RECOPILADO POR: EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS

NMX-F-256-1977. CUENTA MICROSCÓPICA DIRECTA EN ALIMENTOS. DIRECT MICROSCOPIC COUNTS IN FOOD. NORMAS MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE NORMAS. 0. INTRODUCCIÓN

La cuenta microscópica directa es una técnica útil para obtener información sobre la carga bacteriana total de un alimento. Se emplea en diversos alimentos aprovechando ciertas ventajas que muestra sobre el recuento de colonias en placa: no requiere incubación y por tanto el resultado se obtiene en pocos minutos; el material de estudio (frotis) se puede conservar o transportar sin deterioro durante mucho tiempo; su costo es reducido, y permite finalmente la observación directa del tipo de flora bacteriana presente. Sin embargo, el método no permite diferenciar células viables, de muertas en la muestra original y el volumen de alimento estudiado es muy pequeño y por ello de menor significado al referirlo al lote del cual proviene. 1. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Esta Norma especifica el método de prueba para determinarla cuenta microscópica directa en alimentos. 2. 2.1 • • • • • • • • • • • MATERIALES Y REACTIVOS Materiales Microscopio compuesto de preferencia binocular con objetivo de inmersión Disco ocular sub-dividido en cuadros o cuadrantes para facilitar el recuento por campo Platina móvil. Micrómetro objetivo para calcular el factor del microscopio. Porta-objetos limpios y desengrasados. Placas guías con áreas de 1 cm2 para colocarla bajo los porta-objetos. Pipetas o jeringas estériles para transferir 0.01 ml. Vasos de koplin o equivalente. Contador manual. Asa de platino o micrómel con un doblez terminal en ángulo recto de 0.5 cm. Solución de cloruro de azul de metileno:

En un frasco de 200 ml que contenga 52 ml de alcohol etílico al 95 % y 44 ml de tetracloroctano adicional lentamente 0.6 g de cloruro de azul de metileno certificado. Agitar hasta disolución. Dejar reposar en la obscuridad durante 12 a 24 horas a 4.4 a 7 .2º. Filtrar con papel filtro whatman No 42 ó equivalente. Adicionar al filtro 4 ml de ácido acético glacial. Guardar en un frasco limpio de color ámbar y con cierre hermético (Tapón de baquelita) y conservar en un lugar obscuro y fresco. No refrigerar.

Escurrir el exceso de colorante en un papel absorbente.2 Preparación del frotis.3 Lectura. limpiar el exterior de la pipeta con papel.1416 x r² 3.1. 3.3.0000 FM = -------------------3.2 Contar como grupos separados: . por medio de una asa doblada en ángulo recto. Extender rápidamente la muestra o la dilución correspondiente sobre la superficie marcada de 1 cm². 3. Aforar. 3.1. Identificar perfectamente los frotis. Introducirla lo suficiente para evitar la presencia de espuma. (FM) = Factor del microscopio 10.01 ml . 3.1 y 0. 3. Enjuagar 3 veces con agua destilada a 37 a 45°C Escurrir y secar. Secar los frotis sobre una superficie nivelada. 3. Aceite de inmersión. Secar perfectamente.3. Descargar 0.01 mm.1 Observar con el objetivo de inmersión y contar todo el grupo bacteriano que se encuentra en cada campo.1 Agua destilada. r = radio en milímetro Colocar los portaobjetos sobre las placas guía marcadas con áreas de 1 cm² Agitar la muestra vigorosamente (25 veces). Leer hasta la tercera cifra decimal (radio del campo en mm). Sumergir el frotis seco y fijado en el colorante (cloruro de azul de metileno) durante 2 minutos. Medir 0. Colocar la punta de la pipeta cerca del centro el área de 1 cm².• • 3.2 Usar la siguiente formula para calcular el factor del microscopio. PROCEDIMIENTO Calibración del microscopio. libre de polvo y fuera del alcance de insectos a 40 o 45°C durante 5 minutos.01 ml de muestra con una pipeta o jeringas calibradas.1 Medir el campo microscópico por medio de un portaobjetos micrométrico marcado en divisiones de 0.

000-3. 3.178 0.000. DIÁMETRO DEL CAMPO CUENTA POR ml ó g Menos de 300.5 Multiplicar el promedio de grupos por campo por el factor del factor del microscopio y por la inversa de la dilución . Informar: Cuenta microscópica directa de grupos bacterianos por gramo ó mililitro 5.2.1 Cualquier microorganismo o grupo de microorganismo (aparentemente de la misma especie) separados por una distancia igual o mayor que el doble del diámetro de la célula más pequeña del grupo. El siguiente cuadro puede servir de orientación para determinar el número de campos por observar en cada caso.4 Examinar el número mayor de campos cuando se trate de una muestra con escaso contenido bacteriano.3 El número de campos que se examinen dependen del factor microscópico y del grado de contaminación de la muestra: a mayor factor microscópico.146 4. BIBLIOGRAFÍA Técnicas para el muestreo y análisis microbiológico de alimentos.000 30 40 50 60 300. 3. se debe examinar mayor número de campos .206 0.3. 6.3. 3. Secretaría de Salubridad y Asistencia.000 20 20 20 30 Más de 3.3.160 0. 3.000 10 10 10 16 0. El producto anterior corresponde al número de grupos microbianos por mililitro ó gramos de producto. Dirección General de Investigación en Salud Pública.3. 1975.3.2 Los microorganismos de diferente morfología 3.3.5.2. CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES Esta Norma coincide totalmente con las recomendaciones hechas por el Comité Internacional sobre especificaciones microbiológicas para alimentos. .3 Las formas dipocóccicas de estreptococos.3.000.2.

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