Determinación de glucosa en miel de abeja.

Ana Bauer 30342879

Beatriz Parra 24498778

Igor Marín 26803655

Laboratorio de Bioquímica

Escuela de Biología

Universidad de Carabobo

Facultad experimental de Ciencias y Tecnología

Profesor: Marcelo Molinatti.

Preparadores: Wanda y Luis.

RESUMEN

Iniciando la práctica se determino la glucosa en la miel de abaja mediante la extracción de

glucosa al pesarse y someter al calentamiento de una porción de miel, añadiéndole etanol,
observando las características presentes y centrifugación de la mezcla para así destacar la
parte superior. Así mismo se determino la cuantificación de glucosa, mediante la utilización
de una variedad tubos de ensayos, los cuales fueron sometidos al reactivo indicado,
añadiendo DNSA e incubando, posteriormente se le añadió agua destilada para así poder
calcular la absorbancia y la concentración de glucosa presente. Finalmente se observaron las
reacciones cualitativas de los carbohidratos mediante 7 tipos de muestras, donde se les
añadieron colorantes químicos sensibles a los diversos compuestos presentes, con el fin de
descubrir el contenido de las muestras. Durante toda la práctica se tomaron en cuenta las
medidas de bioseguridad y la ayuda de técnicos y preparadores. Se concluyo que la miel es
un compuesto natural fácil de manipular gracias a su composición la cual es propia del grupo
de carbohidratos y la clasificación de los mismos.

Palabras claves: Extracción, centrifugación, cuantificación, absorbancia.

