3. ANALISIS PROXIMALES.

Los anlisis comprendidos dentro de este grupo, tambin conocido como anlisis
proximales Weende, se aplican en primer lugar a los materiales que se usarn para
formular una dieta como fuente de protena o de energa y a los alimentos terminados,
como un control para verificar que cumplan con las especificaciones o requerimientos
establecidos durante la formulacin. Estos anlisis nos indicarn el contenido de
humedad, protena cruda (nitrgeno total), fibra cruda, lpidos crudos, ceniza y extracto
libre de nitrgeno en la muestra. Una descripcin ms amplia de estos anlisis se puede
encontrar en Osborne y Voogt (1978), MAFF (1982) y AOAC (1984).
3.1. Humedad.
Durante el balanceo de la racin, es fundamental conocer el contenido de agua en cada
uno de los elementos que la compondrn; as mismo, es necesario vigilar la humedad en
el alimento preparado, ya que niveles superiores al 8% favorecen la presencia de
insectos y arriba del 14%, existe el riesgo de contaminacin por hongos y bacterias
(Cockerell et al., 1971). El mtodo se basa en el secado de una muestra en un horno y su
determinacin por diferencia de peso entre el material seco y humedo.
Aparatos
Horno de secado.
Desecadores.
Procedimiento
1. Pese alrededor de 510 g de la muestra previamente molida.
2. Coloque la muestra en un horno a 105C por un mnimo de 12 h.
3. Deje enfriar la muestra en un desecador.
4. Pese nuevamente cuidando de que el material no este expuesto al medio
ambiente.
Clculos
Contenido de humedad (%) = 100(((B-A) - (C-A))/(B-A))
Donde:
A = Peso de la charolilla seca y limpia (g)
B = Peso de la charolilla + muestra hmeda (g)
C = Peso de la charolilla + muestra seca (g)

FIGURA 1
Determinacin del contenido de humedad en ingredientes alimenticios.
3.2. Protena cruda.
Por su costo es este el nutriente ms importante en la dieta en una operacin comercial;
su adecuada evaluacin permite controlar la calidad de los insumos proteicos que estn
siendo adquiridos o del alimento que se est suministrando. Su anlisis se efecta
mediante el mtodo de Kjeldahl, mismo que evala el contenido de nitrgeno total en la
muestra, despus de ser digerida con cido sulfrico en presencia de un catalizador de
mercurio o selenio.
a) Mtodo simple propuesto por Chow et al. (1980)
Reactivos
Oxido de mercurio, grado reactivo.
Sulfato de potasio o sulfato de sodio anhidro, grado reactivo.
Acido sulfrico (98%), libre de Nitrgeno.
Parafina.
Solucin de hidrxido de sodio al 40%; disolver 400 g de hidrxido de sodio en
agua y diluir a 1,000 ml.
Solucin de sulfato de sodio al 4%.
Solucin indicadora de cido brico; agregue 5 ml de una solucin con 0.1% de
rojo de metilo y 0.2% de verde de bromocresol a un litro de solucin saturada de
cido brico.
Solucin estndar de cido clorhdrico 0.1N.
Materiales y Equipo
Unidad de digestin y destilacin Kjeldahl.
Matraces Kjeldahl de 500 ml.
Matraces Erlenmayer de 250 ml.
Perlas de ebullicin.
Procedimiento
1. Pese con precisin de miligramos 1g de muestra y colquelo en el matraz
Kjeldahl; agrguele 10g de sulfato de potasio, 0.7g de xido de mercurio y 20
ml de cido sulfrico concentrado.
2. Coloque el matraz en el digestor en un ngulo inclinado y caliente a ebullicin
hasta que la solucin se vea clara, contine calentando por media hora ms. Si se
produce mucha espuma, adicinele un poco de parafina.
3. Deje enfriar; durante el enfriamiento adicione poco a poco alrededor de 90 ml de
agua destilada y desionizada. Ya fro agregue 25 ml de solucin de sulfato de
sodio y mezcle.
4. Agregue una perla de ebullicin y 80 ml de la solucin de hidrxido de sodio al
40% manteniendo inclinado el matraz. Se formarn dos capas.
5. Conecte rpidamente el matraz a la unidad de destilacin, caliente y colecte 50
ml del destilado conteniendo el amonio en 50 ml de solucin indicadora.
6. Al terminar de destilar, remueva el matraz receptor, enjuague la punta del
condensador y titule con la solucin estndar de cido clorhdrico.
Clculos:
A = Acido clorhdrico usado en la titulacin (ml)
B = Normalidad del cido estndar
C = Peso de la muestra (g)
Nitrgeno en la muestra (%) = 100[((A B)/C) 0.014]
Protena cruda (%) = Nitrgeno en la muestra * 6.25

FIGURA 2
Determinacin de protena cruda por el mtodo Kjeldahl.
b) Mtodo estndar MAFF (1982) para la determinacin de protenas en alimentos y sus
ingredientes.
Reactivos:
Oxido de mercurio.
Sulfato de potasio o sulfato de sodio anhidro.
Sacarosa.
Zinc granulado.
Granulado de piedra pomex lavada con cido sulfrico y quemada.
Acido sulfrico concentrado (d = 1.84 g/ml).
Solucin de hidrxido de sodio al 40 %.
Solucin saturada de sulfato de sodio.
Solucin de tiosulfato de sodio; 8g de Na
2
S
2
O
3
5H
2
O en 100ml.
Solucin de hidrxido de sodio 0.1N.
Solucin de hidrxido de sodio 0.25N.
Solucin de cido sulfrico 0.1N.
Solucin indicadora de rojo de metilo; disuelva 0.3 g de rojo de metilo en 100
ml de etanol (9596 % V/V).
Solucin indicadora rojo de metilo-azul de metileno; (a) disuelva 0.2g de rojo de
metilo en 100ml de etanol (9596 % V/V) y (b) disuelva 0.1g de azul de
metileno en 100ml de etanol (9596 % V/V), mezcle un volumen de (a) con uno
de (b).
Materiales y Equipo
Unidad de digestin y destilacin Kjeldahl.
Matraces Kjeldahl.
Procedimiento
1. Pese 1g de muestra con aproximacin de miligramos y psela a un matraz
Kjeldahl; adicione 10g de sulfato de potasio o sulfato de sodio, 0.6 0.7g de
xido de mercurio, 25 ml de cido sulfrico y unos pocos granos de piedra
pomex.
2. Caliente el matraz moderadamente al principio, agitando ocasionalmente hasta
que la materia este carbonizada y las burbujas hayan desaparecido, luego
aumente la temperatura y permita que se establezca una ebullicin suave. Evite
que las paredes del matraz se sobrecalienten para que no se le peguen partculas
orgnicas.
3. Cuando la solucin se vea clara y sin color, contine la ebullicin por 2 horas
ms y luego permita que se enfre. Si despus de la digestin y del enfriamiento
se cristaliza la solucin repita el anlisis; si sigue ocurriendo la cristalizacin
repita el anlisis usando una mayor cantidad de cido sulfrico.
4. Adicione con cuidado al matraz 250350ml de agua destilada, mezclando el
contenido al mismo tiempo; deje enfriar y agrguele unas lentejas de Zinc.
5. Transfiera 25 ml de solucin de cido sulfrico 0.1 0.5N al matraz de colecta
del aparato de destilacin, de acuerdo con el valor esperado de Nitrgeno en la
muestra, as como unas cuantas gotas de indicador de rojo de metilo.
6. Tomando precauciones para evitar prdida de amonio, adicione cuidadosamente
a la muestra 100 ml de solucin de hidrxido de sodio y luego 10 ml de solucin
de sulfato de sodio o 25 ml de solucin de tiosulfato de sodio. Mezcle bien y
conecte inmediatamente al aparato de destilacin.
7. Caliente el matraz de tal manera que se destilen alrededor de 150 ml del lquido
en 30 min. Al finalizar, mida con papel indicador el pH del destilado resultante y
si es alcalino contine con la destilacin, la cual se suspender cuando el pH
aparezca neutro. Durante este proceso agite ocasionalmente el contenido del
matraz. Si el destilado se torna alcalino, la determinacin deber ser abandonada
y el anlisis repetido con los ajustes apropiados.
8. En el matraz de colecta titule el exceso de cido sulfrico con hidrxido de sodio
0.1 0.25N, de acuerdo con la normalidad del cido empleado, al punto final del
indicador de rojo de metilo o rojo de metilo-azul de metileno.
9. Corra un blanco de reactivos usando 1g de sacarosa en lugar de la muestra, para
usarlo en el clculo de los resultados.
Clculos
a. Determine el H
2
SO
4
consumido. 1 ml de cido 1.4mg de Nitrgeno.
b. Calcule el porcentaje de Nitrgeno en la muestra y convirtalo a porcentaje de
protena multiplicando el resultado por 6.25.
c. Si se sospecha de la presencia de Nitrgeno amoniacal o nitratos en la muestra,
debern ser evaluados para restarse del Nitrgeno total. Exceptuando los
alimentos para rumiantes, se deber evaluar el contenido de Nitrgeno no
proteico y tambin substraerse del Nitrgeno total.

FIGURA 3
Mtodo estndar MAFF para la determinacin de protena cruda
3.3. Lpidos crudos
En este mtodo, las grasas de la muestra son extradas con ter de petrleo y evaluadas
como porcentaje del peso despus de evaporar el solvente.
Reactivos, Materiales y Equipo
- Eter de petrleo, punto de ebullicin 4060C.
Aparato de extraccin Soxhlet.
Horno de laboratorio ajustado a 105C.
Desecador.
Dedales de extraccin.
Procedimiento
1. Saque del horno los matraces de extraccin sin tocarlos con los dedos, enfrelos
en un desecador y pselos con aproximacin de miligramos.
2. Pese en un dedal de extraccin manejado con pinzas, de 3 a 5g de la muestra
seca con aproximacin de miligramos y colquelo en la unidad de extraccin.
Conecte al extractor el matraz con ter de petrleo a 2/3 del volumen total.
4. Lleve a ebullicin y ajuste el calentamiento de tal manera que se obtengan
alrededor de 10 reflujos por hora. La duracin de la extraccin depender de la
cantidad de lpidos en la muestra; para materiales muy grasosos ser de 6 horas.
5. Al trmino, evapore el ter por destilacin o con rotovapor. Coloque el matraz
en el horno durante hora y media para eliminar el ter. Enfre los matraces en un
desecador y pselos con aproximacin de miligramos. La muestra desengrasada
puede usarse para la determinacin de fibra cruda.
Clculos
A = Peso del matraz limpio y seco (g)
B = Peso del matraz con grasa (g)
C = Peso de la muestra (g)
Contenido de lpidos crudos (%) = 100((B - A)/C)

FIGURA 4
Determinacin de lpidos por el mtodo de Soxhlet
3.4. Fibra cruda
Este mtodo permite determinar el contenido de fibra en la muestra, despus de ser
digerida con soluciones de cido sulfrico e hidrxido de sodio y calcinado el residuo.
La diferencia de pesos despus de la calcinacin nos indica la cantidad de fibra
presente.
Reactivos
Solucin de cido sulfrico 0.255N.
Solucin de hidrxido de sodio 0.313N, libre de carbonato de sodio.
Antiespumante (ej. alcohol octil o silicona).
Alcohol etlico al 95% (V/V).
Eter de petrleo.
Solucin de cido clorhdrico al 1% (V/V).
Materiales y equipo.
Matraz de bola fondo plano, 600 ml, cuello esmerilado.
Unidad de condensacin para el matraz.
Matraz Kitazato de un litro.
Embudo Buchner.
Crisol de filtracin.
Conos de hule.
Papel filtro Whatman No. 541.
Pizeta de 500 ml.
Desecador.
Horno de laboratorio.
Mufla.
Mtodo
1. Pese con aproximacin de miligramos de 2 a 3 gramos de la muestra
desengrasada y seca. Colquela en el matraz y adicione 200ml de la solucin de
cido sulfrico en ebullicin.
3. Coloque el condensador y lleve a ebullicin en un minuto; de ser necesario
adicinele antiespumante. Djelo hervir exactamente por 30 min, manteniendo
constante el volumen con agua destilada y moviendo peridicamente el matraz
para remover las partculas adheridas a las paredes.
4. Instale el embudo Buchner con el papel filtro y precalintelo con agua hirviendo.
Simultneamente y al trmino del tiempo de ebullicin, retire el matraz, djelo
reposar por un minuto y filtre cuidadosamente usando succin; la filtracin se
debe realizar en menos de 10 min. Lave el papel filtro con agua hirviendo.
5. Transfiera el residuo al matraz con ayuda de una pizeta conteniendo 200ml de
solucin de NaOH en ebullicin y deje hervir por 30 min como en paso 2.
6. Precaliente el crisol de filtracin con agua hirviendo y filtre cuidadosamente
despus de dejar reposar el hidrolizado por 1 min.
7. Lave el residuo con agua hirviendo, con la solucin de HCI y nuevamente con
agua hirviendo, para terminar con tres lavados con ter de petrleo. Coloque el
crisol en el horno a 105C por 12 horas y enfre en desecador.
8. Pese rpidamente los crisoles con el residuo (no los manipule) y colquelos en la
mufla a 550C por 3 horas, djelos enfriar en un desecador y pselos
nuevamente.
Clculos
A = Peso del crisol con el residuo seco (g)
B = Peso del crisol con la ceniza (g)
C = Peso de la muestra (g)
Contenido de fibra cruda (%)= 100((A - B)/C)
Recomendaciones
Uno de los problemas ms frecuentes durante la evaluacin de la fibra cruda es la
oclusin de los filtros, por lo que en algunos casos se recomienda sustituir el papel
(paso 4 del mtodo) por una pieza de tela de algodn. Para evitar la saturacin del crisol
de filtracin (paso 6) colquelo ligeramente inclinado y agregue muy lentamente el
material a filtrar, de manera que gradualmente se vaya cubriendo la superficie filtrante.
Con el uso los crisoles de filtracin tienden a taparse. Para su limpieza calcnelos a
500C y hgales pasar agua en sentido inverso. Cuando se han tapado con partculas
minerales, prepare una solucin que contenga 20% KOH, 5% de Na
3
PO
4
y 0.5% de
EDTA sal sdica, calintela y hgala pasar por el crisol en sentido inverso. Este
tratamiento erosiona al filtro de vidrio.

