PRE REPORTE 2

DETERMINACION DE
AZUCARES REDUCTORES POR
METODO DNS

FISICOQUIMICA II
JOVHANA STFANIA TERRAZAS CARREON
DR. LEOPOLDO RIOS GONZALEZ
FUNDAMENTO DEL METODO
El método DNS (técnica de miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido 3,5
dinitrosalicílico para la hidrólisis de polisacáridos presentes en una muestra.
Determina las absorbancias por medio de un espectrofotómetro a 540nm. Esta
técnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos durante una
fermentación o para cuantificar los productos de una reacción enzimática. La curva
de calibración es la representación gráfica en un eje de coordenadas, de la
Absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la Concentración (eje de abscisas: X). Se
ensayan varias soluciones de concentración conocida y se determinan sus
absorbancias, construyéndose la curva de calibrado, que es una recta. La
concentración de una solución problema (desconocida), se averigua por interpolación
de la Abs de la solución en la curva de calibración, o a través de la ecuación de la
recta (y = mx + b) donde: Absorbancia (y) = constante (m) xconcentración +
absorbancia del blanco.

REACCION QUE OCURRE

La reacción química que ocurre en la determinación de azúcares reductores por el
método DNS (3,5 Dinitrosalicílico) implica la interacción entre los azúcares reductores
presentes en la muestra y el reactivo DNS (3,5 dinitrosalicílico), en un medio alcalino.
Esta reacción conduce a la formación de un producto de color rojo llamado complejo
de Osazonas, cuya intensidad de color está directamente relacionada con la
concentración de azúcares reductores en la muestra.
La reacción general se puede representar de la siguiente manera:
Azúcar reductor (RCHO) + DNS Complejo de Osazonas (rojo)
El reactivo DNS, que es una mezcla de 3,5 dinitrosalicílico y ácido clorhídrico (HCl)
en medio alcalino (generalmente hidróxido de sodio, NaOH), reacciona con los
grupos aldehído o cetona presentes en los azúcares reductores. Este reactivo se
elige porque es capaz de reducirse en presencia de azúcares reductores, formando el
complejo de Osazonas, que es un compuesto altamente coloreado.
La reacción específica involucrada en la formación del complejo de Osazonas puede
variar dependiendo del tipo de azúcar reductor presente en la muestra.
MATERIALES Y REACTIVOS
8 tubos de ensayo de 10x75 10 mL
1 gradilla para los tubos
2 pipetas graduadas de 1 Ml
1 pipeta graduada de 5 ml
3 matraces de aforación de 25 mL
Jeringas para pipetas
Muestra de jugo o refresco (muestra problema)
1 vasija de lamina (para baño maría) donde quepa la gradilla 1 parrilla de
calentamiento

PROCEDIMIENTO
1. Preparación de diluciones de la muestra problema
2. Dilución 1:10: 2.5 mL de la muestra problema y aforar a 25 mL con agua
destilada
3. Dilución 1:50: 5 mL de la disolución 1:10 y aforar a 25 mL con agua destilada
4. Dilución 1:100: 2.5 mL de la disolución 1:10 y aforar a 25 mL con agua
destilada

REACCION CON MUESTRA CON DNS

5. Por duplicado, agregue 0.5 mL de cada muestra (de cada dilución) y use como
blanco 0.5 mL de agua destilada (también por duplicado).
6. Agregue 0.5 mL de reactivo DNS a cada tubo, agite en vortex y colóquelos en baño
maría (hirviendo) durante 5 minutos.
7. En baño de hielo enfríe los tubos.
8. Diluya cada tubo con 4 mL de agua destilada y lea en el espectrofotómetro a
una longitud de onda de 540 nm •
9. Determine la concentración de azucares reductores de acuerdo a la curva de
calibración proporcionada por el profesor.
 BIBLIOGRAFÍA
Vega, J. A. (2014, 25 octubre). Determinaciòn de azúcares reductores por espectrofotometría
(método dns) [Diapositivas]. SlideShare. https://www.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-
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Aparicio, M. (s. f.). Determinación de azúcares reductores por el método DNS. Scribd. https://
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Dns, M. (s. f.). METODO DE DNS. https://metodosdeanalisisdealimentos.blogspot.com/2018/04/

proposito- elmetodo-dns-acido.html.