INTRODUCCION carbohidratos, identificando sus

características físicas y químicas de los
Se efectuaron diversas técnicas para mismos. Para así incentivar el manejo y
detectar elementos relacionados con los contacto de las sustancias, derivados y
propiedades. Además de las diversas
técnicas empleadas para la extracción de
compuestos. Como fue el caso de la
primera experiencia usando miel de abeja la
cual “ha sido empleada durante miles de
años por diferentes culturas, por su valor
nutritivo y medicinal” (Rev
Med.Electron.vol44 no.1 Matanzas Feb
2022.) Gracias que es un compuesto fácil
de manipular la separación de glucosa se
determino al instante. En el mismo orden
de ideas se pudo observar los compuestos y
clasificación de los carbohidratos y dichos
resultados obtenidos en el laboratorio a
través de las diferentes pruebas de
identificación permitió reconocer los
monosacáridos, disacáridos y almidones
presentes en las muestras. Eduardo Bermeo
(2019). Desarrollo de habilidades en los
diversos estudiantes de la asignatura
bioquímica para el enriquecimiento de de
sus capacidades en un área profesional
como personal, compresión y se suspendió el precipitado obtenido en
comportamiento de los carbohidratos y sus
derivados, así como el uso de
instrumentación necesaria para llevar a
cabo la determinación de glucosa en una
porción de miel.
METODOLOGIA
Tomando como referencia principal la guía
de laboratorio usada para la realización de
la presente informe.
Experiencia #1. Extracción de glucosa.
Instrumento: Miel de abeja, dos beaker de
100ml plancha calentadora, 15ml de etanol,
varilla, tubos de centrifugación y
centrifugadora, y agua destilada.
Métodos: Se tomo una muestra de miel de
abeja, colocando en un beaker de 100ml, 6
de Gramos de la miel, este mismo se peso
para posteriormente ser sometido a
calentamiento y dejando reposar hasta que
en la mezcla se observo un breve
ebullición, a su vez se preparó en un beaker
15ml de etanol al 95% , el cual también fue
sometido a la plancha calentadora, una vez
calentado a 280 grados por
aproximadamente 5seg de intervalos, el
etanol fue adicionado en la miel,
mezclando enérgicamente con una varilla
hasta ver un precipitado, luego de ello se
deja enfriar la mezcla para ser transvasado
en un tubo de centrifugado y llevarlo a la
centrifugación a 2000rpm por 5minutos.
Luego de ello se trasladó a la mesa de
trabajo donde se descarto el sobrenadante
mediante la utilización de una pipeta y un
beaker para colocar el residuo. Finalmente
5mL de agua destilada.
Experiencia #2. Determinación
cuantificativa de glucosa.
Materiales: 10 tubos de ensayos, pipeta,
reactivo correspondiente, DNSA, gotero y
agua destilada.
Métodos: Para esta experiencia se tuvo que
calcular la cantidad de glucosa presente en
la muestra de miel de abeja, esto fue
posible gracias a la absorbancia a 540nm,
cuyo procedimiento se baso en utilizar 10
tubos de ensayo previamente limpiados.
Añadiéndoles el reactivo correspondiente
mediante el implemento de una pipeta, a
cada tubo se le coloco 300µl de DNSA con
un gotero. Luego de ello se dejo reposar a
100 grados por 5 minutos
aproximadamente para finiquitar se les
aforró con agua destilada.
Experiencia #3. Reacciones cualitativas
de carbohidratos.
Materiales: Los materiales involucrados en
este estudio fueron 7 tubos de ensayos,
reactivo Molish, Bial, Lugol, Seliwanoff,
beaker y H2SO4. Plancha de
calentamiento, beaker de 100ml y 1ml,
propipetas, pipetas Pasteur, campana de
extracción y 7 muestras problemas
diferentes.
Método: Se colocaron las 7 muestras
problema con una pipeta de 1ml en los
tubos de ensayos rotulados previamente de
la letra A a la G y posteriormente el
reactivo a utilizar.
Reacción de Molish: La prueba determina
la presencia de carbohidratos en una
muestra, al deshidratar el glúcido.
(monosacáridos-alta reacción) forma
furtural (Leidy Milena CristanchoCruz
Ricardo Alonso Monroy Soler, 2014)
Método Molish: Se colocaron las muestras
problema en los tubos y 3 gotas del reactivo
Molish con una pipeta Pasteur en cada uno,
se agitaron los tubos para homogeneizar las
soluciones y luego se adiciono 1ml de
H2SO4 a cada tubo. Se dispuso a observar
si las muestras reaccionaban al reactivo
añadido por medio de una coloración
específica.
Reacción de Lugol: El objetivo de esta
prueba es identificar polisacáridos, se
utilizara como referencia para detectar el
almidón (Gabriel Rosado, 2021)
Método Lugol: Se descartaron las
soluciones anteriores y se coloco 1ml
nuevamente de cada muestra a cada tubo,
se adiciono con una pipeta Pasteur 2 gotas
de reactivo lugol a cada tubo y se
homogenizaron las muestras. Se dispuso a
observar si existía la presencia de
coloración.
Reacción de Barfoed: Su objetivo es
diferenciar los monosacáridos reductores,
de los disacáridos reductores, la prueba se
lleva a cada en medio acido (Gabriel
Rosado, 2021)
Método de Barfoed: Se repitió el
procedimiento anterior de el descarte de las
muestras, y se colocaron muestras nuevas
en los tubos (1ml,, con una pipeta graduada
de 1ml) y 2ml de Reactivo Barfoerd a cada
uno, Esto con la pipeta graduada de 10ml,
se homogeneizaron las muestras y se
sometieron los tobos a baño de maría. Te
tomo en cuenta la coloración presente y el
tiempo en que apareció
Reacción Bial: su objetivo es identificar
carbohidratos, específicamente las
pentosas. (Gabriel Rosado, 2021)
Método Bial: Se esperaba agregar
nuevamente 1ml de muestra problema a los
7 tubos con una pipeta graduada de 1ml,
seguido, 2ml de reactivo Bial con una
pipeta graduada y homogenizar, se tenían
que colocar los tobos a baño de María con
el fin de observar la variación de colores en
la muestra, tomando en cuenta el periodo
de tiempo en que ocurrirán los cambios.
Reacción Seliwanoff: Su objetivo es
identificar a las aldosas y cetosas (Gabriel
Rosado, 2021)
Método Seliwanoff: Se coloraron en los 7
tubos 0,5ml de muestra problemas con una
pipeta graduada de 1ml, les añadió 1ml de
reactivo Seliwanoff con una pipeta
graduada de 1ml y se llevaron los tubos a
baño de maría. Se observo si hubo
coloración y se tomo en cuenta el tiempo de
aparición del mismo.
 𝑥0𝑖 = 𝐶𝑓 × 𝑉𝑓𝑖 (1)