FIGURA 5
Determinacin proximal de fibra cruda
3.5. Ceniza
El mtodo aqu presentado se emplea para determinar el contenido de ceniza en los
alimentos o sus ingredientes mediante la calcinacin. Se considera como el contenido de
minerales totales o material inorgnico en la muestra.
Materiales y equipo.
Crisoles de porcelana.
Mufla.
Desecador.
Procedimiento
1. En un crisol de porcelana que previamente se calcin y se llevo a peso constante,
coloque de 2.5 a 5g de muestra seca.
2. Coloque el crisol en una mufla y calcnelo a 550C por 12 horas, deje enfriar y
pselo a un desecador.
3. Cuidadosamente pese nuevamente el crisol conteniendo la ceniza.
Clculos
A = Peso del crisol con muestra (g)
B = Peso del crisol con ceniza (g)
C = Peso de la muestra (g)
Contenido de ceniza (%)= 100((A - B)/C)

FIGURA 6
Determinacin del contenido de ceniza en ingredientes alimenticios.
3.6. Extracto Libre de Nitrgeno (ELN)
Dentro de este concepto se agrupan todos los nutrientes no evaluados con los mtodos
sealados anteriormente dentro del anlisis proximal, constituido principalmente por
carbohidratos digeribles, as como tambin vitaminas y dems compuestos orgnicos
solubles no nitrogenados; debido a que se obtiene como la resultante de restar a 100 los
porcientos calculados para cada nutriente, los errores cometidos en su respectiva
evaluacin repercutirn en el cmputo final.
Clculo
Extracto Libre de Nitrgeno (%) = 100-(A+B+C+D+E)
Donde:
A = Contenido de humedad (%)
B = Contenido de protena cruda (%)
C = Contenido de lpidos crudos (%)
D = Contenido de fibra cruda (%)
E = Contenido de ceniza (%)
3.7. Correcciones
Debido a que los anlisis normalmente se hacen con muestras preparadas para tal fin, es
necesario realizar ciertas correcciones en los resultados para que reflejen el contenido
real de nutrientes en el material en las condiciones en que se usar.
a) Humedad
Si los anlisis se efectuaron en base seca (BS), esto es material deshidratado, es
necesario corregir el resultado para expresarlo en base hmeda (BH), tal como se
encuentra en el alimento o material para su elaboracin, mediante la siguiente
expresin:
A = Contenido de nutriente (%/BS)
B = Contenido de humedad de el material (%)
Contenido de nutriente (%/BH) = (A ((100 - B)/100))
b) Lpidos
Cuando se usa material desengrasado, por ejemplo en el anlisis de fibra cruda, se aplica
una expresin similar a fin de obtener un valor representativo de la muestra:
A = Contenido de fibra (desengrasada, %)
B = Contenido de lpidos en el material (%)
Contenido de fibra ajustado (%) = (A ((100 - B)/100))
1. INTRODUCCION
El desarrollo de la acuacultura en sistemas semi intensivos e intensivos ha forzado el
desarrollo de patrones de alimentacin cada vez ms eficientes, basados en los
requerimientos nutricionales de cada una de las especies a cultivar. Para que el animal
presente un crecimiento adecuado en el menor tiempo y ms bajo costo posibles, el
alimento suministrado debe poseer caractersticas nutricionales ptimas, por lo cual en
la industria de alimentacin de peces, como en las dems especies animales, la
elaboracin, los ingredientes y el almacenamiento de los alimentos procesados, deben
de estar sometidos a estrictos controles de calidad.
En la acuacultura semi-intensiva e intensiva, la calidad del alimento est considerada
como uno de los factores de mayor influencia en el xito de un cultivo, ya que los
costos del alimento y la alimentacin, representan por lo general entre el 50 y 70% de
los costos de operacin en un sistema de este tipo. La calidad de los alimentos va a
depender en primer trmino de la calidad de los ingredientes utilizados en la
preparacin del alimento balanceado, as como tambin del tipo de procesamiento a que
se sometan antes y durante la elaboracin del alimento. Adicionalmente, el cuidado que
se tenga para almacenar tanto ingredientes como alimento terminado, influir
notablemente en sus propiedades nutritivas.
Los alimentos balanceados son preparados con base en los requerimientos nutricionales
de cada especie y an cuando la dieta se formula para satisfacerlos, no siempre contiene
los niveles de nutrientes calculados una vez preparado, debido a que el proceso usado en
su elaboracin puede alterar significativamente su valor nutricional; por ejemplo, el
calor puede daar algunos nutrientes y/o puede hacerlos ms disponibles eliminando los
txicos termolbiles, mientras que por otro lado la molienda puede afectar la
digestibilidad de protenas y carbohidratos (Harris, 1980). La calidad del alimento
tambin se modifica despus de pasar cierto tiempo en el almacn, donde adems de
sufrir cambios en el valor nutricional, se pueden presentar alterciones en otras
caractersticas como son el color, la textura, el sabor y el olor. Por otra parte existe el
grave riesgo de contaminarse con los desechos de roedores, insectos y micoorganismos
que aceleran an ms su deterioro (Limborg, 1979; Chow et al., 1980; Smith and Moss,
1985).
Teniendo en consideracin todos estos factores, resalta la importancia de tener un
control de calidad de los ingredientes alimenticios y del producto terminado, con el fin
de asegurar que la dieta posea los niveles nutricionales mnimos requeridos, ya que nos
proporciona la composicin exacta del material y el nivel de sustancias txicas
normalmente presentes. Este control se inicia con el anlisis de los ingredientes con que
se elaborar el alimento y finaliza con la certificacin de los niveles de nutrientes en el
alimento preparado, as como su adecuado almacenaje (Frazer, 1967; Harris, 1980).
Adicionalmente, es claro que solo es posible formular una dieta completa, si se conoce
con precisin al menos la composicin proximal de los ingredientes con que se
elaborar, sin embargo, Tacon (1979) recomienda que el valor nutricional de un
material usado en la formulacin de alimentos, debe evaluarse con base en:
a. Su contenido de Nitrgeno proteico y no proteico.
b. La composicin de aceites y cidos grasos.
c. El contenido de fibra cruda y carbohidratos solubles
d. Su contenido de minerales y vitaminas.
e. La presencia de microbios.
f. La presencia de compuestos orgnicos txicos.
g. La variabilidad de la composicin qumica.
De manera ideal cualquier ingrediente debera pasar por los puntos de control sealados,
sin embargo, si por limitaciones econmicas o de equipo no es posible, se debe entonces
procurar cubrir al menos aquellos anlisis que garanticen una calidad mnima deseable y
una seguridad de que los animales no presentarn reacciones adversas al alimento.
An cuando el control de calidad es un tema que merece tratarse exhaustivamente, este
manual est enfocado particularmente a los mtodos bsicos de anlisis qumicos
necesarios para una adecuada evaluacin de ingredientes y dietas elaboradas, con el
objeto de ponerlos a la disposicin de la mayora de acuacultores y personas interesadas
en este tipo de evaluaciones que posean conocimientos bsicos de qumica. Los
mtodos propuestos han sido recopilados de diferentes fuentes y la mayora son
considerados como estndares de norma.
Con fines prcticos los anlisis se han agrupado en tres secciones; en la primera se
incluyen los mtodos considerados dentro del anlisis proximal, para determinar el
contenido de humedad, protena cruda, lpidos crudos, fibra cruda, ceniza y extracto
libre de nitrgeno; este anlisis permite conocer los niveles porcentuales de cada
nutriente en el material pero no indica nada acerca de la calidad de los nutrientes, para
lo cual se requieren otros anlisis complementarios, algunos de los cuales se incluyen en
este manual en la segunda seccin donde se consideran como anlisis especiales.
En un tercer apartado se incluyen las tcnicas ms sencillas para la deteccin de algunos
de los txicos y antinutrientes ms comunes, ya que su presencia puede afectar
negativamente la eficiencia de utilizacin de los alimentos, e inclusive, ser causa de
mortalidad. Consideramos que este captulo es particularmente importante cuando se
incluye en los alimentos subproductos agroindustriales como harina de soya, algodn, o
nuevas fuentes proteicas, particularmente de origen vegetal.
Antes de realizar alguna tcnica analtica, es importante considerar las siguientes
recomendaciones:
a. Asegurarse de que cuenta con los reactivos y equipo necesarios para efectuar la
determinacin deseada, ya que una vez iniciado un anlisis, por lo general no es
posible suspenderlo temporalmente en tanto se consiguen los faltantes.
b. Efecte cada anlisis por TRIPLICADO. Es ms exacto trabajar con valores
promedio que con un slo dato; si los resultados entre las rplicas varan
notablemente, es preferible repetir todo el anlisis.
c. Pese la muestra con la mayor aproximacin posible. Tres o cuatro decimales nos
dan una mayor exactitud en el clculo. Siempre utilice una balanza analtica.
d. Despus de pasar la muestra al recipiente donde se realizar el anlisis, pese
nuevamente el contenedor a fin de ajustar el peso final. La exactitud en el peso
es fundamental para obtener un buen resultado, ya que la mayor parte de las
tcnicas son gravimtricas.
e. Nunca modifique el tamao de muestra, los tiempos en las diferentes etapas o el
tipo de reactivos, a menos de que se hagan pruebas comparativas que garanticen
la precisin de los resultados. Recuerde que los anlisis normalmente se basan
en mtodos estndar aceptados o exigidos por las autoridades reguladoras.
f. Utilice siempre los equipos y accesorios de seguridad requeridos, como son
campanas de extraccin, mscaras y batas.
g. Recuerde que estar manejando substancias txicas o peligrosas para el
organismo, por ello extreme las precauciones requeridas segn el caso y no
omita ninguna.
2. PREPARACION DE LA MUESTRA
PARA ANALISIS
La muestra utilizada en el anlisis debe ser representativa del total del lote de material,
por lo cual se debe de aplicar la metodologa apropiada para la toma de muestras. Se
recomienda la siguiente rutina para tener una buena representatividad:
a. En lotes a granel menores de 10 ton tomar dos muestras por cada tonelada.
b. En lotes a granel mayores de 10 ton tomar una muestra por tonelada.
c. Para materiales encostalados, para 1 a 10 costales tomar muestras de cada uno;
con ms de 10 costales muestrear un 10% del total al azar.
Las muestras se debern tomar de diferentes puntos para que el material sea
representativo del total del lote; posteriormente se mezclan perfectamente y se dividen
en sublotes de 12 kg, se colocan en recipientes hermticos y se almacenan de manera
apropiada hasta su anlisis.
Para cada material se debe llevar un registro para conocer el tipo de proceso al que ha
estado sujeto previamente (subproductos industriales), su origen (vegetal, animal,
mineral, frmaco) y la parte usada como alimento (principalmente si ha estado sometido
a un proceso que impida su reconocimiento). Estos datos son importantes
particularmente cuando se estn usando productos agrcolas, ya que stos pueden variar
su composicin dependiendo de la variedad cultivada, las condiciones de cultivo o la
poca de cosecha; pueden tambin contener residuos de pesticidas o estar contaminados
por mohos y en el caso de subproductos animales, presentar contaminacin por
antibiticos y hormonas (Frazer, 1967; Harris, 1980).
2.1. Preparacin de la muestra.
Para que un material pueda ser utilizado en el laboratorio de anlisis deber ser
preparado de manera apropiada, esto con el fin de que los resultados obtenidos sean
representativos del total y puedan ser utilizados de manera confiable para la formulacin
del alimento o para la valoracin del mismo, para lo cual se hacen las siguientes
recomendaciones:
a. La cantidad de material debe ser adecuada para realizar todos los anlisis
necesarios; debe ser una muestra homognea y representativa.
b. El manejo de la muestra debe ser cuidadoso para evitar cualquier cambio o
contaminacin.
c. La muestra deber molerse finamente, tamizarse y mezclarse homogneamente.
Esta operacin debe hacerse rpidamente y con la mnima exposicin al medio
ambiente. Evite su sobrecalentamiento durante el molido, por lo cual materiales
sensibles al calor debern ser molidos a mano. Antes de usar el molino
asegrese de que est perfectamente limpio.
d. Si la muestra contiene mucha humedad y la preparacin del material no puede
hacerse sin cambios significativos en sta, determine la humedad antes y
despus de la preparacin.
e. Se recomienda un examen fsico macro y microscpico para detectar la
presencia de materiales contaminantes.
f. Mezcle la muestra perfectamente y divdala en dos partes iguales. De ser
necesario haga un molido preliminar para facilitar esta operacin. Almacene una
de las partes en un frasco hermtico, limpio y seco; la otra parte ser usada en
los anlisis y su tamao deber ser adecuado para la totalidad de las pruebas
requeridas.
g. Al menos que el mtodo de anlisis indique lo contrario, los materiales sern
molidos de inmediato y pasados por una malla de 1 mm
2
; mezcle perfectamente
la muestra tamizada y almacnela en un recipiente hermtico. Antes de tomar
material para cada anlisis mzclese nuevamente.
h. Al menos que se seale lo contrario, las muestras hmedas debern secarse para
su molido y tamizado, siguiendo las indicaciones del punto anterior.
i. Las muestras lquidas y semilquidas debern conservarse en frascos tapados y
mezclarse perfectamente antes de su anlisis.
j. Los materiales debern conservarse en refrigeracin o a temperaturas que eviten
cambios en su composicin. Muestras para anlisis de vitaminas u otras
substancias sensibles a la luz se colocarn en recipientes de vidrio color mbar.
4. ANALISIS ESPECIALES
Entre estas tcnicas se incluye algunos mtodos aplicables a la determinacin de la
calidad de los ingredientes y los productos terminados, con base en su contenido de
micronutrientes, tales como fibra digerible, minerales, vitaminas, actividad enzimtica,
etc.; as mismo, se presenta el mtodo ms ampliamente utilizado para la cuantificacin
de xido de cromo durante la evaluacin de la digestibilidad de las dietas.
4.1. Determinacin de Fibra por Detergente Acido.
Este mtodo permite tener una aproximacin del grado de digestibilidad de las fibras en
el alimento. La muestra es digerida por medio de cetil-trimetil-amonio en cido
sulfrico y el residuo es considerado como la fibra no digerible.
Reactivos
Solucin de detergente cido al 1 % p/v. A un litro de agua agregar poco a poco
56 ml de cido sulfrico concentrado, lleve la solucin a un volumen final de 2 1
con agua y agregue 20g de Cetil-trimetil-amonio.
Antiespumante Dekalin (decahidronaftaleno).
Acetona.
Materiales y Equipo
Horno
Matraces erlenmayer de 500 ml.

Mantilla de calentamiento.
Condensador de dedo fro.
Crisoles de filtracin, porosidad 1.
Procedimiento
1. Muela la muestra en un molino de martillos para que pase la malla de 1 mm.
2. Tome una submuestra y squela durante la noche en un horno a 105C.
3. Enfre la muestra en un desecador.
4. Pese con aproximacin de miligramos un gramo de la muestra seca y colquela
en un matraz erlenmayer de 500 ml.
5. Adicione 100 ml de la solucin de detergente cido y 2 ml del antiespumante.
6. Coloque el matraz en la mantilla con el condensador instalado.
7. Lleve rpidamente a ebullicin (3 a 5 minutos) y contine el calentamiento por 2
horas.
8. Filtre el contenido del matraz por gravedad en un crisol previamente pesado.
9. Enjuague el matraz con agua destilada caliente y filtre.
10. Enjuague el contenido del crisol con 300 ml de agua destilada caliente. Use
succin dbil (por vaco).
11. Enjuague el residuo con acetona y seque.
12. Coloque el crisol en el horno a 105C durante 12 horas.
13. Enfre dentro de un desecador la muestra e inmediatamente despus determine el
peso.
Clculos
Contenido de Fibra (%) = 100 (W
2
/W
1
)
Donde
W
1
= Peso de muestra (g).
W
2
= Peso del residuo (g).

