Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Sexto semestre
Grupo A
Integrantes
1
Contenido
INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................... 3
MARCO TEÓRICO ................................................................................................................................. 4
OBJETIVO ............................................................................................................................................. 5
MATERIALES ........................................................................................................................................ 5
REACTIVOS .......................................................................................................................................... 5
METODOLOGÍA.................................................................................................................................... 6
Esquema general de trabajo ........................................................................................................... 6
Preparación de reactivo DNS......................................................................................................... 6
CÁLCULOS ............................................................................................................................................ 7
RESULTADOS ....................................................................................................................................... 9
DISCUSIÓN DE RESULTADOS ............................................................................................................. 10
CONCLUSIONES ................................................................................................................................. 11
BIBLIOGRAFÍA. ................................................................................................................................... 12
2
INTRODUCCIÓN
En la actualidad es muy importante contar con métodos analíticos que permitan
cuantificar componentes de las células. Entre las determinaciones más usadas en
el campo de la investigación biotecnológica, se encuentra la cuantificación de
carbohidratos. El carbohidrato más común es la glucosa, un monosacárido con
formula molecular C6H12O6. La glucosa es una hexosa y es una aldosa, esto es, el
grupo carbonilo está en el extremo de la molécula es un grupo aldehído.
3
MARCO TEÓRICO
Azúcar reductor.
Método DNS.
4
métodos espectrométricos, y es proporcional a la concentración de la sacarosa de
la muestra (Rodríguez, 2014).
Dado que hay una serie de fenómenos que no permiten la aplicación de la Ley de
Beer, en la práctica se realiza siempre una calibración de la técnica de medida,
con la cual obtenemos una relación matemática entre la concentración y la
absorbancia. El proceso de la calibración se basa en medir la absorbancia de
varias disoluciones patrón (de concentración conocida), en las mismas
condiciones que se mide la absorbancia de la disolución problema, y se hace una
interpolación. (Noriega & López, 2004)
OBJETIVO
Que el alumno conozca la técnica para la determinación cuantitativa de azúcares
reductores por método colorimétrico y lo aplique para conocer la concentración de
cada una de ellas en una muestra.
MATERIALES
Tubos con tapón roscado. Piseta.
Gradilla. Matraces Aforados.
Pipeta Pasteur. Espátula.
Propipetas. Vasos de precipitados.
Pipetas graduadas de 10 ml. Plancha de calentamiento.
Espectrofotómetro. Baño María.
Micropipeta Puntas para micropipeta.
REACTIVOS
5
METODOLOGÍA
Esquema general de trabajo
6
Tabla 1 Concentración de glucosa en tubos.
CÁLCULOS
Calculo de concentraciones de glucosa
A partir de
Despejando
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
7
Tubo 5
Tubo 6
Tubo 7
Tubo 8
Tubo 9
Tubo 11
DNS
NaOH
8
10 mL ( ) 9 mL de NaOH Fenol
RESULTADOS
En la siguiente imagen (Ilustración 2) se pueden observar 10 tubos con una
solución a diferentes concentraciones de glucosa, reactivo DNS y agua destilada,
comenzando por el blanco donde solo lleva DNS y agua observándose amarillo y
a partir de este el color va oscureciéndose en orden creciente a la concentración
de glucosa.
Ilustración 2. Tubos con diferentes concentraciones de glucosa en orden creciente de derecha a izquierda comenzando
con el blanco.
9
En la gráfica 1 se muestra una curva de calibración obtenida a partir de las
concentraciones de glucosa y las lecturas de absorbancia efectuadas en el
espectrofotómetro a 575 nm, obteniéndose un coeficiente de determinación (R²)
de 0.9953 por lo que se encuentra dentro de los valores establecidos.
Concentraciòn de glucosa vs
absorbancia
0.9
0.8
y = 0.8191x + 0.0264
0.7 R² = 0.9953
Absorbancia(nm)
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
[Glucosa] (g/mL)
Gráfica 1 Concentración de glucosa (g/mL) contra absorbancia, leído a 575 nm ; obteniéndose una gráfica de forma
lineal y creciente, ya que al aumentar la concentración aumenta la absorbancia.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Los azúcares reductores son aquellos que, como la glucosa, fructosa, lactosa y
maltosa presentan un carbono libre en su estructura y pueden reducir, en
determinadas condiciones, a las sales cúpricas. (Castellan, 2017) La
concentración de azucares reductores se pueden detectar mediante
espectrofotometría con técnicas colorimétricas.
Según el método Miller, los azúcares reductores pueden reducir al ácido 3,5-
dinitrosalicílico (DNS) bajo determinadas condiciones. Cuando el ácido 3,5-
dinitrosalicílico es reducido en presencia de calor, por los azúcares reductores que
entran en contacto con él, se desarrolla un cambio de color parecido al café (con
variaciones de amarillo hasta café), como se muestra en la ilustración 3. El cambio
10
de coloración puede entonces determinarse por lecturas de densidad óptica,
leídas por espectrofotometría a una determinada longitud de onda. Se basa en la
reducción del DNS (de color amarillo) por la glucosa al ácido 3-amino-5-
nitrosalicílico (de color rojo), cuya presencia puede detectarse por lectura de la
Absorbancia en la zona de 540-570nm, para el caso de esta práctica, se leyó a
una absorbancia de 575 nm, esto nos da por entendido que el azúcar (glucosa)
fue reducido por el DNS.
Con la curva obtenida se realiza una gráfica de tendencia lineal que se ajusta a los
datos, el R2 obtenido para la ecuación de la recta es de 0.9953. Teniendo en
cuenta que el R2 es mayor a 0.95 los datos no tienen mucha dispersión y por lo
tanto son aceptables, lo que indica que aparentemente la absorbancia es
directamente proporcional a la concentración del material que absorbe la luz.
CONCLUSIONES
En esta práctica se logró conocer la técnica para la determinación cuantitativa de
azúcares reductores por método colorimétrico.
11
BIBLIOGRAFÍA.
Ávila Núñez, R., Rivas Pérez, B., & Hernández Motzezak, R. (2012).
Contenido de azúcares totales, reductores. Multiciencias, 129-135.
Castañeda Ovando, A. (Agosto de 2011). Representaciones gráficas de las
relaciones propiedad concentración con fines cuantitativos. Obtenido de
Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo
Castellan, F. (19 de Febrero de 2017). Azúcares Reductores. Obtenido de
Universidad de Catalunya:
Díaz Jorrín. (2014). Reacciones coloreadas para la determinación
cualitativa de azúcares. Recuperado de
https://sites.google.com/site/enzineticupiig/bradford-y-dns
Diccionarios Oxford. (2003). “Diccionario de química”. Editorial
Complutense.
Fennema Owen R. (1982). “Introducción a la ciencia de los alimentos”.
Editorial Reverte.
Lehninger, Albert L. (1988). “Principios de bioquímica”. Editorial Omega.
Noriega, I., & López, J. L. (Junio de 2004). Espectrofotometría de
Absorción. Obtenido de Instituto de Biotecnología de la UNAM
Rodríguez Paucar Robert Nilo. (2014). “Determinación de azucares
reductores por espectrofotometría”. Universidad Nacional del Santa.
Natal Abigail. (2017). Curvas de calibración para proteínas y azúcares
reductores. 15-Abril-19, de Laboratorio de Bioconversiones Sitio web:
https://abinh3.wixsite.com/labbioconver/practica-1
12