RESULTADO. Donde:
Experiencia #1 y #2 𝑥0𝑖 = cantidad de glucosa inicial
Con los valores obtenidos por la 𝐶𝑓 = concentracion final de la fraccion
experiencia 2 se realizó una curva de problema
calibración con la que se pudo calcular el
valor de la concentración de la glucosa 𝑉𝑓𝑖 = volumen final de la fraccion problema
usando la ley de Beer-Lambert
3
Sustituyendo en la formula tenemos que
2
518,78𝜇𝑔
1 y = 0,0033x + 0,5974 𝑥0𝑖 = × 900𝜇𝑙 = 466,909𝜇𝑔
R² = 0,9227 1000𝜇𝑙
0
Estos son los microgramos presentes en la
0 200 400 600 800
fracción, sin embargo como esta es una
una alícuota de una dilución se tiene que
Figura 1. Cueva de calibración de la
escalar a la solucion que teníamos en S1
glucosa
por lo que primero se calculara el valor de
Tabla 1. Absorbancia y Concentracion de MP2 despejando la formula
glucosa
𝐶1 × 𝑉1 = 𝑉2 × 𝐶2 (2)

Fracción Absorbancia a 540nm Por lo que siendo el volumen de MP2

1 0,612 2000µl y la fracción inicial de MP2 100µl
2 0,763 tenemos que
3 1,601
466,909µg × 2000µl
4 2,263 𝐶2 = = 9338,18µg
5 2,616 100µl

6 Fuera de rango Ahora usando la misma fórmula podemos

calcular la concentración de S1 siendo el
7 Fuera de rango volumen de S1 5000µl y de MP2 20µl

Usando esta Ley tenemos que el valor de
concentración de la fracción de MP2 es
518,78µg/µl con un valor de absorbancia
de 1,712.
Con estos valores podemos calcular la
cantidad de gramos de glucosa en miel,
primero calculamos la glucosa inicial de la
fracción mediante la siguiente ecuación
9338,18µg × 5000µl
𝐶2 = = 2334545,454µg
20µl
Sabiendo que 1µg equivalen a 1×10-6 g
tenemos que 2334545,454µg equivalen a
2,334545g de glucosa contenida en 6g de
miel de abejas y usando una regla de tres
calculamos la cantidad que habría en 100g
de miel
 2,334545g × 100g as sh ol ed a off o
= 38,909𝑔
6𝑔 l
A + Rojo 7:3
Experiencia #3. Ladri 0m
llo in
Primer caso reactivo Molish. La reacción B + Azul
obtenida en este caso fue según lo oscur
esperado, es decir positiva. La muestra en o
relación con el Molish y el H2SO4 genero C + Rojo 2m
un aro violeta en la interfase entre el ácido ladril in
lo
y la solución.
D - Pard 9m
Segundo caso reactivo lugol. La reacción o(Cl in
aro)
obtenida dio positiva para almidón. La
E + Rojo 7:3
muestra al homogeneizarse con el reactivo Ladri 0m
arrojo una coloración azul oscura. llo in
F - Pard 9m
Tercer caso reactivo Barfoed. La reacción o in
resultante fue positiva para tres muestras (Osc
problemas una vez colocadas en baño de uro)
maría. Donde las muestras A y E G + Inter
reaccionaron a los 7min con 30s, mientras fase
que la muestra C reacciono a los 2min. Las viole
ta
tres con pigmentación rojo ladrillos.