FIGURA 7
Determinacin del contenido de fibra por el mtodo de detergente cido.
4.2. Determinacin de Fibra por Detergente Neutro.
Este mtodo es til para la determinacin de fibras vegetales en alimentos.
Aparentemente tiene la capacidad de separar los componentes nutricionales solubles de
aquellos que no son totalmente aprovechables o que dependen de la fermentacin
biolgica para su aprovechamiento. El mtodo tiene limitaciones en su precisin cuando
los valores de protena son muy altos y los valores de fibra son bajos.
Reactivos
Solucin detergente neutra. Agregue a un litro de agua destilada 30 mg de
sulfato lauril sdico USP, 18.61 g de etilendiamino tetra acetato disdico
dihidrogenado dehidratado, 6.81 g de borato de sodio decahidrato y 4.56 g del
reactivo fosfato cido disdico anhidro. Agtese hasta disolver y mantenga el pH
entre 6.9 y 7.1.
Amilasa (Sigma A 1278) 2g en 90ml H
2
O mas 10 ml de etilenglicol.
Acetona grado reactivo.
Sulfito de sodio anhdro. Se usa nicamente en anlisis de subproductos
animales.
Materiales y Equipo
Equipo de reflujo. Cualquier equipo estndar adecuado para el anlisis de fibra.
Crisoles de filtracin en vidrio. Use crisoles de tipo alto, con porosidad gruesa y
placa de filtracin de 40mm de dimetro con capacidad para 40 50 ml de
lquido.
Cuando los crisoles se obstruyen despus de un uso continuo se prepara una
solucin limpiadora de 20% KOH, 5% de Na
3
PO
4
y 0.5% de EDTA de sodio
que se hace pasar caliente en en sentidi opuesto a travs del crisol. Se debe de
evitar el uso continuo de la solucin pues tiende a erosionar el vidrio.
Procedimiento
1. Pese aproximadamente 1 g de muestra molida para pasar el tamiz de 1 mm y
depostela en un matraz de fondo redondo para iniciar el reflujo.
2. Agregue en orden 100 ml de detergente neutro a temperatura ambiente y 2 ml de
amilasa por muestra.
3. Caliente para que la solucin hierva en 5 a 10 minutos; en el momento de iniciar
la ebullicin reduzca la temperatura para evitar la formacin de espuma. Ajuste
la temperatura para que la solucin hierva suavemente y mantenga en reflujo por
60 minutos a partir del instante en que empieza a hervir.
4. Agite el matraz para suspender y decante la muestra en un crisol previamente
pesado y preparado para succin al vaco. Use poco vaco al principio
incrementndolo a medida que lo vaya requiriendo. Pase toda la muestra al
crisol utilizando un mnimo de agua caliente (80C) para el lavado del matraz.
Elimine el vaco, afloje con cuidado la capa de muestra en el fondo del crisol sin
removerla y agregue agua caliente, repitiendo el lavado varias veces. Finalmente
lave dos veces con acetona sin remover la muestra del filtro y seque con vaco.
5. Seque los crisoles a 105C durante 12 h y pselos en caliente (esta operacin no
debe durar ms de 30 seg). Si no se puede pesar de inmediato, enfre los crisoles
en un desecador que contenga como desecante pentxido de fsforo (P
2
O
5
).
6. El residuo de fibra recuperado se registra en trminos de paredes celulares.
7. Calcule el contenido celular (material soluble) substrayendo este valor de 100.
NOTA:
En el caso de granos y subproductos de molinos es posible que se forme un material
gelatinoso derivado de los almidones y la protena, el cual obstruye el filtro e impide el
lavado. Para mejorar la filtracin haga pasar aire en sentido inverso en el crisol. As
mismo al evite que la muestra se adhiera al fondo del matraz durante el inicio del
calentamiento hasta la ebullicin, calentando rpidamente con agitacin constante.
Clculos
a. Paredes celulares (%) en base seca o como se ofrece. 100(((peso del crisol +
paredes celulares) - (peso del crisol))/peso de la muestra.
b. El porciento del contenido celular se calcula substrayendo de 100 el % de
paredes celulares.
% contenido celular = 100 - % paredes celulares.
Van Soest, P.J. and R.H. Wine, 1967, J. Assoc. Official Anal. Chem., 50:50.

FIGURA 8
Determinacin del contendido de fibra por el mtodo de detergente neutro
4.3. Ceniza insoluble en Acido Clorhdrico
Este mtodo determina el contenido de substancias minerales insolubles en cido
clorhdrico contenidos en los alimentos; de acuerdo con el contenido mineral de la
muestra se aplica ya sea el mtodo A, para alimentos con alto contenido de materia
orgnica, o el mtodo B, recomendable para alimentos con un alto contenido de
minerales, incluyndose aquellos cuyo contenido de ceniza insoluble es mayor a 1 % al
evaluarse previamente con el mtodo A.
Reactivos
Solucin HCI 3N.
Solucin A de cido tricloroactico al 20%, 20 g en 100 ml.
Solucin B de cido tricloroactico al 1 %, 1 g en 100 ml.
Materiales y Equipo
Placa de calentamiento.
Mufla elctrica con termostato.
Crisoles de calcinacin: Platino o aleacin de platino y oro (10% Pt, 90% Au);
Rectangulares (60 40 25 mm) o circulares (6075 mm de dimetro con 20
25 mm de alto).
Mtodo A
Calcine la muestra siguiendo el mtodo de determinacin de ceniza. Transfiera el
residuo a un vaso de precipitado de 250 400 ml usando 75 ml de cido clorhdrico 3N
y evapore a sequedad, contine calentando durante una hora ms para deshidratar
cualquier slice presente. Enfre y agregue 75 ml de solucin de HCI 3N y caliente a
ebullicin suavemente por 15 minutos. Filtre la solucin en caliente a travs de un papel
filtro libre de ceniza y lave el residuo con agua caliente hasta que el filtrado deje de ser
cido.
Seque el papel filtro conteniendo el residuo y calcine a 550700C en un crisol de
platino prepesado, enfre en un desecador y posteriormente pese.

FIGURA 9
Determinacin de ceniza insoluble en cido clorhdrico. Mtodo A.
Mtodo B
Pese alrededor de 5 g de muestra con una aproximacin de 0.001 g y transfirala a un
vaso de precipitado de 250 400 ml. Adicione 25 ml de agua destilada y 25 ml de
solucin de cido clorhdrico 3N. Mezcle con cuidado y espere hasta que ya no se
liberen gases.
Agregue otros 50 ml de cido clorhdrico y espere hasta que cese la liberacin de gases
y coloque el vaso en un bao mara a ebullicin durante 30 minutos, con el fin de
hidrolizar los almidones presentes. Filtre la solucin cuando todava este caliente con
papel filtro libre de cenizas, posteriormente lave el filtro con 50 ml de agua tibia hasta
que el filtrado deje de ser cido (ver nota). Coloque el papel filtro conteniendo el
residuo en un crisol de platino previamente pesado, seque y calcine la muestra a 550
700C. Transfiera las cenizas a un vaso de precipitado usando 75 ml de cido
clorhdrico 3N y contine el anlisis como en el mtodo anterior a partir de la etapa en
la que se calienta la muestra suavemente por 15 minutos.
NOTA:
Si se hace difcil filtrar, repita el anlisis reemplazando los 50 ml de cido clorhdrico
3N con 50 ml de la solucin A de cido tricloroactico y enjuague el filtro con una
solucin tibia de la solucin B de cido tricloroactico.
Clculos
Calcule el peso de residuo y exprese el resultado como porciento (%) de la muestra.

FIGURA 10
Determinacin de ceniza insoluble en cido clorhdrico. Mtodo B.
4.4. Carbohidratos Totales Disponibles (Clegg-
Anthrone).
Este mtodo determina la cantidad de carbohidratos totales, basndose en su contenido
de almidones hidrolizables y azcares solubles.
Reactivos
Solucin de cido perclrico al 52 %. 279ml de cido perclorico (grado
especfico 1.70) en 100 ml de agua destilada; deje enfriar antes de usar.
Solucin de cido sulfrico. 760ml de H
2
SO
4
(grado especfico 1.84) en 330ml
de agua destilada; deje enfriar antes de usar.
Reactivo Anthrone. Prepare suficiente reactivo Anthrone preparando una
solucin de cido sulfrico al 0.1 % con el fin de usarla el mismo da.
Solucin estndar de glucosa. Disuelva 100mg de glucosa en 100ml de agua.
Solucin estndar de glucosa diluida. Diluya 10ml del estndar de glucosa a 100
ml de agua destilada (1ml = 0.1mg de glucosa).
Materiales y Equipo
Espectrofotmetro.
Papel filtro Wathman no. 542 o Schleicher y Schill no. 150.
Procedimiento
Extraccin:
1. Pese con aproximacin de 0.001g 1.0g de muestra seca 2.5g de muestra
hmeda conteniendo aproximadamente de 60 a 300 mg de carbohidratos totales
disponibles.
2. Transfiera cuantitativamente a una probeta graduada de 100 ml con tapn.
3. Adicione 10 ml de agua y agite con una varilla de vidrio para dispersar la
muestra.
4. Adicione 13 ml de la solucin de cido perclrico. Agite constantemente con la
varilla de vidrio durante 20 minutos.
5. Enjuague la varilla con agua destilada y lleve el volumen a 100 ml. Mezcle y
filtre a un matraz volumtrico de 250 ml.
6. Enjuague la probeta graduada con agua destilada y adicione al matraz
volumtrico. Afore el matraz con agua destilada y agite.
Determinacin:
1. Diluya 10 ml del extracto a 100 ml con agua destilada. Con una pipeta pase a un
tubo de ensaye 1 ml del filtrado diluido.
2. Tome con la pipeta dos muestras de 1 ml de agua destilada que servirn como
blancos por duplicado y coloque cada uno de ellos en un tubo de ensaye.
3. Tome dos blancos duplicados de 1 ml usando la solucin de glucosa diluida.
4. Agregue rpidamente a todos los tubos 5ml de reactivo de anthrone recin
preparado. Tape los tubos y mezcle vigorosamente. Colquelos en un bao
mara y caliente durante 12 minutos.
5. Enfre rpidamente a temperatura ambiente. Transfiera la solucin a celdas para
espectrofotmetro de 1 cm. El color verde es estable slo por 2 horas.
8. Lea la absorvancia a 630 nm contra el blanco.
Clculos
Carbohidratos totales disponibles (% de glucosa) = (25 b)/(a W)
Donde
W = Peso en g de la muestra.
a = Absorvancia del estndar diluido
1
.
b = Absorvancia de la muestra diluida.
1
El grfico es una lnea recta n el rango de 0 0.15 mg de glucosa (manual) 0.0 1.5
mg de glucosa (automtico).
Clegg, K.M. (1956). J.Sci. Food Agric. 7, 40.

FIGURA 11
Determinacin de carbohidratos totales disponibles en alimentos.
4.5. Nitrgeno Proteico y No Proteico
Esta tcnica permite reconocer la porcin de nitrgeno de origen proteico y no proteico
de los materiales analizados. Puede aplicarse a todo tipo de materiales.
Reactivos
Acetato de cobre monohidratado en solucin al 3 % p/v.
Sulfato de aluminio y potasio (2 H
2
O) en solucin al 10% p/v.
Antiespumante de silicona.
Materiales y Equipo
Matraces kjeldhal de 800 ml.
Embudos buchner de 12 cm de dimetro.
Matraces kitazato.
Papel filtro Whatman no. 541 Schleicher y Schill no. 1505, de 18 cm.
Procedimiento
Pese 2 g de muestra con ms de 25% de protena cruda, lg para rangos de 25 50% de
protena y 0.5g para materiales con ms de 50% de protena cruda. Transfierala a un
matraz kjeldahl y agregue aproximadamente 50 ml de agua destilada, unos pocos
grnulos de antiebullente y una o dos gotas del antiespumante.
Caliente a ebullicin durante 30 minutos (teniendo cuidado de que no se seque). Cuando
la muestra est todava caliente agregue 2 ml de la solucin de sulfato de aluminio y
potasio, mezcle perfectamente y caliente a ebullicin, adicione 50 ml de la solucin de
acetato de cobre mezclando perfectamente bien y deje enfriar. Filtre usando vaco. Lave
el matraz y el precipitado con 50 ml de agua destilada fra.
Para evaluar el nitrgeno proteico analice el residuo por medio de la marcha de
nitrgeno total de kjeldahl. El nitrgeno no proteico se analiza por medio de la misma
tcnica a partir del lquido filtrado. Los resultados respectivos de los slidos y lquidos
por medio de kjeldahl ofrecern directamente los datos de nitrgeno proteico (NP) y no
proteico (NNP) respectivamente.

FIGURA 12
Determinacin del contenido de nitrgeno proteico y no proteico en alimentos.
4.6. Determinacin de Protenas por el Mtodo de
Lowry.
El mtodo ms preciso para la determinacin de concentraciones proteicas es
probablemente el mtodo de hidrlisis cida. La mayor parte de los otros mtodos son
sensibles a la composicin de aminocidos de las protenas y no pueden ser obtenidas
concentraciones absolutas. El procedimiento de Lowry no es la excepcin, pero es
sensiblemente constante de protena a protena, lo cual ha hecho que sea ampliamente
usado y que las determinaciones sean una alternativa completamente aceptable con un
rigor absoluto en todas las determinaciones en casi todas las circunstancias en donde se
involucren mezclas de protenas o extractos crudos.
Reactivos
Reactivo de formacin compleja. Preprese inmediatamente antes de usarse,
mezclando las soluciones A, B y C en proporcin 100:1:1 respectivamente.
Solucin A: 2% (P/V) Na
2
CO
3
en agua destilada.
Solucin B: 1% (P/V) CuSO
4
.5H
2
O en agua destilada.
Solucin C: 2% (P/V) Tartrato de Sodio y Potasio en agua destilada.
Solucin de Hidrxido de sodio 2N.
Reactivo de Foln (disponible comercialmente): sese en concentracin 21N.
Estndares: Use una solucin madre de protena estndar (por ejem. fraccin V
de albmina de suero bovino) conteniendo 4 mg/ml de protena en agua
destilada, almacenada a -20C. Prepare los estndares diluyendo la solucin
madre con agua destilada tal como se indica en la siguiente tabla:
PREPARACION DE ESTANDARES DE PROTEINA
Solucin madre (l) 0 1.25 2.50 6.25 12.50 25.00 62.50 125.0 250.0
Agua (l) 500 499 498 494 488 475 438 475 250
Concentracin de protena (g/ml) 0 10 20 50 100 200 500 1000 2000
Procedimiento
1. A 0.1 ml de muestra o sol. estndar, adicinele 0.1 ml de sol. NaOH 2N.
Caliente a 100C durante 10 min a bao mara hirviendo para hidrolizar la
muestra.
2. Deje enfriar a temperatura ambiente y agrguele 1 ml del reactivo de formacin
de complejo recin preparado y deje reposar a temperatura ambiente por 10 min.
3. Adicione 0.1 ml de reactivo de Foln, agite con un mezclador de vrtice y deje
reposar a temperatura ambiente durante 3060 min (no exceda este tiempo).
4. Lea la absorvancia a 750 nm si la concentracin de la protena fuera menor a
500 g/ml, 550 nm si fuese entre 100 y 2000 g/ml.
5. Trace una curva estndar de absorvancia como funcin de concentracin inicial
de protena y sela para determinar el contenido de protena en la muestra.
NOTA
a. Si la muestra se encuentra como precipitado, disulvalo en NaOH 2N e hidrolice
como en el paso 1. Use alcuotas de 0.2 ml del hidrolizado para el paso 2.
b. Todas las clulas u otras muestras complejas pueden requerir un pretratamiento
como el descrito por Burton (1984) para DNA.
c. Mezcle rpidamente en cuanto el reactivo de Foln sea adicionado; esto es
importante para obtener una adecuada reproductibilidad.
d. Se requiere un grupo de estndares para cada ensayo, preferentemente por
triplicado o duplicado.

