GUIA LABORATORIO.

DOCUMENTO DE APOYO.
TINCIÓN DE MICROORGANISMOS
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1. INTRODUCCIÓN

Debido a que las bacterias y otros microorganismos tienen un tamaño muy pequeño, se
requiere de tinciones biológicas para visualizarlos, demostrar detalles de su estructura
interna, o algunas funciones fisiológicas; además estos colorantes, son utilizados como
indicadores de pH en los medios de cultivos, como indicadores REDOX para demostrar la
presencia o ausencia de condiciones de Anaerobiosis.

2. OBJETIVO

Identificar características macroscópicas y microscópicas de morfotipos encontrados en el

recuento de microorganismo.

3. REQUISITOS BASICOS MINIMOS

Bata, tapabocas, guantes, equipos, materiales, reactivos, sharpie.

4. EQUIPOS Y REACTIVOS

4.1. EQUIPOS

4.1.1 Cabina de flujo laminar

4.1.2 Mechero Bussen
4.1.3 Asa redonda
4.1.4 Asa lisa
4.1.5 Cinta transparente
4.1.6 Microoscopio
4.1.7 Aceite de inmersión
4.1.8 laminas portaobjetos
4.1.9 Laminillas cubreobjetos

5. REACTIVOS

5.1.1 Kit de reactivos Gram (Cristal violeta, lugol, alcohol cetona y fucsina)

5.1.2 Azul de lactofenol

6. DEFINICIONES

6.1 TINCIÓN DE GRAM: Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y
clasifi ca a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram
positivas.10 Fue desarrollada por el científi co danés Hans Christian Gram en 1884; hoy en día, sigue
siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo económico, sencillo y efi caz
que resulta

6.2 TINCIÓN DE AZUL DE LACTOFENOL: no es considerada una tinción diferencial, sin embargo,
posee características tintoriales que permiten observar cada uno de los componentes fúngicos y
apreciar fácilmente las estructuras para una adecuada identificación. El fenol inactiva las enzimas
líticas de la célula e impide que ésta se rompa; de igual forma, destruye la flora acompañante e
inactiva a la célula, quitándole el grado de patogenicidad; además, actúa como mordiente cuando
se usa en combinación con colorantes.

7. PROCEDIMIENTO

 BACTERIAS

7.1. Marque una lámina limpia y desengrasada, con cinta de enmascarar en el extremo izquierdo.

7.2 Ponga sobre la lámina una gota de agua con el asa recta estéril, si es de medio líquido con el
asa de argolla

7.3 Tome una colonia con el asa recta

7.4 Emulsione la colonia con la gota de agua y dejar secar a temperatura ambiente

7.5 Fijar el material al portaobjeto de modo que no sea arrastrado durante el proceso de tinción,
pasando el portaobjeto 3 o 4 veces por la llama de un mechero.

7.6 Colocar el preparado sobre un soporte de tinción y cubrir la superficie con dos gotas de solución
de cristal violeta por 1 minuto.

7.7 Pasando el minuto, lavar con agua

7.8 Cubrir el preparado con lugol por 1 minuto. Lavar nuevamente con agua

7.9 Sostener el portaobjeto entre el pulgar y el índice y bañar la superficie con unas gotas del
decolorante: alcohol acetona hasta no arrastrar más colorante violeta. Esto requiere habitualmente
unos 30 segundos o menos.
7.10 Lavar con agua y colocar nuevamente el portaobjeto sobre
el soporte. Cubrir la superficie con fucsina o safrina (contracolor)
durante 1 minuto. Lavar con agua.

7.11 Colocar el preparado en un soporte de tinción en posición vertical, dejando que escurra el
exceso de agua y que se seque el extendido.
7.12 Examinar el extendido al microscopio con objetivo de inmersión (100X).Las bacterias Gram
positivas se observan de color azul intenso o violeta. Las bacterias Gram negativas se observan de
color rojo o rosado.

MOHOS Y LEVADURAS

Preparación de la impronta
7.2.1. Colocar el material necesario en la campana de seguridad tipo 2A.
7.2.2. Seleccionar las colonias para realizar las improntas.
7.2.3. Cortar segmentos de cinta adhesiva transparente aproximadamente de 1 cm2 .
7.2.4. Pegar los segmentos de cinta en un asa micológica.
7.2.5. Poner una gota de azul de algodón en el portaobjetos.
7.2.6. Con el lado adhesivo de la cinta, tocar la parte superior de hongo.
7.2.7. Colocar la cinta sobre la gota de azul de algodón y poner otra gota de azul de algodón.
7.2.8. Poner un cubreobjetos sobre la preparación.
7.2.9. Observar en 40x.

CONTROL DE CALIDAD

Se realiza a través de la certificación de los reactivos, la colonia aislada seleccionada para teñir.

Elaborado por: Andrea Pamela Camacho Barrera. Instructora Contratista. Microbiologa Industrial.
Esp. Ciencia y Tecnologia de Alimentos.

10. BIBLIOGRAFÍA

10.1 CONCEPTOS Y PRÁCTICAS DE METODOLOGÍA GENERAL.UNIVERSIDAD NACIONAL DE

COLOMBIA SEDE PALMIRA 2011.
http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf [Consultado 11-11-2017]