CHOLESTEROL

Mtodo Enzimtico de Punto Final

Manual


abc
PARA SU USO
Para la determinacin cuantitativa in vitro de Colesterol en
suero y plasma. Este producto es adecuado para su
utilizacin en Manual.

Cat. No.
CH 200 Reactivo 6 x 30 ml
6 x 30 ml Patrn 1 x 5 ml

CH 201 Reactivo 6 x 100 ml
6 x 100 ml Patrn 1 x 5 ml

CH 202 Reactivo 8 x 250 ml
8 x 250 ml Patrn 1 x 5 ml

CH 259 Reactivo 6 x 1 Litro
6 x 1 Litro Patrn 1 x 5 ml

UTILIDAD CLNICA
(1,2,3)
El anlisis de Colesterol s utilizado para el diagnstico y
tratamiento de dislipemias y desrdenes metablicos.
Los lpidos representan un importante papel en el cuerpo
humano: ya sea cmo homonas o precursores
hormonales,
ayuda a la digestin, fuente o almacn de recursos
energticos, componentes estructurales y funcionales de
membranas biolgicas, o funcionando como aislantes
para prevenir prdidas de calor y permitir la conduccin
nerviosa

En Qumica Clnica, los lpidos han sido asociado
durante la ltima dcada con el metabolismo de las
lipoprotenas y la ateriosclerosis

El mtodo descrito por Abell y cols (1952) se refiere a la
extraccin del colesterol con disolventes orgnicos y una
posterior hidrlisis alcalina de los steres de colesterol.
La reaccin s altamente especfica, pero la metodologa
es laboriosa y requiere reactivos corrosivos, siendo por
tanto impracticable en la rutina diaria del laboratorio

Richmond (1973) describi el mtodo de la colesterol
oxidasa, trs la saponificacin de la muestra. Este
mtodo fu el primer paso hacia un procedimiento
totalmente enzimtico.
Allain y cols junto con Roeschaw y cols publicaron en
1974 el primer procedimiento completamente enzimtico
para determinar colesterol, reemplazando as la
saponificacin qumica por la saponificacin enzimtica.

PRINCIPIO
(4)
El colesterol se determina tras una hidrlisis enzimtica
y una oxidacin. El indicador quinoneimina se forma a
partir de perxido de hidrgeno y 4-aminoantipirina en
presencia de fenol y peroxidasa.
colesterol
Ester de colesterol + H
2
O colesterol + Acidos grasos

esterasa

colesterol
Colesterol + O
2
Colesten-3-ona + H
2
O
2

oxidasa

peroxidasa
2H
2
O
2
+fenol+4-aminoantipirina quinoneimina + H
2
O

RECOGIDA Y PREPARACIN DE MUESTRAS
(5)
Suero: Puede ser utilizado.
Plasma: Tratado con EDTA (1 mg/ml) o heparina (up to
75 U/ml) No utilizar citrato, oxalato o fluor.
Las muestras de Plasma y Suero pueden almacenarse
durante 4 das +4C.

COMPOSICION DEL REACTIVO

Componentes Concentracin inicial de la solucin

Reactivo
4-aminoantipirina 0,30 mmol/l
Fenol 6 mmol/l
Peroxidasa 0,5ml
Colesterol esterasa 0,15 U/ml
Colesterol oxidasa 0,1 U/ml
Tampn Pipes 80 mmol/l;pH 6,8
Patrn 5,17 mmol/l (200 mg/dl)


PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la
boca. Respetar las precauciones normales necesarias,
que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

La solucin 1 contiene azida sdica. Evitar su ingestin o
el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto
con la piel, lavar inmediatamente el rea afectada con
agua abundante. En caso de ingestin o contacto con los
ojos llamar inmediatamente a un mdico.

La azida sdica reacciona con el cobre y plomo de las
tuberas, lo que podra producir azidas explosivas.
Cuando se deseche este reactivo enjuagar
abundantemente con agua para evitar la formacin de
estas azidas. Las superficies metlicas que hayan sido
puestas en contacto con la azida sdica deben ser
lavadas con hidrxido sdico al 10%.

Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn
disponibles si se desean.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propsitos indicados por personal adecuado
cualificado de laboratorio bajo condiciones
apropiadas de laboratorio.

ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS REACTIVOS
Reactivo
Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de
caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C en
ausencia de contaminacin y protegido de la luz.

Patrn
Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de
caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C.

MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo
Patrn

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN
1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)

MANUAL - CHOLESTEROL - Mtodo Enzimtico de Punto Final - CH 200 PAGE 2 OF 2

RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
Email: applications@randox.com Website: www.randox.com
ABC

PROCEDIMIENTO

Longitud de onda 500 nm, Hg 546 nm
Cubeta 1 cm de espesor
Temperatura 20-25C, 37C
Medicin frente a reactivo blanco

Pipetear en la cubeta:

Reactivo Blanco (l) Patrn (l) Muestra (l)

Agua Destilada 10 --- ---
Patrn --- 10 ---
Muestra --- --- 10
Reactivo 1000 1000 1000

Mezclar, incubar durante 10 min. a 20-25C 5 min. a
37C. Medir la absorbancia de la muestra (A
muestra
) frente
al blanco antes de 60 min.

CALCULOS
1. Utilizando un patrn:
A
muestra

Conc. de colesterol = x Conc. de patrn
en la muestra A
patrn

2. Utilizando un factor:

Longitud de onda mmol/l mg/dl

Hg 546 nm 21,7 x A 840 x A
500 nm 14,3 x A 553 x A


CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2
y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos
niveles distintos de controles al menos una vez al da. Los
valores obtenidos debern encontrarse dentro del rango
especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y
su repeticin excluye error, se debern seguir los
siguientes pasos:
1. Comprobar la programacin del instrumento y la
lmpara
2. Comprobar que todo material est limpio.
3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente
de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44
28 94422413.

INTERFERENCIA
Valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de bilirrubina
hasta 5 mg/dl y de triglicrido hasta 4,64 mmol/l, no
interfieren en la prueba.

VALORES NORMALES EN SUERO/PLASMA
(6)
Niveles de riesgo

Valor Interpretacin

< 5,17 mmol/l (200 mg/dl) Colesterol en sangre deseado
5,17 - 6,18 mmol/l (200-239 mg/dl) Colesterol en sangre
lmite-alto
6,20 mmol/l (240 mg/dl) Colesterol en sangre alto

Se recomienda que cada laboratorio establezca su
propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geogrfica de la poblacin.

LINEALIDAD
El mtodo es lineal hasta una concentracin de
colesterol de 19,3 mmol/l (750 mg/dl). Las muestras con
concentraciones de colesterol superiores a sta, deben
ser diluidas 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el
resultado por 3.

REFERENCIAS
1. Abell, L.L, Levey, B.B., Brodie B.B., et al, J. Biol
Chem 195 : 357, 1952
2. Richmond, N., Clin Chem 19 : 1350 - 1356, 1973
3. Roeschlau, P., Bernt, E. and Gruber, J.W., Clin Chem
Clin Biochem. 12 : 403, 1974
4. Trinder, P., Ann clin Biochem 6 : 24, 1969.
5. Clinical Laboratory Diagnostics. 1
st
Edition (1998)
p169; Lothar Thomas ed. TH-Books
Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany
6. Third Report of the National Cholesterol Education
Programme (NCEP) Expert Panel on Detection,
Evaluation and treatment of High Blood Cholesterol in
Adults (Adult Treatment Panel III). JAMA Publication,
Vol 285, No. 19, P2486 - 2497; 2001.











































Revisado 21/01/04bf