PROCEDIMIENTO DE ANÁLISIS DE AL-

CALOIDES QUINOLIZIDÍNICOS
Rev. 01

1. OBJETO
Determinar el porcentaje de alcaloides totales que contienen diferentes matrices de lupino.

2. ALCANCE.
Este procediendo se aplica a la determinación de azúcares totales en diferentes tipos de muestras
tanto de origen animal como vegetal.

3. REFERENCIAS
DUBOIS, M.; Hamilton J.K. Repus P. A. Smith F. 1956. Coloreometric method for determination of
sugar and related substances. Anal. Chem. 28-300-356.

4. GENERAL.

Se determina según el método de antrona. Se realiza una hidrólisis de los polisacáridos en medio
ácido en caliente. La antrona reacciona con las hexosas y las aldopentosas para dar un complejo
de color azul - verdoso, presentando un máximo de absorbancia a 625 nm.
La presencia de proteínas que contengan triptófano da color rojo a la muestra y puede interferir
con la reacción. Este método es muy sensible, permite dosificar concentraciones en azúcares tota-
les de 0 a 50 mg/L. Teniendo en cuenta la gran sensibilidad del método es necesario efectuar dilu-
ciones en la muestra a analizar. Se realiza siguiendo el método de Dubois, M. Hamilton J.K.
(1956).

4.1 ABREVIATURAS.

nm Nanómetros
mg Miligramos
L Litro
g gramo
mL mililitro

5. DESCRIPCIÓN

5.1 EQUIPOS Y MATERIALES

5.1.1 EQUIPOS

 Espectrofotómetro UV - VIS
 Balanza analítica
 Baño maría
 Vortex
 INSTRUCTIVO PARA LA DETERMINA-
CIÓN DE ALCALOIDES QUINOLIZIDÍNI-
COS Rev. 01

5.1.2 MATERIALES

 Embudos
 Porta embudos
 Erlemneyes
 Balones aforados
 Papel filtro cualitativo
 Tubos de ensayo
 Micropipetas

5.2 REACTIVOS Y PREPARACIÓN

5.2.1 REACTIVOS
 Ácido tricloroacético 5%.
 Hidróxido de sodio NaOH al 10M.
 Diclorometano
 Ácido sulfúrico 0,01N
 Hidróxido de sodio NaOH 0,01N.
 Rojo de metilo
 Reactivo de Dragendorf

5.2.2 PREPARACIÓN

 Solución de antrona: Pesar 200 mg de antrona y adicionar 100 ml de ácido sulfúrico

concentrado.
 Solución estándar de Glucosa 50 mg/L: Pesar 0.5 g de glucosa D-(+)-glucosa
C6H12O6, disolver y aforar a 100 ml con agua destilada. Tomar 1 mL y diluir a 100 mL.

5.3 PROCEDIMIENTO

5.3.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

 Pesar aproximadamente 0,2 g de lupino desengrasado en tubos de centrifuga
 Adicionar 5 ml de ácido tricloroacético al 5%, homogenizar a máxima velocidad durante 1
min en el FastPrep-24 y colocar por 10 minutos en un baño de ultrasonido. La mezcla se
centrifugó a 4500 rpm por 10 minutos a 15ºC y el sobrenadante fue separado en otro tubo
de centrifuga, repitiendo este procedimiento dos veces más para garantizar la extracción
completa de alcaloides quinolizidínicos.
 En cada ciclo, tomar 0,5 mL de sobrenadante en un tubo de ensayo y añadir 4 gotas de
reactivo de Dragendorf para comprobar la presencia de alcaloides obteniendo un precipita-
do marrón (reacción positiva), en el caso que la solución torne amarilla (reacción negativa).

5.3.2 CUANTIFICACIÓN

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CIÓN DE ALCALOIDES QUINOLIZIDÍNI-
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 Colocar el extracto en un embudo de decantación y neutralizar con 1 ml de NaOH 10M.

 Añadir 15 ml de diclorometano y agitar por 1min. Después de esperar que las fases se
separen completamente, recoger el diclorometano en un matraz Erlenmeyer y repetir este
procedimiento por dos veces
 Evaporar a 50 ºC hasta obtener 1ml de solución, lo cual desaparece al enfriarse.
 Agregar 5ml de ácido sulfúrico 0,01N, 2 gotas de rojo de metilo y homogenizar
 Titular el exceso del ácido con NaOH 0,01N.
 Finalmente, calcular el resultado utilizando la ecuación 1 y 2 y expresar en porcentaje de
alcaloides de lupino seco.

5.3.4 CÁLCULOS

Ec-1. Volumen de ácido que reacciona

Ec-2. Porcentaje alcaloides totales

Donde:
= volumen del ácido sulfúrico que reacciona (L).

= concentración del ácido sulfúrico (Eq-g/L).

248 = peso molecular de lupanina (eq-g/L).

FC= factor de corrección (5:15).
=peso de muestra (g)

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