Determinación del contenido de azúcares

reductores
Acevedo Ceja Laila Guadalupe, Avila Nuñez Geovanni, Bazán Guzmán Nicolás,
Grande Flores Israel Sadoc, Rivera Hernández Eduardo
Universidad Autónoma Metropolitana. Unidad Cuajimalpa. Licenciatura en
Ingeniería Biológica.
Equipo 4 26/02/2020 Rev. 0
geovanniavilanunez@gmail.com
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Introducción
El método DNS (técnica de Miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido
3,5 dinitrosalicílico para la hidrólisis de polisacáridos presentes en una muestra.
Determinando las absorbancias por medio de un espectrofotómetro a 540nm. Esta
técnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos durante una
fermentación o para cuantificar los productos de una reacción enzimática. La curva
de calibración es la representación gráfica en un eje de coordenadas, de la
absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la concentración (eje de abscisas: X). se
ensaya varias soluciones de concentración conocida y se determina sus
absorbancias, construyéndose la curva de calibrado, que es una recta. La
concentración de una solución problema (desconocida), se averigua por
interpolación de la abscisa de la solución en la curva de calibración, o a través de la
ecuación de la recta (y=mx+b) donde: Absorbancia (y) = constante (m) x
concentración + absorbancia del blanco.
El DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. Un azúcar reductor es
aquel cuya estructura posee un grupo carbonilo reactivo que se oxida con mayor
facilidad para formar productos muy diversosE (Ghnimi,2018), ejemplo de estos
azúcares son la glucosa, maltosa y lactosa. Estos mismos son detectados en
algunas pruebas como la de Fehling o Tollens por reducir iones metálicos tales
como el cobre y la plata formando así productos insolubles. Sin embargo el método
estudiado se basa en una reacción de oxidación y reducción entre el reactivo DNS
y los azúcares reductores presentes en la muestra incógnita (Passo et al, 2018).
La sacarosa es un disacárido no reductor, pero tras su hidrólisis en medio ácido se
libera glucosa y fructuosa que sí son reductores y reaccionan con el DNS generando
un producto coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por métodos
espectrofotométricos es proporcional a la concentración de sacarosa establecido en
la longitud de onda de máxima absorción para las diferentes soluciones coloreadas.
Debido a que este método se basa en una técnica espectrofotométrica que depende
de un grupo cromóforo como factor de relación con la concentración de azúcares
presente en la muestra, es recomendado no usarlo en incógnitas muy coloreadas.
(Delgado, 2009)
Experimentación:
Materiales y reactivos: Tartrato de sodio, hidróxido de sodio, ácido 3,5 –
dinitrosalicílico (DNS), D-glucosa, piseta con agua destilada, matraz de 100ml,
matraz de 25ml, charola, espátula, 10 tubos de ensayo con rosca, gradilla para
tubos de ensayo, juego de micropipetas, 10 tubos eppendorf, vortex, vaso de
precipitado de 1L, parrilla de calentamiento, perlas de cristal, hielo en un contenedor
de unicel, termómetro, espectrofotómetro UV-vis, 10 celdas de PMMA.
Preparación de soluciones: Se preparó en un matraz de 100ml DNS a 1x. Primero
se disolvió 1.8g de hidróxido de sodio, se agitó hasta disolver, posteriormente se
disolvió 30g de tartrato de sodio y finalmente 1g de DNS. Se preparó un stock
(solución madre) de glucosa, agregando 0.03g de la misma, en un matraz de 25ml
para una concentración de 1.2g/L.
Preparación de las muestras: Se preparó disoluciones del stock a 1.2, 1.0, 0.8, 0.6,
0.4, 0.2, 0.0 (blanco) g/L utilizando como diluyente agua destilada en tubos
eppendorf a cantidades de 1mL. Para la muestra 1 se diluyo su concentración de
100g/L a 1g/L de igual modo para la muestra 2 y 3 de 200g/L a 1g/L.
Posteriormente se llenó un tubo de ensayo con 0.5mL de disolución y 0.5mL de
solución de DNS sellándolo con la tapa rosca para pasar a agitarlo con ayuda del
vortex, así para cada una de las disoluciones.
Reducción del DNS: Se sumergieron las muestras en un vaso de precipitado de 1L,
colocado sobre una parrilla de calentamiento a medio llenar con agua de la llave, a
50°C con perlas de vidrio sumergidas. Se encendió la parrilla para iniciar el baño
maría calentando el agua hasta una temperatura de 88 °C, se mantuvo esta
temperatura por 5 minutos pasando a detener la reacción enfriando las disoluciones
sumergiéndolas en hielo durante 3 minutos.
Análisis de muestras: Se reconstruyeron las muestras con 5mL de agua destilada y
se agitaron con ayuda del vortex. Posteriormente se pasó a medir la absorbancia
de las muestras por medio del UV-vis en longitud de onda de 540nm.
Bibliografía:
• Delgado, M. A. utilización de espectroscopia de reflectancia en el infrarrojo
cercano (NIRS) (2001), pág. 616-624.
• Frank Bradleey Amstrong. Thomas Peter Bernett Bioquímica (1982), pág.
163-165.
 • Ghnimi. S,. Al-Shibli, M,. Al-Yammahi, H.R,. Al-Dhaheri, A,. Al-Jaberi, F,.
Jobe, B,. Kamal-Eldin, A. Reducing sugars, organic acids, size, color, and
texture.