FIGURA 13
Determinacin de protena en alimentos por el mtodo de Lowry
4.7. Determinacin de Urea
Este mtodo permite cuantificar el contenido de urea en ingredientes alimenticios.
Reactivos
Carbn activado
Solucin Carrez I: disuelva 21.9 g de acetato de zinc dehidratado en agua,
agregue 3 ml de cido actico glacial y diluya a 100 ml con agua destilada.
Solucin Carrez II: disuelva 10.6 g de ferrocanuro de potasio en 100 ml de agua
destilada.
Acido clorhdrico 0.02N.
Solucin de acetato de sodio: disuelva 136 g de acetato de sodio trihidratado en
1000 ml de agua.
Solucin de 4-dimetilaminobenzaldehdo: disuelva 1.6 g de 4-
dimetilaminozenzaldehdo (4-DMAB) en 100 ml de etanol al 96% y adicione 10
ml de cido clorhdrico (d=1.18 g/ml).
Solucin estndar de urea: disuelva 0.1 g de urea en 100 ml de agua.
Materiales y Equipo
Agitador rotatorio
Espectrofotmetro con celdas de 10 mm.
Procedimiento
Pese aproximadamente 2 g de muestra con una precisin de 0.001 g, o una cantidad que
se espera contenga de 50 a 200 mg de urea y colquela en un matraz volumtrico de 500
ml. Agregue 150 ml de cido clorhdrico 0.02N, agite por 30 min y adicione 10 ml de la
solucin de acetato de sodio y mezcle. Agregue 1 g de carbn activado, agite
perfectamente bien y deje reposar la mezcla por 15 min. Adicione 5 ml de la solucin
Carrez I, seguido por 5 ml de la solucin Carrez II, mezclando perfectamente bien entre
las adiciones. Afore con agua destilada y mezcle bien. Filtre una parte con un papel
filtro seco en un vaso de precipitado de 250 ml limpio y seco.
Determinacin
Transfiera 10 ml del filtrado a un tubo de ensaye con tapn esmerilado, adicione 10 ml
de la solucin 4-DMAB, mezcle y deje reposar por 15 min. Mida la absorvancia de la
solucin a 435 nm en una celda de 10 mm, contra una solucin de referencia preparada
con los reactivos.
Curva de Calibracin
Diluya 5, 10, 20, 30 y 40 ml de solucin de urea a 100 ml de agua. Transfiera 10 ml de
cada solucin a tubos de ensaye con tapn esmerilado y adicione 10 ml de la solucin 4-
DMAB a cada uno. Mezcle y deje reposar por 15 minutos, mida la absorvancia como se
seal anteriormente contra una solucin de referencia preparada con 10 ml de solucin
4-DMAB y 10 ml de agua, haga una grfica relacionando las absorvancias con la
cantidad de urea presente.
Expresin de Resultados
Determine la cantidad de urea en la muestra por referencia con la curva de calibracin
elaborada. Exprese los resultados como por ciento de la muestra.
% Urea 0.4665 = % N urea.
NOTA:
Si la muestra est muy coloreada, la cantidad de carbn activado deber ser
incrementada arriba de 5 g. La solucin final despus del filtrado deber ser incolora.

FIGURA 14
Determinacin del contenido de urea en ingredientes alimenticios.
4.8. Acido Urico.
A travs de este mtodo es posible determinar el contenido de cido rico y sus sales
tanto en gallinaza como en alimentos e ingredientes que los constituyen.
Reactivos
Solucin de hidrxido de sodio. Disuelva 50 g de NaOH en 50 ml de agua,
mezcle bien y almacene la solucin en un envase de plstico.
Solucin neutra de formaldehido.
a. Verifique la concentracin de la solucin disponible, para lo cual mezcle 30 ml
de sta con 50ml de solucin de NaOH IN y 25ml de solucin de Perxido de
hidrgeno (20 volmenes). Caliente en bao de vapor hasta que no haya ms
efervescencia. Enfre y titule con NaCl IN usando indicador de fenoftalena.
Realice una titulacin de blanco usando 3 ml de agua en lugar del formaldehdo
y calcule la concentracin como sigue:
1ml de la solucin de NaOH IN = 0.0300 g de formaldehdo.
Conc. de formaldehdo (g/100 ml) = ((B-T) ((0.0300 100)/3)
Donde
B = Titulacin del blanco.
T = Titulacin de la muestra.
b. Prepare una solucin neutra que contenga 17.5g de formaldehdo con 250ml de
agua y 500ml de etanol. Ajuste el pH a 7.0 con una solucin de NaOH 0.1N.
Diluya a 1000ml con agua, mezcle y ajuste nuevamente el pH de ser necesario.
Solucin buffer de succinato. Disuelva con calentamiento 29.5g de cido
succnico en 750ml de agua y 20ml de la solucin de NaOH. Deje enfriar y
adicione una cantidad adecuada de solucin de formol que contenga 17.5g de
formaldehdo, mezcle bien y ajuste el pH a 6.0 con la solucin de NaOH. Diluya
a 1000ml con agua destilada, mezcle y ajuste el pH si es necesario.
Solucin de tiosulfato de sodio. Disuelva 25g de Na
2
S
2
O3.5H
2
O en 1000ml de
agua destilada.
Solucin de lactato de plata. Disuelva con calentamiento 3g de lactato de plata
en 50ml de agua destilada y 1ml de cido lctico. Diluya a 100ml con agua,
filtre y almacene en un frasco obscuro. No lo exponga a la luz directa.
Solucin de magnesio amoniacal. Disuelva 8.75g de MgSO
4
.7H
2
O y 17.5g de
NH
4
CL en 50ml de agua. Agregue 30ml de NH
4
OH (d = 0.88g/ml), mezcle bien
y diluya a 100ml con agua.
Reactivo de Benedict y Hitchcock. Mezcle 35ml de solucin de lactato de plata
con 15ml de solucin de magnesio amoniacal. Adicione 50ml de hidrxido de
amonio (d = 0.88 g/ml) mzclese bien. Preprese inmediatamente antes de
usarse.
Solucin estndar de cido rico. Pese 250mg de cido rico con una precisin
de 0.1mg y transfiralo a un matraz de fondo redondo acoplado a un
condensador de reflujo. Adicione 100ml de la solucin de formaldehdo etlico y
caliente a reflujo en un bao de vapor por 30min agitando frecuentemente.
Enfre y transfiera a un matraz volumtrico de 250ml, lavando el matraz redondo
con sol. de formaldehdo etlico, afore con esta solucin y mezcle. 1 ml contiene
1 mg de cido rico.
Eter de petrleo, punto de ebullicin 40 60C.
Materiales y Equipo
Epectrofotmetro con celdas de cuarzo de 10 mm.
Tubos de cristal para percolacin, con aproximadamente 240 mm de longitud,
18 mm de dimetro interno, y en la parte inferior aproximadamente 120mm de
longitud y 8 mm de dimetro interno.
Extraccin del cido rico:
1. De la gallinaza: Pese con una aproximacin de 0.001 g cerca de 0.4g de
gallinaza seca y colquela en un matraz de fondo redondo de 150ml. Adicione
60ml de solucin neutra de formaldehdo, conecte a un condensador de reflujo y
caliente en bao de vapor por una hora. Enfre y filtre a travs de un crisol
(Porosidad 4) a un matraz volumtrico de 100ml. Enjuague el matraz 3 veces
consecutivas con porciones de 10ml de solucin de formaldehdo etlico,
pasando cada porcin por el crisol de filtracin al matraz volumtrico. Afore con
la misma solucin y agite.
2. De los alimentos: Pese 4 a 5g de muestra con una aproximacin de 0.001 g y
desengrasela por extraccin con ter de petrleo. Transfiera cuantitativamente la
muestra desengrasada a un matraz de fondo redondo y remueva el solvente
residual con una corriente suave de aire. Contine el anlisis como previamente
se seal, iniciando con la adicin de 60 ml de solucin de formaldehdo etlico.
Determinacin
Transfiera con una pipeta de 20 ml de extracto de la muestra prepesado, segn los
mtodos descritos, a un tubo de centrfuga de 50 ml. Adicione 10 ml del reactivo de
Benedict y Hitchcock, mezcle bien y djelos reposar en la oscuridad por una hora.
Centrifuge a 2000 rpm por 15 min. Retire el sobrenadante y deje escurrir por 10 min.
Cuidadosamente limpie cualquier lquido remanente sin perturbar el precipitado y
adicione 20 ml de solucin de tiosulfato de sodio. Disuelva el precipitado, agitando con
una varilla de vidrio delgada. Con una pipeta transfiera 5 ml de esta solucin a un
matraz volumtrico de 200 ml conteniendo 40 ml de solucin buffer de succinato, afore
con agua destilada y mezcle bien. Mida la absorvancia de la solucin a 294 nm en
celdas de slice de 10 mm comparada contra una solucin preparada mezclando 5 ml de
solucin de tiosulfato de sodio con 40 ml de solucin buffer de succinato aforada a 200
ml con agua destilada. Determine la cantidad de cido rico mediante una curva de
calibracin.
Curva de Calibracin:
En una serie de tubos de centrfuga de 50 ml de capacidad transfiera con una pipeta 2, 4,
6, 8, 10 y 12 ml de solucin estndar de cido rico (equivalentes a una cantidad similar
de cido rico en mg) y llvelos a 20 ml con la solucin de formaldehdo etlico.
Adicione a cada tubo 10 ml de reactivo de Benedict y Hitchcock, mezcle bien y djelo
reposar en la oscuridad por una hora. Contine el mtodo como en la determinacin a
partir del centrifugado. Mida la absorvancia de la solucin y trace la curva de
calibracin graficando absorvancia (y) contra la cantidad correspondiente de cido rico
en mg (x).
Expresin de Resultados
El contenido de N del cido rico como % de la muestra est dado por la frmula:
% N = A/(6 W)
Donde
A = mg de cido rico (en la alicuota del extracto de la muestra) determinado por la
medicin fotomtrica.
W = peso de la muestra en g.

FIGURA 15
Determinacin de cido rico en gallinaza e ingredientes alimenticios
4.9. Ceniza Soluble e Insoluble en Acido.
Este mtodo proporciona una estimacin de la disponibilidad de minerales en base a su
digestibilidad en cido.
Reactivos, Materiales y Equipo
Acido clorhdrico (12.5 % v/v)
Papel filtro libre de ceniza
Crisoles de porcelana
Procedimiento
Use el residuo obtenido de la determinacin de ceniza. Caliente 25 ml de cido
clorhdrico con cuidado para evitar salpicar y filtre en el papel y enjuague con agua
caliente hasta que quede libre del cido. Coloque el papel filtro y el residuo en un crisol
de porcelana prepesado seco y colquelo en la mufla a 600 C durante 2 horas o hasta
que quede libre de carbn.
Clculos
Ceniza insoluble (%) = 100(Peso de la ceniza tratada con cido/Peso de la muestra)

FIGURA 16
Determinacin de ceniza soluble e insoluble en cido clorhdrico
4.10. Determinacin de Calcio en el Alimento.
La evaluacin de calcio en la dieta reviste una gran importancia ya que un desbalance
con el fsforo u otros minerales generar un bajo crecimiento.
Reactivos
Acido clorhdrico (1 3 %)
Acido ntrico 70%
Hidrxido de amonio (1:1 v/v)
Indicador de rojo de metilo (1 g en 200 ml de etanol)
Solucin de oxalato de amonio 4.2 %

Acido sulfrico 98 %
Solucin estndar de permanganato de potasio 0.05N
Materiales y Equipo
crisoles de porcelana
matraces volumtricos de 250 ml
vasos de precipitado de 250 ml
Papel filtro para anlisis cuantitativos libre de cenizas
Procedimiento
Calcine en crisol de porcelana 2.5g de muestra finamente molida. Adicione 40ml de
HCI y unas gotas de HNO
3
al residuo, caliente el crisol hasta ebullicin, enfre y
transfiera a un matraz volumtrico de 250ml, afore y mezcle. Pase a un vaso de
precipitado 100ml de sol. para cereales o alimentos con cereales 25ml para alimentos
con minerales. Diluya a 100ml y adicione 2 gotas de rojo de metilo. Adicione NH
4
OH
gota a gota hasta que vire a pardo anaranjado, luego adicione 2 gotas de HCl para dar un
color rosa. Diluya con 50ml de agua, hierva y adicione con agitacin 10ml de sol 4.2%
de oxalato de amonio. Ajuste el pH con cido para regresar al color rosa si es necesario.
Dje reposar, filtre y lave el precipitado con la solucin de NH
4
OH (1.5%). Coloque el
papel filtro con el precipitado en un vaso, adicione una mezcla de 125ml de agua y 5ml
de H
2
SO
4
, caliente a 70C y titule con la solucin de permanganato y calcule:
Ca (%)= 0.1((ml Sol. Permanganato/Peso de la Muestra) (Alicuota usada en ml/250)

FIGURA 17
Determinacin de calcio en alimento e ingredientes alimenticios.
4.11. Determinacin de Fsforo
Al igual que el calcio, este mineral es indispensable para el buen desarrollo de los
organismos cultivados, debiendo estar presente en las dietas en cantidades suficientes
para satisfacer las necesidades metablicas de los organismos. Este elemento en
protenas de origen vegetal puede estar formando parte de fitatos, por lo cual su
disponibilidad puede estar limitada, por lo que se recomienda una determinacin de
cido ftico previa al uso de tales materiales.
Reactivos
Reactivo de Molibdato. Disuelva 40 g de molibdato de amonio 4.H
2
O en 400 ml
de agua caliente y enfre. Disuelva 2 g de metavanadato de amonio en 250 ml de
agua caliente, enfre y adicione 450 ml de cido perclrico al 70%.
Gradualmente adicione la sol. de molibdato a la sol. de vanadato con agitacin y
diluya a 2 1.
Estndar de Fsforo. Prepare una solucin stock disolviendo 8.788 g de
Ortofosfato dihidrgeno potasio en agua y llvelo a 1 1. Prepare la solucin de
trabajo diluyendo la sol. stock 1 en 20 (Conc. de trabajo 0.1 mg P//ml).
Materiales y Equipo
Espectrofotmetro para leer a 400 nm
Matraces graduados de 100 ml
Procedimiento
1. Pase una alicuota como en la determinacin de Ca a un matraz de 100 ml y
adicione 20 ml del reactivo de molibdovanato. Aforelo, mezcle y deje reposar
por 10 min.
2. Transfiera alicuotas del estndar de trabajo conteniendo 0.5, 0.8, 1.0 y 1.5 mg de
P en matraces de 100 ml y trtelos como al anterior.
3. Lea la muestra a 400 nm ajustando el estndar de 0.5 mg a 100% de transmisin.
4. Determine mg de fsforo en la muestra usando una curva estndar.

FIGURA 18
Determinacin de fsoforo en dietas e ingredientes alimenticios.
4.12. Determinacin de Cloruro de Sodio
Este mtodo permite determinar la cantidad de sal presente en harina de pescado y otros
ingredientes.
Reactivos
Solucin estndar 0.1N de Nitrato de Plata
Solucin estndar 0.1N de Tiocianato de Amonio
Indicador Frrico - Solucin acuosa saturada
Solucin de Permanganato de Potasio 6 % p/v
Solucin de Urea 5 % p/v
Acetona grado analtico
Acido Ntrico concentrado
Procedimiento
1. Pese 2 g de muestra en un matraz erlenmayer de 250 ml, humedezca la muestra
con 20 ml de agua, adicione con pipeta 15 ml de la solucin de nitrato de plata y
mezcle bien.
2. Adicione 20 ml de Acido Ntrico concentrado y 10 ml de la solucin de
Permanganato de Potasio y mezcle. Caliente continuamente la mezcla hasta que
el lquido se aclare y desaparezca los vapores nitrosos, enfre.
3. Adicione 10 ml de Solucin de Urea y deje reposar por 10 min.
4. Adicione 10 ml de acetona y 5 ml de indicador frrico y titule el exceso de
nitrato de plata con la solucin de Tiocianato hasta el punto final rojo-caf.
Clculos
Calcule resultados como NaCl
%NaCI= (15.00 - ml 0.1N NH
4
CNS 0.585)/g de muestra

FIGURA 19
Determinacin de cloruro de sodio en harina de pescado y otros ingredientes
4.13. Determinacin de Potasio
Reactivos
Acido Clorhdrico concentrado.
Solucin estndar de Potasio: Para preparar solucin stock (500 ppm), disuelva
0.477 g de Cloruro de Potasio y llvelo a 500 ml con agua destilada. Para
preparar el estndar de trabajo (10 ppm), diluya 1:50.
Aceite de oliva (puro)
Materiales y Equipo
Crisoles de Slice.
Fotmetro de flama
Mufla
Procedimiento
1. Seque 2 g de muestra en un crisol de slice a 100C para eliminar la humedad.
Adicione unas cuantas gotas de aceite de oliva y caliente sobre la flama hasta
que deje de producir flama.
2. Calcine a 500C en la mufla por 24 h, enfre y adicione 2 ml de HCI
concentrado para disolver el residuo.
3. Llvelo a 100 ml con agua destilada, tome 1 ml de la solucin y haga una nueva
dilucin a 100 ml con agua destilada.
4. Ajuste el fotmetro de flama para que de una lectura de 100 con el estndar de
10 ppm y lea la solucin muestra.
5. Si la lectura no se encuentra entre 50 y 100 haga una dilucin al momento para
dar una lectura apropiada.

