Korovkin BF (1992): Blood. En Berezov TT, Korovkin BF (eds): “Biochemistry”, 1ª ed. Editorial Mir Publishers
Moscow (Moscú, Rusia), pp. 415 – 445.

Barraza, F. (2019, 27 agosto). Conceptos generales en bioestadística y epidemiología clínica: error aleatorio y
error sistemático - Medwave. MEDwave.
https://www.medwave.cl/link.cgi/Medwave/Revisiones/MetodInvestReport/7687.act

Devlin TM (2004): Estructura celular eucariota. En Devlin TM (ed): Bioquímica, 4ª ed. Editorial Reverté (Barcelona, España),
pp. 3 – 26

Minitab. (2019). Interpretar todos los estadísticos y gráficas para prueba de valores atípicos. (C) Minitab,
LLC. All rights Reserved. 2019. https://support.minitab.com/es-mx/minitab/18/help-and-how-
to/statistics/basic-statistics/how-to/outlier-test/interpret-the-results/all-statistics-and-graphs/

Padial, J. (2016, 17 octubre). ¿Qué es una curva de calibración? Curiosoando. https://curiosoando.com/que-es-

una-curva-de-
calibracion#:%7E:text=La%20curva%20de%20calibraci%C3%B3n%20es,determinada%20se%C3%B1
al%20anal%C3%ADtica%20(propiedad).
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