abc PARA SU USO Para la determinacin cuantitativa in vitro de Colesterol en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilizacin en Manual.
Cat. No. CH 200 Reactivo 6 x 30 ml 6 x 30 ml Patrn 1 x 5 ml
CH 201 Reactivo 6 x 100 ml 6 x 100 ml Patrn 1 x 5 ml
CH 202 Reactivo 8 x 250 ml 8 x 250 ml Patrn 1 x 5 ml
CH 259 Reactivo 6 x 1 Litro 6 x 1 Litro Patrn 1 x 5 ml
UTILIDAD CLNICA (1,2,3) El anlisis de Colesterol s utilizado para el diagnstico y tratamiento de dislipemias y desrdenes metablicos. Los lpidos representan un importante papel en el cuerpo humano: ya sea cmo homonas o precursores hormonales, ayuda a la digestin, fuente o almacn de recursos energticos, componentes estructurales y funcionales de membranas biolgicas, o funcionando como aislantes para prevenir prdidas de calor y permitir la conduccin nerviosa
En Qumica Clnica, los lpidos han sido asociado durante la ltima dcada con el metabolismo de las lipoprotenas y la ateriosclerosis
El mtodo descrito por Abell y cols (1952) se refiere a la extraccin del colesterol con disolventes orgnicos y una posterior hidrlisis alcalina de los steres de colesterol. La reaccin s altamente especfica, pero la metodologa es laboriosa y requiere reactivos corrosivos, siendo por tanto impracticable en la rutina diaria del laboratorio
Richmond (1973) describi el mtodo de la colesterol oxidasa, trs la saponificacin de la muestra. Este mtodo fu el primer paso hacia un procedimiento totalmente enzimtico. Allain y cols junto con Roeschaw y cols publicaron en 1974 el primer procedimiento completamente enzimtico para determinar colesterol, reemplazando as la saponificacin qumica por la saponificacin enzimtica.
PRINCIPIO (4) El colesterol se determina tras una hidrlisis enzimtica y una oxidacin. El indicador quinoneimina se forma a partir de perxido de hidrgeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa. colesterol Ester de colesterol + H 2 O colesterol + Acidos grasos
esterasa
colesterol Colesterol + O 2 Colesten-3-ona + H 2 O 2
oxidasa
peroxidasa 2H 2 O 2 +fenol+4-aminoantipirina quinoneimina + H 2 O
RECOGIDA Y PREPARACIN DE MUESTRAS (5) Suero: Puede ser utilizado. Plasma: Tratado con EDTA (1 mg/ml) o heparina (up to 75 U/ml) No utilizar citrato, oxalato o fluor. Las muestras de Plasma y Suero pueden almacenarse durante 4 das +4C.
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.
La solucin 1 contiene azida sdica. Evitar su ingestin o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el rea afectada con agua abundante. En caso de ingestin o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un mdico.
La azida sdica reacciona con el cobre y plomo de las tuberas, lo que podra producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formacin de estas azidas. Las superficies metlicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sdica deben ser lavadas con hidrxido sdico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los propsitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS REACTIVOS Reactivo Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C en ausencia de contaminacin y protegido de la luz.
Patrn Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C.
MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Patrn
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
MANUAL - CHOLESTEROL - Mtodo Enzimtico de Punto Final - CH 200 PAGE 2 OF 2
Mezclar, incubar durante 10 min. a 20-25C 5 min. a 37C. Medir la absorbancia de la muestra (A muestra ) frente al blanco antes de 60 min.
CALCULOS 1. Utilizando un patrn: A muestra
Conc. de colesterol = x Conc. de patrn en la muestra A patrn
2. Utilizando un factor:
Longitud de onda mmol/l mg/dl
Hg 546 nm 21,7 x A 840 x A 500 nm 14,3 x A 553 x A
CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al da. Los valores obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repeticin excluye error, se debern seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programacin del instrumento y la lmpara 2. Comprobar que todo material est limpio. 3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reaccin 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
INTERFERENCIA Valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de bilirrubina hasta 5 mg/dl y de triglicrido hasta 4,64 mmol/l, no interfieren en la prueba.
VALORES NORMALES EN SUERO/PLASMA (6) Niveles de riesgo
Valor Interpretacin
< 5,17 mmol/l (200 mg/dl) Colesterol en sangre deseado 5,17 - 6,18 mmol/l (200-239 mg/dl) Colesterol en sangre lmite-alto 6,20 mmol/l (240 mg/dl) Colesterol en sangre alto
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geogrfica de la poblacin.
LINEALIDAD El mtodo es lineal hasta una concentracin de colesterol de 19,3 mmol/l (750 mg/dl). Las muestras con concentraciones de colesterol superiores a sta, deben ser diluidas 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 3.
REFERENCIAS 1. Abell, L.L, Levey, B.B., Brodie B.B., et al, J. Biol Chem 195 : 357, 1952 2. Richmond, N., Clin Chem 19 : 1350 - 1356, 1973 3. Roeschlau, P., Bernt, E. and Gruber, J.W., Clin Chem Clin Biochem. 12 : 403, 1974 4. Trinder, P., Ann clin Biochem 6 : 24, 1969. 5. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st Edition (1998) p169; Lothar Thomas ed. TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany 6. Third Report of the National Cholesterol Education Programme (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation and treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III). JAMA Publication, Vol 285, No. 19, P2486 - 2497; 2001.