FIGURA 20
Determinacin del contenido de potasio en ingredientes alimenticios.
4.14. Cuantificacin de xido de cromo en heces y
alimentos (Furukawa y Tsukahara, 1966)
El xido de cromo es el marcador ms ampliamente utilizado durante la evaluacin de
la digestibilidad en dietas experimentales para peces. El mtodo aqu presentado es una
modificacin del propuesto por Furukawa y Tsukahara, a fin de manejar micromuestras
durante la determinacin del contenido de xido de cromo en dietas y heces.
Reactivos
Acido ntrico concentrado, gr.
Acido perclrico, g.r.
Materiales y equipo
Espectrofotmetro
Digestor kjeldahl para tubos de 100 ml
Matraces kjeldahl de 100 ml
Matraces volumtricos de 25 ml
Procedimiento
Muela finamente el alimento y las heces, a las cuales se les habr eliminado
previamente escamas y cualquier otra materia extraa; mantngalos a sequedad. Pese
con precisin de 0.0001g de 50 a 100mg de muestra, colquela en un matraz kjeldahl de
100 ml y pese nuevamente la charolilla para ajustar peso de la muestra. Adicione 5ml de
HNO
3
y ponga a digerir en ebullicin suave por un mnimo de 30 min hasta que
desaparezcan los vapores amarillentos. En caso de que disminuya notablemente la
cantidad de lquido y contine habiendo vapores nitrosos, adicione otros 5ml de cido
ntrico y siga digiriendo. Al trmino la solucin debe ser clara, de color verdoso y no
debe desprender vapores ocres. Deje enfriar.
Ya fra la solucin, agregar cuidadosamente resbalando por las paredes del matraz 3ml
de cido perclrico. Realizar la adicin dentro de una campana de extraccin y con
mucho cuidado, ya que en caso de una digestin incompleta se puede presentar una
reaccin explosiva. Coloque nuevamente el matraz en el digestor y contine la
ebullicin hasta que la solucin vire de verde a amarillo limn; apague el digestor y deje
enfriar. Ya fro se debe formar un anillo rojizo en el borde del lquido; en caso de no
formarse o si el lquido se torna verde nuevamente, volver a digerir hasta que el cambio
sea permanente.
Pase el lquido fro a un matraz volumtrico de 25 ml, enjuagando el matraz kjeldahl
varias veces con agua destilada y afore. Ajuste a O el espectrofotmetro con un blanco
de reactivos y leer a 350 mm. El blanco se prepara simultneo a la muestras usando
solamente los cidos y agua destilada.
Clculos
a) Calcule la cantidad de xido de cromo (mg) presente en la muestra:
X = ((Y - 0.0032)/0.2089)/4
Donde
Y = absorvancia
0.0032 y 0.2089 son constantes
b) Calcule el % de xido de cromo en la muestra:
O.C.% = 100(X/A)
Donde
X = peso del xido de cromo
A = peso de la muestra

FIGURA 21
Determinacin de xido de cromo en alimentos y heces.
4.15. Mtodo de Carpenter para la determinacin de
Lisina Disponible (Tejada, 1985)
El mtodo permite determinar la cantidad de lisina libre que reacciona con el l-
fluorodinitro benceno.
Reactivos
Solucin madre de Mono E N dinitrofenil - lisina HCI (p. m. 366.77, 39.85 %
lisina) Disolver 314 mg en 250 ml de HCl concentrado. Se disuelve lentamente,
de manera que hay que iniciar su preparacin un da antes.
Solucin estndar diluida de DPN-lisina. Diluya 10 ml de la solucin madre en
100 ml de agua destilada para formar el estndar. Hecho lo anterior, 2 ml de la
solucin contienen alrededor de 0.1 mg de lisina y disuelto a 100 ml da una
absorcin neta de alrededor de 04 a 435 nm en celdilla de 1 cm.
Solucin de 1 - fluoro 2,4 dinitrobenceno (FDNB). Manjese con guantes de
plstico desechables. S el FDNB est slido colquese en balo de agua caliente
para que se funda, tome con una pipeta automtica aproximadamente 0.4 ml y
disuelva en 15 ml de alcohol etlico por muestra. Debe prepararse diariamente.
Cloruro de metoxicarbonil (cloroformato de metilo). El MCC es inestable por lo
que se debe almacenar en refrigeracin. Manjese con cuidado.
Solucin de bicarbonato de sodio al 8% en agua destilada.
Eter etlico libre de perxidos.
Solucin de fenoftalena, 500 mg/l de alcohol etlico al 60%.
Solucin de hidrxido de sodio al 12%. Se usa para incrementar el pH a 8.5
durante la reaccin del MCC. Debe almacenarse en frasco de plstico. Tener a la
mano un gotero con HCI 1M para corregir cualquier exceso.
Buffer de bicarbonato de sodio - carbonato, pH 8.5. Disuelva 19.5g de NaHCO
3

y 1g de Na
2
CO
3
en 250 ml de agua destilada; ajuste el pH si es necesario.
Almacenar en un frasco bien lleno y bien cerrado para evitar prdida de CO
2

Acido clorhdrico concentrado
Materiales y Equipo
Tamiz de 0.5 mm
Matraces de fondo redondo
Matraz volumtrico de 250 ml
Bao mara
Rotoevaporador
Aparato de reflujo
Papel filtro Whatman 541
Tubos de ensaye con tapn
Perlas de vidrio
Espectrofotmetro
Procedimiento
Muela la muestra para que pase el tamiz de 0.5 mm. La cantidad de muestra a utilizar
deber contener alrededor de 12mg de lisina disponible, lo que equivale a 0.3 2g de la
muestra. Pasela a un matraz de fondo redondo. Agregue 23 perlas de vidrio y 10ml de
NaHCO
3
, agitar suavemente para que la muestra no se adhiera a las paredes.
Adicione 15 ml de FDNB y agite suavemente durante 2 horas. No permita que la
muestra se quede en las paredes. Evapore el etanol pero no el agua; en un bao de agua
hirviendo el matraz debe perder aproximadamente 12.5g.
Enfre y adicione 30ml de HCI 8.1M para neutralizar al NaHCO
3
. Sumando el agua
presente, se tendr un volumen de 40ml y una concentracin de cido de 6M. Reflujar
suavemente durante 16 horas.
Desconecte el matraz y lave el refrigerante con un poco de agua. Filtre en caliente a un
matraz volumtrico de 250 ml. Enjuague el matraz y el filtro varias veces con agua
destilada y colecte en el matraz volumtrico; afore en fro con agua destilada. En
ocasiones se forma un precipitado de dinitrofenol que se puede extraer con pipeta una
vez precipitado, o se elimina con el ter.
Colocar 2 ml del filtrado en dos tubos con tapn, etiquetndolos A y B. Agregar al tubo
B 5 ml de ter y agita. Extraiga el ter (capa superior) con una pipeta automtica.
Coloque el tubo en un bao a 90C hasta que se elimine todo el ter y enfre.
Agregue una gota de fenoftalena al tubo, adicione gota a gota la solucin de NaOH
hasta que aparezca un ligero color rosado; aada 2ml de buffer de carbonato y agregue
dentro de una campana 0.5 ml de metilcloroformato. Tapar el tubo y agitar
vigorosamente, liberando la presin con cuidado. Despus de 5 10 min, adicione gota
a gota 0.75 ml de HCI concentrado agitando para evitar la formacin de espuma. Se
extrae cuatro veces la solucin con ter como se describi anteriormente. Elimine el ter
residual en bao mara, enfre y lleve el volumen 10 ml con agua destilada.
Durante las pausas de las manipulaciones del tubo B, extraiga tres veces con ter el tubo
A; elimine el ter residual y lleve a 10 ml con HCl. Lea la absorvancia de ambos tubos a
435 nm en el espectrofotmetro contra agua destilada. La lectura del tubo menos la del
tubo B (blanco) es la absorvancia atribuible al DNP - lisina.
Absorvancia del estndar DPN - Lisina
Coloque 2 ml de DNP-L diluido en dos tubos A y B siguiendo el procedimiento ya
indicado-Practicar hasta que se tenga confianza en las manipulaciones. La absorvancia
neta se usar para calcular las muestras problema. El blanco B tiene generalmente una
absorvancia de 0.01; si el valor es mucho mayor revisar el procedimiento, especialmente
el frasco de servicio, el pH del buffer de carbonato, la longitud de onda a que se est
leyendo y el ter libre de perxidos.
Precauciones con alimentos de origen vegetal.
En alimentos de origen vegetal en ocasiones no se logra una hidrlisis total a las 16
horas y como un tiempo ms largo se descompone el DNP-L, debe hacerse una segunda
digestin con materiales desconocidos. Para lograr esto, despus de la digestin se filtra,
se lava y se procesa el filtrado como se seal. El residuo se coloca en un matraz de
fondo redondo con HCI 6 M y algunas perlas de vidrio (se pueden juntar los residuos de
las rplicas); el volumen del cido clorhdrico debe ser menor a 30 ml. Se deja en
reflujo por 16 horas, se filtra en caliente y se lleva a 100 ml segn el procedimiento ya
descrito. Si el resultado es muy pequeo se elimina, o de lo contrario, se hacen las
correcciones necesarias para el material.
Para determinar la prdida de DNP-L se debe calcular un factor de correccin, el cual
vara con el material. Para su clculo, consultar a: Makade, M.L. y Liener, I.E., 1969.
Anal. Biochem., 27:271.
Clculos
C = (Ws Au V 100 100)/Wu As a (cp)
Donde
C= g de lisina/16g de N
Ws= Peso del estndar expresado como mg de Lis en 2 ml; 0.1 s se prepara como se
indica.
Wu= Peso de la muestra en mg
As= Absorcin neta del estndar
Au= Absorcin neta del desconocido
V= Volumen del hidrolizado filtrado. Se recomienda 250 ml (menos por la segunda
digestin).
a= Alcuota del filtrado. Se recomiendan 2 ml.
CP= Protena cruda, 6.25 g N/100g material.
Para expresar el resultado como g lisina/Kg de PC, cambiar un 100 por 10 en la
frmula.
NOTA:
El material de vidrio puede tomar un tinte amarillento debido al dinitrofenol. Los
hidrolizados y soluciones de DNP-Lisina deben protegerse de la luz especialmente a pH
alcalino.

FIGURA 22
Determinacin de lisina disponible en ingredientes alimenticios.
4.16. Anlisis de Melazas
Los peces, segn su especie, presentan una capacidad diferencial para utilizar
carbohidratos en su dieta, por lo cual se considera importante contar con un mtodo
rpido para la determinacin de azcares totales disponibles.
Reactivos:
Solucin de Fehling (modificada por Soxhlet):
a. Disuelva 34.639g de Sulfato de Cobre 5H
2
O en agua destilada, afore a
500ml, filtre.
b. Disuelva 173 g de tartrato de sodio y potasio 4.H
2
O y 50 g de Hidrxido
de Sodio en agua destilada, diluya a 500 ml, deje reposar por 2 das y
filtre a travs de asbesto preparado.
Estndar de Azcar invertida. Prepare una solucin stock adicionando 5ml de
HCL (Sp. g 1.18) a 9.5g de sacarosa en solucin y diluya a 100ml con agua
destilada. Despus de almacenar por 2 das a temperatura ambiente, afore a 1000
ml con agua destilada. Prepare soluciones de trabajo que contengan 5mg/ml,
para lo cual mida con una pipeta volumtrica una alcuota de 100 ml de la
solucin stock. Vace a un matraz volumtrico de 200 ml y neutralice con una
solucin de NaOH al 20%, usando fenoftalena como indicador, lleve a volumen
y mezcle.
Acido Clorhdrico concentrado (Sp.g 1.18).
Acido Clorhdrico (0.5N).
Hidrxido de Sodio, Solucin 20%.
Indicador de Fenoftalena (1% en etanol).
Indicador de azul de metileno (1% en agua).
Materiales y Equipo
Calentador elctrico
Matraces erlenmayer de 500 ml
Procedimiento
Disuelva 8g de melaza y llvela a 500ml con agua destilada (filtre). Hidrolice 100 ml
del filtrado con 5ml de HCI (Sp. g 1.18) y deje reposar por 24 h. Neutralice con NaOH
al 20% usando fenoftalena como indicador y diluya a 200 ml.
Estandarizacin de la Solucin Soxhlet: Mida 10ml de la solucin Soxhlet (a) y (b) con
una pipeta volumtrica y vace a un matraz erlenmayer, mezcle y agregue 30ml de agua.
Adicione con una bureta un volumen de estndar de trabajo casi suficiente para reducir
el Cobre en la solucin Soxhlet. Llvelo a ebullicin y djelo hervir por 2 min., adicione
4 gotas de azul de metileno y rpidamente complete la titulacin mientras est
hirviendo, hasta que se obtenga un color naranja brillante. Repita varias veces y
determine el volumen de solucin requerido para reducir completamente 20 ml de
solucin Soxhlet.
Titulacin de Muestra: Primero realice una titulacin aproximada; pase a un matraz
10ml de las soluciones (a) y (b), adicione alcuotas de 10ml de la solucin muestra.
Aada 40 ml de agua y llvelo a ebullicin. Si persiste el color azul, titule con una
solucin estndar de trabajo y calcule el contenido aproximado de azcar en la muestra.
Para determinar con precisin el contenido de azcar, pase a un matraz 10 ml de las
soluciones Soxhlet (a) y (b); adicione una alcuota de la solucin muestra. El volumen
de muestra usado depender del contenido de azcar en la muestra. Adicione agua como
se indica en la tabla, mezcle y hierva. Durante la ebullicin, agregue estndar de trabajo
con una bureta hasta que la titulacin sea casi completa. Aada azul de metileno y
complete la titulacin.
VOLUMEN DE MUESTRA USADO EN LA TITULACION SOXHLET (AOAC,
1970)
ml de H
2
O ml de muestra g de muestra en alcuota Total como azcar invertida (%)
40 10 0.08 73
35 15 0.12 82-58
30 20 0.16 61-41
25 25 0.20 49-35
20 30 0.24 49-29
Calcule el % de azcar (como invertida) = (F - M) I 100/w
Donde:
F= Volumen de estndar necesario para reducir 20 ml de Solucin Soxhlet.
M= Volumen de solucin estndar de azcar requerido para completar la titulacin
I= Peso de la azcar invertida en 1 ml de Standard de trabajo.
W= Peso de la muestra en la alcuota usada.