Cuarto caso reactivo Bial: En este caso se

Tabla 3. Se señalan las características
le agregaría a la muestra problema reactivo
específicas de las moléculas involucradas
Bial, se homogenizaría y sometería a baño
en las reacciones.
de maría, se esperaba un resultado positivo
para xilosa, cuya coloración habría sido Mue Mol Lugol Barfoed B Seliw
verde. stras isis ia anoff
h l
Quinto caso reactivo Seliwanoff: Luego de A Lactosa
agregar el reactivo a las muestras y ,
someterlas a baño de maría por 9min, la Disacár
reacción para las muestras involucradas (D ido y
y F) fueron negativas, donde ambas reducto
r
obtuvieron una coloración parda, la de la
B Almid
muestra D un poco más obscura en ón,
comparación con la muestra F, la cual fue polisac
más clara. áridos,
no
Tabla 2. Resultados y características de las reduct
reacciones. or
C Monosa
Mu M L Ba B Seli Colo Tie cáridos,
estr oli ug rfo i wan r mp Reduct
 or
D
E Casos molish: Es la reacción del acido
F agregado (H2SO4) hidrolizo cualquier
G Sacar
osa,
disac
árido
, no
reduc
tor
Nota: La muestra con reactivo Bial se
asumió positiva. En ese caso, esta reacción
estaría identificando a una molécula de
xilosa, la cual es un monosacárido y está
formado por pentosas, lo que la convierte
en una aldopentosa.
DISCUCIONES.
Experiencia #1 y #2.
Como se puede observar S1 y MP1 estan
fuera de rango en el espectrofotómetro, esto
se traduce como que su concentración
elevada de glucosa y por ende mas DNSA
reacciono con esta y es la razón por lo que
MP2 al ser una dilución 1/100 de S1 si
entro en el rango del espectrofotómetro
debido a que poseía menos concentración
de Glucosa.
Los resultados dela cantidad de glucosa en
miel se encuentra dentro de los valores
esperados, los cuales serian entre un 27 y
un 45 porciento, esto debido a que la
cantidad de glucosa variara dependiendo no
solo de la especie de la abeja la cual es
usualmente Apis mellifera, sino también de
donde se extraiga el néctar para su
producción y a que procesos se haya
sometido la miel al extraerla
Experiencia #3.
enlace glucosidico presente en la muestra,
es decir, que rompió y deshidrato los
monosacáridos, disacáridos o polisacáridos
resultantes, esto genero furfurales los
cuales reaccionaron con el omega x-Naftol
del nativo del molish, lo cual dio lugar a un
anillo de color violeta (como ya se
mencionó) en la interfase entre reactivo y la
muestra (Gabriel Rosado, 2021).
Caso reacción Lugol: al poner en contacto
el lugol con la muestra se forma un
complejo entre el ion I y la molécula de
amilosa del almidón la cual tiene una
conformación helicoidal. Al entrar el I en la
hélice, se forma un producto de color azul o
negro, dependiendo de la concentración del
azúcar (Gabriel Rosado, 2021)
Caso reacción Barfoed: En esta 6aldehído
los monosacáridos reducen rápidamente el
Cu(II) del reactivo barfoed y lo convierten
en Cu(I), esto ocurre de 0 a 6 minutos
aproximadamente y luego precipita con
efecto de extremo reductor del
monosacárido como oxido cuproso (Cu20),
en el cual es de color rojo ladrillo que se
presenta. Para los disacáridos el proceso
es más lento, estos reducen el Cu(II) en un
tiempo mayor, generalmente de 7 a 12
minutos, ya que estos poseen un poder
reductor muy bajo y en algunos casos no lo