Anexos:
Hojas de seguridad

Tartrato de sodio

Propiedades físicas y químicas:

Número CAS 6106-24-7

Peso molecular: 230.08 g/mol.
Apariencia: sólido, cristales.
Color: blanco.
Olor: inodoro.
Umbral de olor: N/D
Estado de la materia: sólido
Concentración: 95 – 100 %
pH: 7-9
Punto de fusión: 150°C
Punto de ebullición: N/D
Punto de inflamación: N/A

Manejo y almacenamiento:

Lavarse después de la manipulación. No respirar humos/ gases/ nieblas/ vapores/

aerosoles. Utilizar en aire libre o ventilado. Mantenerse fuera de la luz solar directa,
lejos del calor y materiales incompatibles. Mantenerlo en su envase original.

Hidróxido de sodio (sigma-Aldrich)

Propiedades físicas y químicas:

Número CAS 1310-73-2

Peso molecular: 39.99 g/mol.
Apariencia: claro.
Color: blanco.
Olor: acre.
Umbral de olor: no se conoce.
Estado de la materia: sólido.
Concentración: 99 – 100 %
pH: 14 (5% solución).
Punto de fusión: 318°C.
Punto de ebullición: 1390 °C.
Punto de inflamación: no se conoce.

Manejo y almacenamiento:

Evite el contacto con los ojos, la piel o la ropa. No degustar o ingerir el producto.
Lávese cuidadosamente después de la manipulación. Prohibido comer, beber y
fumar durante la utilización del producto. Mantenga el envase cerrado, en un lugar
seco, fresco y bien ventilado, lejos de fuentes de calor. No guardar en recipientes
de metal.

Ácido 3,5 – dinitrosalicílico (DNS)

Propiedades físicas y químicas:

Número CAS 609-99-4

Peso molecular: 228.12 g/mol.
Apariencia: sólido.
Color: amarillo.
Olor: inodoro.
Umbral de olor: N/D.
Estado de la materia: sólido
Concentración: 99 – 100 %
pH: 1.5
Punto de fusión: 174°C.
Punto de ebullición: N/D.
Punto de inflamación: N/D.

Manejo y almacenamiento:

Lavarse después de la manipulación. No respirar humos/ gases/ nieblas/ vapores/

aerosoles. Utilizar en aire libre o ventilado. Mantenerse fuera de la luz solar directa,
lejos del calor y materiales incompatibles. Mantenerlo en su envase original. Evitar
la generación de polvo.

D-Glucosa, anhydrous, granular (MACRON)

Propiedades físicas y químicas:

Número CAS 50-99-7

Peso molecular: 180.16 g/mol.
Apariencia: sólido.
Color: blanco.
Olor: inodoro.
Umbral de olor: N/D.
Estado de la materia: sólido.
Concentración: 95 – 100 %
pH: 1.5
Punto de fusión: 150-152°C.
Punto de ebullición: N/D.
Punto de inflamación: N/A.

Manejo y almacenamiento:

Evite el contacto con los ojos, la piel o la ropa. No degustar o ingerir el producto.
Lavarse después de la manipulación. Utilizar en aire libre o ventilado. Mantenerse
fuera de la luz solar directa, lejos del calor y materiales incompatibles. Mantenerlo
en su envase original.