FIGURA 23
Determinacin de azcares totales disponibles en melaza
5. ANTIMETABOLITOS Y TOXINAS
EN ALIMENTOS
El valor nutricional de un alimento depende en gran medida de la calidad de los
ingredientes utilizados, la cual se mide en funcin de su capacidad de promover el
crecimiento y mantener en buen estado a los organismos. En este sentido, el origen y/o
el tratamiento previo a que se someten los materiales influir sobre su calidad, en
funcin de la disponibilidad de nutrientes para usarse en las funciones metablicas del
animal, o tambin, el contenido de factores txicos endgenos caractersticos de cada
material, particularmente aquellos de origen vegetal, que funcionan como antinutrientes
afectando negativamente al organismo.
En este sentido, existen varias tcnicas que permiten conocer la disponibilidad de un
nutriente determinado, principalmente aminocidos, as como tambin, determinar el
contenido de sustancias txicas a fin de eliminarlas o desechar el material. En este
documento se incluyen los mtodos para anlisis de los antinutrientes ms comunes
encontrados en las protenas vegetales.
5.1. Mtodo Rpido Potenciomtrico para Medir
Actividad Uresica en Harina de Soya
Este mtodo determina la ureasa residual en harina de soya y sus derivados de acuerdo
al mtodo Caskey-Knapp (1944) modificado por AACC (1969) y Qum. Leticia Comar
(Nutrimentos del Sureste, Mrida, Yucatn, Mxico). El resultado esta dado en unidades
de pH proporcionales a la actividad uresica. Los valores aceptables oscilan entre 0.05 y
0.5; valores menores indican sobrecocimiento y mayores falta de cocimiento.
Reactivos
Solucin bufer de fosfatos 0.05M. Disuelva 3.403g de fosfato de potasio
monobsico g.r. (KH
2
PO
4
) en 100ml de agua destilada recin hervida. Disuelva
4.355g de fosfato de potasio dibsico g.r. (K
2
HPO
4
) en 100ml de agua destilada.
Combine ambas soluciones, adicione 10ml de indicador rojo de fenol al 0.1% y
afore a 1000ml con agua destilada. Ajuste el pH a 7.0 con un cido o base fuerte
antes de usarse. En refrigeracin tiene una vida til de 90 das.
Solucin bufer de urea. Disuelva 15g de urea g.r. en 500ml de sol. bufer de
fosfatos. Ajuste el pH a 7.0 como en el caso anterior.
Indicador rojo de fenol al 0.1%. Disuelva 0.1g de rojo fenol en 15ml de sol. de
hidrxido de sodio 0.02N y afore a 100ml.
Materiales y Equipo
Bao mara con agitacin, precisin 0.5C.
Medidor de pH con electrodo de vidrio y calomel adecuado para medir muestras
de 5ml, precisin de 0.02 unidades de pH y compensacin de temperatura.
Tubos de ensaye, 20 150mm con tapn de hule
Vasos de precipitado de 10ml
Procedimiento
1. Pese 0.2g de harina de soya finamente molida (sin sobrecalentar) por duplicado
y colocar en tubos de ensaye (A y B); adicione al tubo A 10ml de la solucin
bufer de urea. Tape, agite e incube en bao mara por 30 min a 30 0.5C.
2. Despus de 5 min, adicione al tubo B 10ml de sol. bufer de fosfatos, tape, agite
y coloque en el bao mara.
3. Agitar cada uno de los tubos cada 5 minutos (seis agitaciones en 30 min).
4. Retire el tubo A del bao mara, decante el sobrenadante en un vaso de pp de
10ml y mida el pH dentro de un perodo menor a 3 min. Repita el procedimiento
con el tubo B 5 minutos despus del A.
5. Calcule el ndice de actividad uresica como unidades de pH resultantes de la
diferencia de las lecturas del tubo A menos el tubo B y determine la calidad de la
muestra segn la tabla de ejemplo incluida:
IAU= pH tubo A (muestra + bufer urea) - pH tubo B (muestra + bufer fosfatos)
Grado de cocimiento Unidades de pH pH tubo A pH tubo B Color
Cruda 1.9 8.80 6.90 Rojo
Subcocida 0.80 7.60 6.80 Rosa
Cocido adecuado 0.30 7.10 6.80 Rosa
Cocido adecuado 0.08 6.98 6.90 Rosa tenue
Sobrecocida 0.03 6.93 6.90 Ambar

FIGURA 24
Determinacin de actividad uresica en harina de soya y sus derivados.
5.2. Gosipol Libre en Harina de Semilla de Algodn
Este antinutriente es caracterstico de la harina de algodn, siendo necesario determinar
su contenido debido a sus efectos adversos sobre los organismos alimentados con la
semilla, aun cuando los peces aparentemente resisten mayores concentraciones del
alcaloide debido al elevado contenido proteico de su dieta. En este documento se
describen dos mtodos, el primero para harinas normales y el segundo para harinas que
han sido tratadas qumicamente y contienen dianilinogosipol.
Reactivos:
Acetona acuosa, 7 partes de acetona en 3 partes de agua destilada (v/v).
Solucin de Acetona acuosa - Anilina. En 700 ml de acetona y 300 ml de agua,
adicione 0.5ml de anilina purificada. Prepare diariamente.
Solucin acuosa de alcohol isoproplico, 8 partes de alcohol isoproplico + 2
partes de agua destilada (v/v).
Anilina purificada. Destile anilina grado reactivo sobre una pequea cantidad de
polvo de zinc, descartando el primero y ltimo 10% del destilado. Almacene
refrigerada en un frasco mbar de vidrio. Estable por varios meses.
Solucin estndar de Gosipol:
a. Disuelva 25 mg de gosipol puro en acetona libre de anilina y transfiera a
un matraz aforado de 250 ml, usando 100 ml de acetona. Adicione 75 ml
de agua destilada, afore con acetona y mezcle.
b. Tome 50 ml de la solucin (a), adicione 100 ml de acetona pura, 60 ml
de agua destilada, mezcle y diluya a 250 ml con acetona pura. La
solucin (b) contiene 0.02 mg de gosipol/ml y es estable por 24 h en
oscuridad.
Materiales y Equipo
Agitador mecnico.
Espectrofotmetro
Matraces erlenmayer de 250 ml
Matraces Volumtricos de 25 y 250 ml
Bao mara
Procedimiento
Muela la muestra para que pase la malla de 1 mm, cuidando de no sobrecalentarla.
Tome aproximadamente 1 g de la muestra y agrguele 25 ml de acetona pura. Agite por
unos minutos, filtre y divida el filtrado en dos. A una porcin, adicinele una lenteja de
Hidrxido de Sodio y caliente en bao mara por unos minutos. Un extracto ligeramente
amarillo que no cambia de color con el Hidrxido indica que la harina no ha sido
tratada, proceda con el mtodo 1. Si se obtiene un color rojo-anaranjado profundo,
indica la presencia de dianilinogosispol y requiere del mtodo 2.
Mtodo 1
Pese 0.51 g de muestra, dependiendo de la cantidad de gosipol esperada, en un matraz
erlenmayer y adicione 2 3 perlas de vidrio. Agregue 50 ml de solucin de acetona
acuosa, tape el matraz y agite por una hora. Filtre, deseche los primeros mililitros de
filtrado y luego tome dos alcuotas iguales (210 ml, dependiendo del contenido de
gosipol esperado) y pselas a matraces volumtricos de 25 ml. Diluya una de las
alcuotas, afore a volumen con alcohol isoproplico acuoso (solucin a), mientras la otra
alcuota (solucin b). Adicinele 2 ml de anilina purificada, caliente en bao mara (90
100C) por 30 min. junto con un blanco conteniendo 2 ml de anilina y un volumen de
solucin acuosa de acetona igual a la alcuota. Retire la solucin b y el blanco, adicione
suficiente alcohol isoproplico acuoso para efectuar solucin homognea, y enfra a
temperatura ambiente en un bao con agua. Afore con alcohol isoproplico acuoso.
Lea las muestras a una absorvancia de 400 nm en el espectrofotmetro. Ajuste el
instrumento a 0 absorvancia con alcohol isoproplico acuoso y determine la absorvancia
de la solucin (a) y el blanco de reactivo. Si el blanco est abajo de 0.022 de
absorvancia contine con el anlisis, de lo contrario repita el anlisis usando anilina
recin destilada.
Determine la absorvancia de la solucin (b) con el blanco de reactivo ajuste a 0
absorvancia. Calcule la absorvancia corregida de la alcuota: absorvancia de la solucin
(b) menos absorvancia de la solucin (a). Determine los mg de gosipol libre presentes
en la solucin de la muestra usando la curva de calibracin.
Mtodo 2.
Pese 1 g de muestra en un matraz erlenmayer, agregue 50 ml de acetona acuosa, agite y
filtre como el anterior. Agregue alcuotas duplicadas del filtrado (de 2 a 5 ml,
dependiendo de la cantidad esperada de gosipol libre) a matraces volumtricos de 25 ml.
Afore una de las alcuotas (solucin a) con el alcohol isoproplico acuoso y djelo
reposar 30 minutos antes de leerlo en el espectrofotmetro. Afore la otra alcuota
(solucin b) como en el procedimiento (1), determine las absorvancias de las soluciones
a y b como el procedimiento anterior y calcule el contenido aparente de gosipol de
ambas soluciones usando la curva de calibracin.
Preparacin de la Curva de Calibracin.
Tome alcuotas duplicadas de 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8 y 10 ml de estndar de gosipol 0.02
mg/ml y colquelas en matraces volumtricos de 25 ml. Diluya una serie (solucin A)
aforando con alcohol isoproplico acuoso y determine la absorvancia como en el
anterior. A la otra serie (solucin b) adicinele 2 ml de anilina purificada y proceda
como anteriormente. Prepare un blanco de reactivos usando 2 ml de anilina y 10 ml de
acetona acuosa, calentada junto con el estndar. Determine absorvancias como en el
procedimiento (1) y calcule la densidad ptica corregida para cada solucin estndar:
Absorvancia Corregida = (Abs. solucin b - Abs. solucin a)
Trace la curva estndar, graficando absorvancia corregida contra concentracin de
gosipol en 25 ml.
Calule % de gosipol libre en harinas normales.
Gosipol libre % = 5G/WV
Donde:
G= Lectura en la Grfica
W= Peso de la muestra
V= Volumen de la alcuota usada.
Para harinas qumicamente tratadas.
Gosipol libre % = 5(B - A)/WV
Donde:
A = mg Gosipol libre aparente en alcuota (a)
B= mg Gosipol libre aparente en alcuota (b)

FIGURA 25
Determinacin de gosipol libre en harinas de semilla de algodn.
5.3. Determinacin de Tioglucsidos
El mtodo descrito proporciona el contenido aproximado de tioglucsidos pero no
determina tioglucsidos e isocianatos individuales.
Reactivos y Aparatos
Solucin Cloruro de Bario 5%
Matraces volumtricos de 600 ml
Bao de vapor
Procedimiento
1. A 10 g de harina (desengrasada por extraccin Soxhlet) adicinele 250 ml de
agua destilada, hidrolice a 54C por 1 h y caliente a ebullicin por 2 h.,
manteniendo el volumen constante.
2. Filtre, reteniendo el filtrado y lave el residuo tres veces con 50 ml de agua
caliente, agregando el lquido al filtrado inicial y afore a 600 ml.
3. Precipite el sulfato de bario por calentamiento y adicionando un exceso de
solucin de Cloruro de bario. Djelo en un bao de vapor por algunas horas y
filtre.
4. Calcine en una mufla y pese el precipitado.
Calcule el contenido aproximado de tioglucsido como:
% Tiogl= (M. wt. tioglucsido Peso de BaSO
4
) 100/M.wt. BaSO
4
Peso Muestra

FIGURA 26
Determinacin de tioglucsidos en ingredientes alimenticios.
5.4. Anlisis de Aflatoxinas
El mtodo que se incluye es adecuado para materiales como harina de cacahuate, harina
de copra y harina de palma kernel; para detalles del mtodo, as como para
procedimientos alternativos, refirase a Methods of Aflatoxin Analysis por B.D. Jones
(1972), Report No. G70, Tropical Products Institute, London.
Reactivos:
Cloroformo (G.R.)
Eter etlico (G.R.)
Mezcla cloroformo/metanol (95/5 v/v)
Celita, tierra de diatomeas
Gel de slica G (Merck)
Estndares Cualitativos. Permiten distinguir marcas de aflatoxina de otras
manchas fluorescentes que puedan estar presentes. Se puede usar con este
propsito harina de cacahuate conteniendo aflatoxina B obtenible en el Inst. de
Productos Tropicales de Londres.
Materiales y Equipo
Placas para cromatografa de capa fina 20 20 cm.
Lmparas UV pico de emisin a 365
Botellas de boca ancha de 250 ml
Micropipetas
Agitador
Rotoevaporador
Procedimiento
1. Pese 10 mg del material en un frasco de boca ancha y mzclelo con 10 ml de
agua (si se usa material con alto nivel de grasa, ser necesaria una extraccin
previa con soxhlet). Adicione 100 ml de cloroformo y agite por 30 min.
2. Filtre el extracto a travs de la celita, tome 20 ml del filtrado y llvelo a 25 ml
(solucin a). Tome otros 20 ml del filtrado y concntrelos a 5 ml (solucin b).
3. Prepare placas de cromatografa agitando 100 g de gel de slica G con 220 ml
de agua por 20 min y aplicando la mezcla a las placas con el aparato apropiado,
con un grosor de 509. Djela reposar por 1 hora y seque a 100C.
4. Coloque gotas de 10 y 20 l de solucin b y 15 y 10l de solucin a en la placa,
junto con una gota de estndar cualitativo, en una lnea a 2 cm del fondo de la
placa y al menos a 2 cm de cada lado. Realice la aplicacin bajo luz tenue.
5. Revele la placa en ter etlico a una altura de 12 cm, djela secar en luz tenue y
luego vulvala a revelar en mezcla de cloroformo/metanol hasta una altura de 10
cm desde la lnea basal.
6. Examine la placa en un cuarto obscuro a 30 cm de la fuente de UV. La presencia
de una mancha azul fluorescente a Rf 0.50.55 indica aflatoxina B (asegrese de
que la mancha del estndar se encuentre tambin en ese rango). la presencia de
una segunda mancha a Rf 0.45 0.5 indica aflatoxina G.
La toxicidad de una muestra puede ser clasificada en trminos de aflatoxinas B y G de
acuerdo con la tabla siguiente:
TABLA COMPARATIVA PARA DETERMINAR TOXICIDAD DE
AFLATOXINAS B Y G
Volumen aplicado
(ml)
Conc. de Aflatoxina (mg/kg)
Toxicidad de fluorescencia
observada
No fluoresencia c/fluoresencia
5 (sol. A) <1000 >1000 Muy alta
10 (sol. A) <500 5001000 Alta
10 (sol. B) <100 100500 Media
20 (sol. B) <50 50100 Baja
Tomado de Harris, 1980

FIGURA 27
Determinacin cromatogrfica de aflatoxinas en ingredientes alimenticios.
5.5. Mtodo Colorimtrico para la Determinacin de
Mimosina (Matsumoto y Sherman, 1951).
La mimosina es un aminocido libre muy comn en algunas leguminosas, incluyendo a
Leucaena leucocephala y L. glauca, consideradas excelentes fuentes de protena para la
alimentacin animal. Su presencia limita el uso de las hojas y semillas en la
alimentacin de monogstricos, ya que afecta la funcin de la tiroides, provocando
reduccin del crecimiento.
Reactivos
Solucin de Mimosina, 0.1% en HCl 0.1N (mimosina de L. glauca
recristalizada)
Solucin de Cloruro frrico al 0.5% en HCl 0.1N
Carbn Activado.
Acido Clorhdrico 0.1N.
Materiales y Equipo
Colormetro (usar espectrofotmetro 535 nm) Klett-Summerson con Filtro No.
54.
Matraz Kitazato.
Tubos de ensaye.
Crisol de Filtracin.
Vasos de precipitado de 250 ml.
Vasos de precipitado de 150 ml.
Matraz Volumtrico de 250 ml.
Matraz Volumtrico de 100 ml.
Procedimiento
Extraccin: Coloque 1.25 g de hoja seca de leucaena en un Vaso de precipitado de 250
ml y digiera con 100 ml de HCl 0.1N por hora con agitacin constante, deje enfriar y
transfiera todo a un matraz volumtrico de 250 ml, agite bien y deje reposar hasta que
los slidos se asienten en el fondo.
Clarificacin: Transfiera 10 ml de sobrenadante a un V.P. de 150 ml con 30 mg de
Carbn. Agregue agua para llevar el volumen a 25 ml, cbralo con un vidrio de reloj y
caliente a ebullicin por 15 min., deje enfriar y filtre con vaco en el crisol de filtracin;
el filtrado es colectado en un tubo colocado en el matraz kitazato. Enjuague el vaso de
precipitado y el material en el crisol con 10 ml de HCl 0.1N dividido en tres porciones.
Enjuague finalmente el crisol con 5 pequeas porciones de agua.
Determinacin Colorimtrica:
Transfiera el lquido obtenido a un matraz volumtrico de 100 ml, agregue 4 ml de
solucin de cloruro frrico al 0.5% en HCl 0.1N y afore con agua. El pH deber ser
entre 1.5 y 2.5. Lea en el Colormetro y calcule la cantidad de mimosina en una curva de
calibracin.
Curva de Calibracin: Disuelva 0.1046 g de mimosina pura en HCl 0.1N y afore a 100
ml con el cido. La solucin contiene 0.1% de mimosina. Coloque 1 ml de solucin de
mimosina en un matraz volumtrico de 100 ml y adicione 10 ml de HCl 0.1N y 4 ml de
la solucin de cloruro frrico al 0.5% y afore con agua. Lea la intensidad del color en el
Colormetro (espectro 535 nm). Use agua destilada como referencia y repita el
procedimiento usando 2,3,4 y 5 ml de solucin de mimosina. Se obtiene una lnea al
graficar la lectura del Colormetro contra la concentracin.