poseen del todo. Debido a que la reacción
es muy lenta se requiere de calor para
acelerarla, aunque los disacáridos
reaccionan también eventualmente si estos
se hidrolizan (Gabriel Rosado, 2021).
Caso reacción Bial: En esta reacción el
HCL deshidrata a los monosacáridos hasta
convertirlas en furtural rápidamente, estas
sustancias reaccionan con el orcinol en
presencia de ion férrico, lo que hace
condesar rápidamente al furtural formando
un complejo de color verde al someter la
muestras a calentamiento, ya que esta
reacción es muy lenta. Con esto se logra
distinguir a una pentosa (Gabriel Rosado,
2021)
Caso reacción Seliwanoff: En esta reacción
las cetosa son deshidratadas por el HCL
más rápido que la aldosas, esto produce
derivados del furfural. Luego de ser
deshidratadas, el hidroximetilfurtural
(aldehído y furfurano formado durante la
descomposición terminica de los 7ldehído)
reacciona con el resorcinol y se condensa
un compuesto rojo (Gabriel Rosad, 2021)
Sin embargo en nuestro caso, la reacción
dio un resultado negativo, esto quiere decir
que la sacarosa fue la que reacciono al
método Seliwanoff y no las moléculas
esperadas. La sacarosa está constituida por
glucosa y fructosa, por lo que la reacción
pudo haber sido positiva. Pero en la unión
alfa (1-2) se anulan las propiedades
reductoras de la glucosa y la fructosa
(Wikipedia, 2020) por lo que esto impide
que la reacción de un resultado positivo, el
cual era el esperado.
CONCLUSIONES
 La cantidad de glucosa encontrada
en miel se encontró en el valor
promedio esperado
 La prueba de molish permite
identificar la presencia de
carbohidratos de manera general.
 La prueba de lugol determina la
presencia de polisacáridos,
específicamente la de almidón
debido a sus características
estructurales.
 La prueba de Barfoed permite
diferenciar entre monosacáridos y
disacáridos reductores, partiendo
del tiempo en el que se produzcan
las reacciones de cada uno.
 La prueba Bial determina la
presencia de pendosas, en este caso
se esperaba la reacción para una
xilosa, la cual es una aldopentosa
(monosacáridos, con un grupo
funcional 7ldehído)
 La prueba de Seliwanoff aunque
identifica aldosas y cetosas, pueden
también dar un resultado negativo
para sacarosa, debido a la anulación
de las propiedades reductoras de la
glucosa y la fructosa.
REFERENCIAS
 [1] Lic.Khistopher Ugas.
Determinación del contenido de
glucosa en miel de abeja y análisis
cualitativos de carbohidratos. 2019.
Disponible en:
https:///steemir.com/spanish@Khris
aeroth/determinacion-del-
contenido-de-glucosa-en-miel-de-
abeja-y-analisis-cualitativo-de-
carbohidratos.
 [2] GabrielRosado. Carbohidratos.
Pruebas de identificación Fehling,
Benedict, Tollens, Lugol, Molish,
 Bial, Seliwanoff, Barfoed.
Disponible en:
https:///youtu.be/3eB6QRfJM64
 [3] Sanchez-Viesca, Francisco;
Gomez, Reina. Reactivis
Involedinthe SeliwanoffReaction.
2018. Prueba Seliwanoff.2020.
Disponible en:
https://es.m.wikipedia.org/wiki/Prue
badeSeliwanof#citere-1
 [4] Lobos Ortega, Iris; Currián
Montes, Maribel. COMPOSICIÓN
NUTRICIONAL Y CALIDAD DE
LA MIEL PRODUCIDA EN EL
TERRITORIO PATAGONIA
VERDE. 2020.
Disponible en:
https://biblioteca.inia.cl/bitstream/h
andle/20.500.14001/67894/Capitulo
%206.pdf?sequence=7&isAllowed=
y