MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL - LABORATORIO

C ROS C OP Í A Y
MI
TINCIONES

JUDITH
M. Sc. VIRGINIA
O
ROJAS MERCAD
 OBJETIVOS

● Familiarizarse en el uso del microscopio

● Aprender a realizar tinciones de
microorganismos
❖ Tinción Simple
❖ Tinción Gram
❖ Tinción de esporas
❖ Observación de mohos
.
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 MICROSCOPIO

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 PARTES DEL MICROSCOPIO
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 MICROSCOPIO

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PREPARACIÓN DEL FROTIS
PREPARACIÓN DEL FROTIS
https://www.youtube.com/watc
h?v=O9bUs7UuS10
 COLORANTES
Los colorantes son sustancias capaces de ceder o transmitir su color a otras

Los colorantes pueden ser según su estructura química :

Ácidos, básicos y neutros

● Colorantes ácidos son en los que la propiedad colorante radica en el ión

con carga negativa, por lo que se llaman aniónicos
● En los básicos, por el contrario, el ión coloreado es positivo, siendo
llamado catiónico.
● Los colorantes neutros son una complejas de un colorante ácido y un
básico
COLORANTES
Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la
célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es
un colorante por sí mismo.

Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente

habitual es el ácido tánico, el lugol

El mordiente se combina con un constituyente celular y lo

altera de tal modo que ahora sí podrá reaccionar con el
colorante
 MICROSCOPÍA Y TINCIONES
Los colorantes tienen las siguientes
funciones:

1. Permiten hacer visibles a los objetos

microscópicos y transparentes.

2. Revelan su forma y tamaño.

3. Muestran la presencia de estructuras

internas y externas.
MATERIAL NECESARIO PARA REALIZAR LA TINCIÒN SIMPLE

algodon
alcohol

de genciana
MATERIAL NECESARIO PARA REALIZAR LA TINCIÒN SIMPLE
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA PROCESO DE TINCIÓN
Limpiar el portaobjetos con algodón
empapado con alcohol
Proceder a secar con algodón
PREPARACIÓN DE FROTIS:
Muestra líquida-
Colocar una porción del cultivo con el asa de
platino en el portaobjeto.
Muestra sólida-
Colocar una gotita de agua destilada en el
portaobjeto para diluir la porción de cultivo
en ella.
Colocar una porción de muestra con asa de
platino
Esparcir la muestra al centro del portaobjeto
Secar a temperatura ambiente
Fijar por calor
 TINCIÓN SIMPLE

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 TINCIÓN SIMPLE
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 TINCIÓN DIFERENCIAL
Se denominan así los procedimientos de coloración
que ponen de manifiesto diferencias entre las
células microbianas o entre subestructuras de una
misma célula.
Básicamente comprenden el empleo de más de un
colorante, mordientes y/o decolorantes específicos.
 DIFERENCIA ENTRE MICROORGANISMOS
GRAM + Y GRAM -
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DIFERENCIA EN COMPOSICIÓN DE PARED CELULAR
 TINCIÓN GRAM
PROCEDIMIENTO
a) Preparar el frotis en la forma ya indicada.
b) Cubrir el frotis ya fijado con cristal violeta y dejar
actuar durante 1 min.
c) Lavar con agua corriente, cuidando que no se
arrastre la preparación.
b) Cubrir con solución de Lugol (I3K), dejar actuar
durante 1 min y lavar con agua.
c) Cubrir con alcohol-acetona, durante 10 s y lavar con
agua
d) Cubrir con solución de fucsina básica o safranina,
dejar actuar 30 s y lavar con agua.
Secar y observar al microscopio con el objetivo de
inmersión
 TINCIÓN GRAM

https://mail.google.com/mail/u/0/?tab
=wm&ogbl#inbox/FMfcgxwJXpJwqrv
QgQwShhrNpXPrmQzg?projector=1
 TINCIÓN DE ESPORAS
PROCEDIMIENTO

a) Realizar un frotis colocando una capa fina del cultivo

sobre el portaobjeto, dejar secar y fijar con la mínima
cantidad de calor.

b) Cubrir la preparación con solución al 5 % de verde de

malaquita, calentar con hisopo hasta la emisión de
vapores y dejar enfriar durante 5 min.

c) Lavar con agua.

d) Colorear durante 30 s con solución acuosa de

safranina al 0,5%.

e) Lavar con agua, secar con papel y observar con el

objetivo de inmersión.
 TINCIÓN DE ESPORAS
,
TINCIÓN DE ESPORAS
https://www.youtu
be.com/watch?v=q
mDSISwVuuE
TINCIÓN DE ESPORAS
OBSERVACIÓN DE MOHOS - TÉCNICA DE IMPRONTA
Cortar un pedazo de diurex de aproximadamente 1.5 cm.
• Colocar una gota de lactofenol azul de algodón en un
portaobjetos limpio y desengrasado.
• Esterilizar el asa micológica y dejar enfriar.
• Pegar el diurex en el extremo del asa y con el lado de goma
hacia abajo presionar el diurex sobre el cultivo de hongo
cuidando de no frotar
• Con ayuda del asa bacteriológica depositar el diurex (con la
muestra hacia el colorante) en el portaobjetos

Realizar la observación
OBSERVACIÓN DE MOHOS - TÉCNICA DE IMPRONTA

• Colocar un cubreobjetos y
observar al microscopio con los
objetivos 10x y 40x.

3. Registrar los resultados, para

ello describir las características
de los hongos con ayuda de los
esquemas del Manual de
Microbiología General
OBSERVACIÓN DE MOHOS - TÉCNICA DE IMPRONTA

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