FIGURA 28
Determinacin colorimtrica de mimosina.
5.6. Mtodo Colorimtrico para la Determinacin de
Canavanina (Archibald, 1946)
Las semillas y hojas de leguminosas y en particular las de canavalia (Canavalia
ensiformis) y sesbania (Sesbania spp.) contienen cantidades variables del aminocido
libre canavanina, el cual es txico para animales monogstricos. El mtodo permite
determinar la cantidad del antinutriente en ingredientes alimenticios.
Reactivos
Buffer fosfato 1 M, pH 7.2. Mezcle 34.5 g de NaH
2
PO
4
.H
2
O con 130.6g de
K
2
PO
4
y ajuste el volumen a 1 litro
Solucin de nitroprusiato de sodio al 2%. Se debe usar solucin recin
preparada. Es estable por una semana cuando se almacena en obscuridad a 0
4C.
Perxido de hidrgeno (30% H
2
O
2
)
Solucin de carbonato de potasio al 20%
Solucin stock de canavanina. 2.5mg de canavanina/ml. Almacenar en hielo
seco
Solucin estndar de canavanina. Lleve 1 ml de la solucin stock a 10 ml con
agua
Reactivo de acuoprusiato. Mezcle 0.5ml de la solucin de carbonato al 20% y
0.4 ml de H
2
O
2
con 10ml de la solucin de nitroprusiato. Deje reposar por 30
min a temperatura ambiente (2025C). Deber prepararse diariamente. El uso
de cantidades mayores de perxido disminuye el color obtenido con la
canavanina.
Materiales y Equipo
Tubos de ensaye
Colormetro
Espectrofotmetro
Procedimiento
1. Ponga en un tubo de ensaye una muestra de 1 ml de extracto de la muestra,
conteniendo 00.25 mg de canavanina, se le adicionan 0.5 ml de buffer fosfato y
0.5 ml de reactivo de acuoprusiato. Maneje de la misma manera blancos
conteniendo 0.2, 0.5, 0.8, y 1 ml de solucin madre diluida y llevados a 1 ml con
agua, as como tambin un blanco de reactivos con 1 ml de agua, tratados con el
fosfato y acuoprusiato.
2. Mezcle vigorosamente y guarde los tubos en un gabinete obscuro; se
desarrollar una coloracin rojiza en presencia de canavanina.
3. Despus de 2 horas lea en un colormetro o espectrofotmetro. En este ltimo,
ajuste a una longitud de onda de 520 nm y el blanco a una densidad ptica de
cero. Puede usar cubetas del espectrofotmetro para desarrollar el color; si usa
cubetas de ms de 2 ml, puede adicionarles hasta 10 ml de agua despus de las 2
horas de incubacin para desarrollo del color.
Clculos
Se grafica la densidad ptica de cada estndar contra su cantidad correspondiente de
canavanina y el contenido de canavanina de las muestras se calcula a partir de la curva.

FIGURA 29
Determinacin colorimtrica de canavanina en ingredientes alimenticios.
5.7. Determinacin de Acido Cianhdrico
El cido cianhdrico se encuentra de manera natural en diferentes materiales como son
la semilla de lino, harina de yuca y algunas semillas de leguminosas. Este mtodo
permite determinar el cido libre o en forma de glucsido, para lo cual, la muestra se
suspende en agua, se libera el cido mediante enzimas y se separa por destilacin para
colectarse en una solucin de nitrato de plata acidificada.
Reactivos
Antiespumante (Silicona)
Acido ntrico (d= 1.42g/ml)
Solucin de amonio: Prepare diluyendo un volumen de hidrxido de amonio
(d=0.88 g/ml) en dos volmenes de agua.
Sulfato frrico amoniacal, solucin saturada
Suspensin de almendras dulces. Triture 20 almendras dulces blanqueadas en
100 ml de agua a 3740C. Asegrese de que no existe cido cianhdrico en 10
ml de la suspensin usando papel de picrato de sodio o corriendo un blanco
testigo como se describe ms adelante
Solucin de acetato de sodio, neutral a la fenoftalena: 10g de acetato de sodio
anhidro en 100 ml de agua destilada.
Solucin 0.02N de tiocianato de amonio
Solucin 0.02N de nitrato de plata.
Materiales y Equipo
Estufa regulada a 3738C
Aparato para destilacin de vapor
Matraz de fondo plano de 1000 ml con tapn esmerilado
Bao de aceite
Bureta graduada a 0.05 ml
Procedimiento
Pese con exactitud de 0.005g aproximadamente 20g de la muestra preparada, colquela
en un matraz de fondo plano de 1000 ml, adicione 50 ml de agua y 10 ml de suspensin
de almendras dulces. Tape el matraz y pngalo en la estufa durante 16 horas a 3738C.
Enfre a temperatura ambiente, adicione 80 ml de agua, 10 ml de solucin de acetato de
sodio y una gota de antiespumante.
Conecte el matraz al aparato de destilacin y colquelo en el bao de aceite previamente
ajustado a una temperatura ligeramente superior a 100C; destile 200300 ml de lquido
pasando una corriente de vapor a travs del matraz y calentando suavemente el bao de
vapor. Colecte el destilado en un matraz erlenmayer protegido de la luz conteniendo
exactamente 50ml de solucin de nitrato de plata 0.02N y 1ml de cido ntrico.
Asegrese de que la extensin del condensador est sumergida en la solucin de nitrato
de plata.
Transfiera el contenido del matraz erlenmayer a un matraz aforado de 500 ml y llvelo
al volumen con agua, mezcle y filtre. Remueva 250 ml del filtrado, adicione
aproximadamente 1 ml de sulfato frrico amoniacal y titule el exceso de nitrato de plata
con la solucin de tiocianato de amonio. Si se desea, se puede correr un blanco
siguiendo el mismo procedimiento con 10ml de suspensin de almendras dulces
omitiendo la muestra.
Expresin de resultados
Si el blanco indica que la solucin de nitrato de plata ha sido consumida, reste su valor
del volumen consumido por la destilacin de la muestra. 1 ml de 0.02N AgNO
3

0.54mg de HCN. Exprese el resultado como porcentaje de la muestra.
NOTA: Si la muestra (ej. frijoles) contiene una elevada cantidad de azufre, se formar
un precipitado negro de sulfato de plata, el cual se filtra junto con el depsito de cianuro
de plata. La formacin de este precipitado consume solucin de nitrato de plata y su
efecto debe ser eliminado para el clculo de contenido de HCN, para lo cual, trate el
depsito sobre el papel filtro con 50ml de amonaco a fin de disolver el cianuro de plata.
Lave el residuo en amonaco diluido y determine su contenido de plata. Convierta el
valor a ml de solucin 0.02N de solucin de nitrato de plata y rsteselo al volumen de
solucin de nitrato de plata consumida por el destilado de la muestra.

FIGURA 30
Determinacin de cido cianhdrico en ingredientes alimenticios.
5.8 Taninos en Plantas y Forrajes. (Krishna y Ranjhan,
1980)
Los taninos son glucsidos de polipptidos solubles en agua presentes en muchas
plantas, con un sabor agrio astringente, confiere sabor y olor indeseable a los alimentos.
Afectan la utilizacin de las protenas debido a que ligan a la lisina, hacindola
indisponible para animales monogstricos.
Reactivos
Solucin 0.1N de cido oxlico. 1 ml = 0.006235 g de cido quercitnico
0.0008g 0
2
absorbido
Solucin de permanganato de potasio. Disuelva 1.333g de KMnO
4
en un litro de
agua y estandarice contra el cido oxlico.
Solucin ndigo. Disuelva 6g de indigotin disulfonato de sodio en 500ml de agua
mediante calentamiento, enfra y adicione 50ml de cido sulfrico. Diluya a 1
litro y filtre.
Procedimiento
1. Extraiga 2g de muestra durante 20 horas con ter anhidro. Hierva el residuo por
2 horas con 300ml de agua, enfre, diluya a 500 ml y filtre.
2. Mida 25 ml de la infusin dentro de una cpsula de porcelana de 2 litros,
adicione 20ml de la solucin de ndigo y 750ml de agua. Adicione la solucin
estndar de permanganato, 1 ml a la vez, hasta que cambie el color azul a verde,
luego agregue otras gotas hasta que se torne de color amarillo dorado.
3. De manera similar, titule una mezcla de 20ml de solucin de ndigo y 750ml de
agua. Multiplique la diferencia entre las titulaciones por el factor deseado para
obtener cido quercitnico u oxgeno absorbido.

FIGURA 31
Mtodo simple para la determinacin de taninos en ingredientes alimenticios
5.9. Mtodo Simple para la Determinacin de Acido
Ftico (Wheeler y Ferrel, 1971).
El cido ftico se puede encontrar en algunas semillas como ajonjol, trigo, arroz, avena,
sorgo, cebada, etc. Su presencia puede provocar deficiencias de fsforo en
monogstricos por ligar y formar fitatos indigeribles que hacen indisponible ese
elemento; afecta tambin la disponibilidad de calcio, magnesio o el fierro con los que
forma el complejo fitina.
Reactivos
Solucin de cido tricloroactico (ATA) al 3%
Solucin concentrada de FeCl
3

Solucin de sulfato de sodio al 3% en ATA
Solucin 1.5N de hidrxido de sodio
Solucin 3.2N de HNO
3

Solucin 1.5M de KSCN
Solucin FeCl
3
- ATA que contenga 2 mg de Fe
2
en sol 3% ATA
Materiales y equipo
Matraz erlenmayer de 125 ml
Tubos cnicos para centrfuga
Matraz volumtrico de 100 ml
Bao mara
Agitador mecnico
Espectrofotmetro
Centrfuga de laboratorio
Embudos
Papel filtro Whatman 2
Procedimiento
1. Coloque en un matraz erlemayer de 125 ml una muestra finamente molida (40
mallas), estimada para contener de 5 a 50 mg de fitato-P. Extraiga durante 30
min con 50 ml de solucin al 3% de ATA bajo agitacin constante.
2. Centrifuge la suspensin y transfiera una alcuota de 10 ml del sobrenadante a
un tubo de centrfuga cnico. Agrguele 4 ml de la solucin de FeCl
3
preparada
para contener 2 mg de Fe
2
soplando rpidamente la pipeta.
3. Caliente durante 45 min el tubo con la muestra en un bao mara a 90100C. Si
el sobrenadante no est claro despus de 30 min adicione 1 2 gotas de la sol. al
3% de sulfato de sodio en ATA y contine con el calentamiento. Centrifuge por
1015 min y decante con cuidado el sobrenadante. Lave dos veces el precipitado
con 2025 ml de solucin de ATA al 3% dispersndolo bien y calentndolo en
agua a ebullicin por 510 min y centrifuge. Finalmente repita una vez el lavado
con agua.
4. Disperse el precipitado en un poco de agua destilada, adicione 3 ml de la
solucin 1.5N de NaOH y mezcle. Lleve el volumen a aproximadamente 30 ml
con agua destilada y caliente en agua a ebullicin durante 30 minutos. Filtre en
caliente (cuantitativamente) con un papel de retencin moderada (Whatman 2
SyS 597).
5. Lave el precipitado con 6070 ml de agua destilada caliente y deseche el
filtrado. Si se desea hacer determinacin de fsforo se puede usar el filtrado.
Disuelva el precipitado en el papel con 40 ml de la solucin 3.2N de HNO
3

pasndolo a un matraz volumtrico de 100 ml. Lave varias veces el papel con
agua destilada colectndola en el matraz. Enfre la muestra a temperatura
ambiente y afore con agua destilada.
6. Transfiera una alcuota de 5 ml a un matraz volumtrico de 100 ml y diluya a
aproximadamente 70 ml. Agregue 20 ml de la solucin 1.5M de KSCN y afore
con agua destilada. Lea de inmediato (dentro de un lapso de 1 min) en el
espectrofotmetro a 480 nm.
7. Corra un blanco de reactivos con cada muestra. Calcule el contenido de fierro a
partir de un estndar de Fe(NO
3
)
3
corrido al mismo tiempo o mediante una curva
estndar preparada con anterioridad.
Clculos
Calcule el fitato-P a partir de los resultados de fierro, asumiendo una tasa molecular de
4:6 fierro:fsforo

FIGURA 32
Mtodo simple para la determinacin de cido ftico en ingredientes alimenticios.
5.10. Determinacin de Saponinas en Vegetales y
Alimentos (Fenwick y Oakenfull, 1983)
Las saponinas se pueden encontrar en una gran variedad de plantas incluyendo la
alfalfa, soya y semillas de leguminosas, habindose demostrado un efecto negativo
sobre el crecimiento de monogstricos. Es un antinutriente estable al calor.
Reactivos
Acetona G.R.
Metanol
Solucin n-butanol-metanol-amonaco concentrado (3.5:1:2.5)
Solucin estndar de saponina purificada en metanol
Solucin de cido sulfrico en metanol (100 ml por litro)
Materiales y equipo
Extractor soxhlet
Rotoevaporador
Densitmetro con graficador
Planmetro
Desecador
Placa de gel de slica para cromatografa (Kieselgel 60 F-254 Merck)
Procedimiento
Muela finamente la muestra y squela a peso constante. Pese alrededor de 40 g y
colquela a reflujo con acetona en el extractor soxhlet por al menos 24 horas para
remover lpidos, pigmentos, etc. Cambie el solvente por metanol y contine la
extraccin por al menos otras 24 horas. Deje enfriar el extracto metanlico y llvelo a
250 ml con metanol.
En este punto hay una modificacin al mtodo propuesta por Miriam Monforte (CICY,
Mrida, Yucatn, Mxico). En lugar de llevarlo a 250 ml como sugiere el mtodo
original, es ms recomendable concentrar la muestra, lo que permite cuantificar
cantidades muy pequeas de saponina, para lo cual, pase el extracto metanlico a un
rotoevaporador y concentre a sequedad. Resuspenda el residuo con un mnimo de
metanol y pselo a un vial previamente pesado; si no se va a usar de inmediato, seque
con nitrgeno y gurdelo en desecador. Pese el vial con la muestra seca y calcule el
peso del residuo. Para utilizar la muestra, resuspenda con una cantidad conocida de
metanol (alrededor de 1 ml).
Cromatografa cualitativa en capa fina
Coloque puntos del extracto sobre una placa de gel de slica y revlelos con una
solucin n-butanol-etanol-amonaco concentrado (3.5:1:2.5). Se pueden aplicar tres
diferentes mtodos para identificar las manchas de saponina: (1) asperson con cido
actico-anisaldeido; (2) tratamiento con nitrato de plata seguido de hidrxido de sodio y
(3) tratamiento con una suspensin de eritrocitos en buffer isotnico. Para mayores
detalles consulte a Fenwick y Oakenfull (1981).
Cromatografa cuantitativa en capa fina
Coloque series de puntos con volmenes conocidos del extracto y de una solucin
estndar de saponina sobre las placas de cromatografa. Los puntos deben ser colocados
de tal manera que cada punto de extracto vaya al lado de los de estndar de saponina.
Revele las placas de la misma manera que en el apartado anterior y las manchas deben
ser visualizadas mediante la asperson de una solucin de cido sulfrico en metanol,
seguida de calentamiento a 110C por 30 min. Mida la intensidad de las manchas de
saponina por medio de un densitmetro y calcule las reas de los picos en el graficador
con un planmetro. los resultados son expresados como la relacin (R) de las reas de
los picos de la muestra desconocida con respecto a la del estndar.
Se ha determinado que la concentracin de saponina en la muestra (en g) es
proporcional al cuadrado de las reas relativas (R
2
). Grafique R
2
contra el volumen de la
gota de extracto metanlico colocada en la placa. La pendiente de la lnea (calculada por
el mtodo de cuadrados mnimos), divido entre la pendiente de una lnea obtenida de
una curva patrn, dar la concentracin de la saponina en el extracto y de esa manera, el
contenido de saponina en la muestra. El mtodo puede tener un error experimental
acumulado de 20%.

FIGURA 33
Determinacin de saponinas en ingredientes alimenticios.
6. REFERENCIAS
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concentrate feedingstuffs during storage. Tropical Products Institute, London, U.K.
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Williams, D. R., 1987. Animal feeding stuffs legislation of the U. K. A concise guide
Butterworths, London, U. K., 135 pp.
Anexo 1. Clases de alimento por
composicin y uso
1. Forraje seco Paja, ramas, follajes, productos con ms de 18% de fibra en base seca.
Son pobres en energa neta por unidad de peso debido a su alto
contenido de fibra. Se incluyen subproductos como cascarillas de
semillas, vainas, salvados, etc.
2. Pasturas; plantas y
forrajes verdes
Incluye todos los forrajes aun cuando no se hayan cortado, o cortados
y proporcionados en fresco
3. Ensilados Incluye solo forrajes ensilados (maz, alfalfa, pastos), pero no ensilados
animales, de granos, races y tubrculos
4. Alimentos
energticos
Incluye productos con menos de 20% de protena y 18% de fibra en
base seca como pescado, granos, subproductos de molienda
5. Alimentos proteicos Incluye productos con ms de 20% de protena en base seca, de origen
animal (incluyendo ensilados) as como oleaginosas y otros materiales.
6. Suplementos
minerales

7. Suplementos
vitamnicos
Incluye levaduras ensiladas
8. Aditivos Incluye otros suplementos como antibiticos, colorantes,
saborizantes, hormonas y medicamentos
Tomado de Harris, 1980.
Anexo 2. Limites recomendados para
algunas substancias indeseables en los
ingredientes alimenticios.
SUBSTANCIA MATERIAL
Contenido
mximo (12% de
humedad; mg/kg)
Arsnico - Todos los ingredientes excepto: 2

Alimentos elaborados con pasto, alfalfa
o trbol secos
4
Pulpa o melaza de remolacha 4

Fosfatos y subproductos de pescado y
otros animales marinos
10
Fluoruros - Todos los ingredientes excepto: 150
Materiales de origen animal 500
Fosfatos 2000
Plomo - Todos los ingredientes excepto: 10
Harina de pasto, alfalfa o trbol 40
Fosfatos 30
Levaduras 5
Mercurio - Todos los ingredientes excepto: 0.1

Subproductos de pescado y otros
animales marinos
0.5
Nitritos - Harina de pescado 60

(como nitrito de
sodio)
Aflatoxina B1 - Todos los ingredientes 0.05
Ricino (Ricinus communis) - Todos los ingredientes 10

(como vainas de
la planta)
Crotalaria spp - Todos los materiales sin moler 100
Gosipol libre - Todos los ingredientes excepto: 20
Harina o pasta de algodn 1200
Acido cianhdrico - Todos los ingredientes excepto: 50
Semilla de lino 250
Harina o pasta de lino 350
Productos de yuca y pasta de almendra 100
Aceite voltil de mostaza - Todos los ingredientes excepto: 100
Harina o pasta de colsa 4000

(como
isotiocianato)
Semillas y frutos conteniendo
alcaloides, glucsidos u otras
substancias txicas separadas o
- Todos los ingredientes 3000
en combinacin, incluyendo:
Lolium temulentum 1000
Lolium remotum 1000
Datura stramonium 1000
Tomado de Williams, 1987
Anexo 3. Algunos Factores
Antinutricionales Identifcados en
Diferentes ingredientes Alimenticios.
ANTINUTRIENTE MATERIAL EFECTO
Inhibidor de proteasas Oleaginosas incluyendo: Afecta la actividad de la tripsina
y agudiza la deficiencia de
aminocidos sulfurados de las
protenas vegetales. Provoca
hipertrofia pancretica asociada
a prdida de protenas
secretadas por el pncreas,
constituidas en gran medida por
enzimas ricas en Cistina.
Algodn (Gossypium spp.)
Cacahuate (Arachis hypogaea)
Colsa (Brassica campestris)
Girasol (Hellianthus annuus)
Soya (Glycine max)
Leguminosas incluyendo: Son termolbiles
alfalfa (Medicago sativa)
Leucaena (Leucaena
leucocephala)
Canavalia (Canavalia spp.)
Frijoles (Phaseolus spp.)
Lupino (Lupinus albus)
Cereales y sus subproductos
Fitohemaglutininas Oleaginosas incluyendo: Provocan coagulacin de la
sangre.
Cacahuate, soya
Son termolbiles
Leguminosas incluyendo:

Frijoles
Chcharos (Cicer spp., Vigna
spp., Cajanus spp., Pisum
spp.)
Cereales y sus subproductos
Acido fitico (fitatos) Oleaginosas incluyendo: Forma complejos indigeribles
entre protenas, fsforo, calcio,
zinc, cobre, magnesio, etc.,
provocando deficiencia de
minerales.
Cacahuate, colsa, soya,
algodn
Ajonjol (Sesamum indicum)
Leguminosas incluyendo: No se inactivan con calor
Frijoles, chcharos
Cereales y sus subproductos
Ciangenos Oleaginosas incluyendo: Toxicidad por cianuro
Lino (Linum usitatissimum)
El cocimiento destruye las
enzimas liberadoras del txico y
volatiliza el HCN
Leguminosas incluyendo:
Frijoles, chcharos
Harina de yuca y sorgo
Antagonistas de vitaminas Reducen la disponibilidad
biolgica de las vitaminas.
Anti Vitamina E Soya, frijoles, alfalfa
Anti Vitamina B
12
, D, A Soya Se inactivan por calor
Micotoxinas Oleaginosas incluyendo: Elevada toxicidad.
Aflatoxinas Cacahuate, colsa, soya, girasol,
algodn
Producidas por el moho
(Azpergilus spp.) bajo
condiciones inadecuadas de
almacenamiento: alta humedad
y temperatura. Se presenta
tambin en alimentos
terminados
Leguminosas incluyendo:
Frijoles, chcharos
Cereales y sus subproductos
Aminocidos libres: Leguminosas incluyendo:
Txicos a niveles elevados;
inhibicin del
Mimosina Leucaena crecimiento.
Canavanina Canavalia, Sesbania (Sesbania
spp.) Estables al calor
Adaptado de: FAO, 1983; Tacon y Jackson, 1985; New, 1987
MANUAL DE TECNICAS PARA LABORATORIO DE
NUTRICION DE PECES Y CRUSTACEOS
CONTENIDO


PROGRAMA COOPERATIVO GUBERNAMENTAL FAO - ITALIA
GCP/RLA/102/ITA PROYECTO AQUILA II DOCUMENTO DE CAMPO N
o
7
Por
Miguel Angel Olvera Novoa
Carlos A. Martnez Palacios
Elizabeth Real de Len
Documento preparado para el Proyecto GCP/RLA/102/ITA
Apoyo a las Actividades Regionales de Acuicultura para
Amrica Latina y el Caribe (AQUILA II)



PREPARACION DEL DOCUMENTO
Este documento fue realizado como parte de las actividades del Proyecto FAO/Italia
GCP/RLA/102/ITA Apoyo a las Actividades Regionales de Acuicultura para Amrica
Latina y el Caribe (AQUILA), cuyo objetivo principal es ayudar a los pases miembros
para que incrementen la produccin de alimento por medio de la acuicultura, bajo la
consideracin de que fomentando la capacitacin, la investigacin y el intercambio de
informacin, se fortalecer el crecimiento de la actividad de acuerdo a las caractersticas
de cada pas.
E1 trabajo comprende una recopilacin de los mtodos ms comunes de anlisis
qumicos para evaluar la calidad de los ingredientes alimenticios y las dietas preparadas,
con el propsito de hacerlos disponibles a la mayora de los tcnicos y personal
involucrado en la alimentacin de peces y crustceos. Se sealan adems algunas
recomendaciones para el manejo de las muestras para una buena representatividad de
los resultados obtenidos. Las tcnicas seleccionadas se presentan divididas en tres
grupos, las incluidas dentro de los anlisis proximales, un captulo de anlisis especiales
que comprende tcnicas para la determinacin ms precisa de algunos nutrientes
importantes como son por ejemplo, minerales, carbohidratos y protena verdadera, y un
tercer apartado con los mtodos analticos para algunos de los txicos y antinutrientes
ms comunes en los alimentos.

AGRADECIMIENTOS
Los autores desean expresar su agradecimiento al Dr. Albert Tacon por su apoyo e
impulso a las actividades sobre nutricin de organismos acuticos, as como tambin a
las autoridades regionales del proyecto AQUILA.

Las denominaciones empleadas en este documento y la forma que aparecen presentados
los datos, no implican de parte de la Organizacin de las Naciones Unidas para la
Agricultura y Alimentacin, juicio alguno sobre la condicin jurdica de pases,
territorios, ciudades o zonas o de sus autoridades, ni respecto de la delimitacin de sus
fronteras o lmites. De la misma manera, el mencionar nombres o marcas de fbrica o
distintos productos, no implican recomendacin alguna por parte de la organizacin
para su uso.
ORGANIZACION DE LAS NACIONES UNIDAS PARA LA AGRICULTURA Y LA
ALIMENTACION
MEXICO, D.F.
MAYO 1993

Los hiperenlances que remiten a sitios Internet distintos de los de la FAO no implican,
de parte de la Organizacin, ratificacin oficial o responsabilidad respecto a
opiniones, ideas, datos o productos presentados en dichos sitios, o una garanta de
validez acerca de las informaciones que contienen. El nico propsito de los enlaces a
sitios distintos de los de la FAO es proporcionar otras informaciones disponibles sobre
asuntos conexos.
La presente versin electrnica de este documento ha sido preparada utilizando
programas de reconocimiento ptico de texto (OCR). La FAO declina cualquier
responsabilidad por las eventuales diferencias que puedan existir entre esta versin y la
versin original impresa.

CONTENIDO
1. INTRODUCCION
2. PREPARACION DE LA MUESTRA PARA ANALISIS
2.1. Preparacin de la muestra
3. ANALISIS PROXIMALES
3.1. Humedad
3.2. Protena cruda.
3.3. Lpidos crudos
3.4. Fibra cruda
3.5. Ceniza
3.6. Extracto libre de nitrgeno (ELN)
3.7. Correcciones
4. ANALISIS ESPECIALES
4.1. Determinacin de fibra por detergente acido.
4.2. Determinacin de fibra por detergente neutro.
4.3. Ceniza insoluble en cido clorhdrico
4.4. Carbohidratos totales disponibles (Clegg-Anthrone).
4.5. Nitrgeno proteico y no proteico.
4.6. Determinacin de protenas por el mtodo de Lowry.
4.7. Determinacin de urea
4.8. Acido rico.
4.9. Ceniza soluble e insoluble en cido.
4.10. Determinacin de calcio en el alimento.
4.11. Determinacin de fsforo
4.12. Determinacin de cloruro de sodio
4.13. Determinacin de potasio
4.14. Cuantificacin de xido de cromo en heces y alimentos
4.15. Mtodo de Carpenter para la determinacin de lisina disponible
4.16. Anlisis de melazas
5. ANTIMETABOLITOS Y TOXINAS EN ALIMENTOS
5.1. Actividad uresica enharina de Soya
5.2. Gosipol libre en harina de semilla de algodn
5.3. Determinacin de tioglucsidos
5.4. Anlisis de aflatoxinas
5.5. Mtodo colorimtrico para la determinacin de mimosina
5.6. Mtodo colorimtrico para la determinacin de canavanina
5.7. Determinacin de cido cianhdrico
5.8. Taninos en plantas y forrajes
5.9. Mtodo simple para la determinacin de cido ftico
5.10. Determinacin de saponinas en vegetales y alimentos
6. REFERENCIAS
Anexo 1. Clases de alimento por composicin y uso
Anexo 2. Limites recomendados para algunas substancias indeseables
Anexo 3. Algunos Factores Antinutricionales Identificados
INDICE DE FIGURAS
1 Determinacin de humedad en ingredientes alimenticios
2 Determinacin de protena cruda (mtodo kjeldahl)
3 Determinacin de protena cruda (mtodo MAFF)
4 Determinacin de lpidos por Soxhlet
5 Determinacin de fibra cruda
6 Determinacin de ceniza en alimentos
7 Determinacin de fibra por detergente cido
8 Determinacin de fibra por detergente neutro.
9 Ceniza insoluble en cido clorhdrico (mtodo A)
10 Ceniza insoluble en cido clorhdrico (mtodo B)
11 Determinacin de carbohidratos totales disponibles
12 Determinacin de nitrgeno proteico y no proteico.
13 Determinacin de protena por el mtodo de Lowry
14 Determinacin de urea en ingredientes alimenticios
15 Determinacin de cido Urico en gallinaza y alimentos.
16 Determinacin de ceniza soluble e insoluble en cido.
17 Determinacin de calcio en el alimento.
18 Determinacin de fsforo en ingredientes alimenticios
19 Determinacin de cloruro de sodio en harina de pescado y alimentos
20 Determinacin de potasio en ingredientes alimenticios
21 Cuantificacin de xido de cromo en heces y alimentos
22 Determinacin de lisina disponible en ingredientes alimenticios
23 Determinacin de azcares en melazas
24 Determinacin de actividad uresica en harina de soya
25 Determinacin de gosipol libre en harina de semilla de algodn
26 Determinacin de Tioglucsidos en ingredientes alimenticios
27 Determinacin de aflatoxinas en alimentos
28 Mtodo colorimtrico para la determinacin de mimosina
29 Mtodo colorimtrico para la determinacin de canavanina
30 Determinacin de cido cianhdrico en ingredientes alimenticios
31 Determinacin de taninos en plantas y forrajes
32 Mtodo simple para la determinacin de cido ftico
33 Determinacin de saponinas en vegetales y alimentos