6-12-2021 Informe final de

laboratorio
Fisiología microbiana
Tabla de contenido
Título................................................................................................................................................2
Resumen.....................................................................................................................................2
Información general:................................................................................................................2
Introducción...................................................................................................................................3
Coloración de Gram/ técnica desarrollada por Hans Gram (Tinción del 1 minuto). .3
Objetivos:........................................................................................................................................4
 General:...............................................................................................................................4
 Específicos:........................................................................................................................4
Plantear y planteamiento.............................................................................................................5
Materiales y equipos.................................................................................................................5
Procedimiento y resultado......................................................................................................6
 Tinción de Gram................................................................................................................6
 Observación microscópica.............................................................................................6
Informes:.........................................................................................................................................8
 Pre-informe:........................................................................................................................8
Informe final:............................................................................................................................10
Conclusión....................................................................................................................................11
Referencias bibliográficas........................................................................................................12
Título: Tinción de Gram

Resumen: En esta práctica se realizó la toma de muestra faríngea para realizar la

correcta tinción de Gram para la observación de bacterias y polimorfonucleares,
adquiriendo importancia que debemos de tener como futuros servidores de la
salud.

Información general:

Práctica Tinción de Gram

Primera práctica de laboratorio en la clase de fisiología microbiana en la
Universidad De Ciencias Empresariales UCEM. Para la observación de
polimorfonucleares y bacterias, que se realizó el día 30/11/2021 a las 1:00 pm,
realizado en laboratorio de microbiología.
Dirigida, supervisada y orientada por la LIC. Fátima Reyes.
Este informe se entrega el día 06 de diciembre del año en curso.

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Introducción
El reconocimiento de la morfología, forma de agrupación, características tintoriales
de determinadas estructuras (pared celular, flagelos, cápsulas etc.) y tamaño
puede ser posible utilizando los métodos de tinción. La tinción de Gram es una
herramienta de la Microbiología que puede ser aplicada, a la mayoría de muestras
biológicas (LCR, liquido peritoneal, liquido pleural, sangre, liquido articular,
material purulento, tejidos obtenidos de biopsia etc.) obtenidas de los pacientes
con patología infecciosa, con sepsis, meningoencefalitis bacteriana, neumonía de
la comunidad, neumonía nosocomial, osteomielitis, abscesos etc. La información
obtenida de la tinción de Gram es de gran ayuda para el diagnóstico y tratamiento
de los pacientes.

Coloración de Gram/ técnica desarrollada por Hans Gram (Tinción del 1

minuto)

La afinidad de las Gram positivas y Gram negativa de las bacterias depende de la

composición química de la pared celular y en parte de su estructura física es
necesario saber la composición de la pared celular.
Los colorantes utilizados en esta técnica son:
1. Cristal violeta o Violeta de Genciana (Colorante Primario)
2. Lugol, funciona como fijador del colorante inicial
3. Alcohol acetona, es un decolorante.
4. Safranina o Fucsina básica (Colorante Secundario)
Al observar al microscopio el frotis teñido con la tinción de Gram, podemos
observar bacterias teñidas en color azul o violeta designadas como bacterias
Gram Positivas, estas fijan el primer colorante (cristal violeta) y las teñidas de color
rosado designadas como Gram Negativas por sufrir decoloración al ser
decoloradas con alcohol acetona y fijar el colorante secundario (Safranina). Los
decolorantes orgánicos utilizados abren poros en la pared celular de las bacterias
Gram Negativas, por la formación de huecos amplios en la membrana externa de
estas bacterias, que está conformada principalmente por lipoproteínas y
lipopolisacaridos, permitiendo la salida del primer colorante.

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Objetivos:

 General:
Que los estudiantes conozcan la importancia de la aplicación de Tinciones en el
área de microbiología.

 Específicos:
Al finalizar la práctica los estudiantes serán capaces de:
1. Aplicar las técnicas de montaje de muestras biológicas en la preparación de
frotis.
2. Realizar las técnicas de tinción en frotis para la observación de las
características morfológicas y tintoriales de las bacterias Gram positivas y
negativas.
3. Explicar el fundamento científico de cada técnica empleada.

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Plantear y planteamiento

Materiales y equipos
Equipos:
 Puente de tinción
 Microscopios

Materiales:
 Láminas portaobjetos y cubreobjetos
 Solución salina en goteros
 Aplicador de madera con punta de algodón esteril
 Mecheros
 Lápiz graso
 Fósforos
 Papel lente
 Aceite de inmersion
 Papel toalla
 Pizetas con agua destilada
 Jabón líquido para manos

Reactivos:
 Set de coloración de Gram

Después de entregar algunos materiales en al docente y acomodar el área de

trabajo, el docente dio orientaciones para iniciar el laboratorio las cuales
consideran los siguientes puntos:
 Toma de muestra:

1. Se toma un hisopo de madera, y se le pide a la paciente que abra la

boca para tomar la muestra en la parte posterior faringe.

2. Luego se deposita la muestra en el porta objeto

3. Se espera que seque

4. Luego se pasa o reposa por pocos minutos en el mechero para fijar,

en este caso no había mechero y se improvisó poniendo la muestra
en una cocina eléctrica

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  Tinción de Gram

1. Cubra las láminas con solución de Cristal Violeta, durante 1 minuto.

2. Lavado de la lámina hasta que salga por completo el color.

3. Cubrimos las láminas con solución de Lugol durante un minuto.

4. Se lavan de nuevo con agua hasta que salga el color.

5. Colocamos el alcohol-acetona sobre la preparación, hasta que deje de

soltar color violeta (30 segundos), inmediatamente después lave con agua y
escurra.

6. Lo último que se agrega es la solución de Safranina durante 1 minuto para

posteriormente ser lavada con agua y escurrida, se deja secar.

La toma se leyó primero enfocando la muestra con el lente de menor aumento 4X,
continuando con 10X y 40X, continuando 100x para observar e identificar los
polimorfonucleares y bacterias.
En este caso no se ocupó aceite de inmersión pero se improvisó con agua.

Se realizó la el procedimiento orientado por el docente.

Procedimiento y resultado

 Tinción de Gram

Cristal violeta Lugol

1 minuto 1 minuto

 Observación
microscópica Alcohol Acetona Safranina
30 s-1 minuto 30 seg.
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La muestra se leyó con el enfoque de 100X usando una gota de agua para
sustituir el aceite de inmersión
En la observación de la muestra se identificó polimorfo nucleares y estreptococos

Observación al microscopio 100X

Estreptococos y polimorfonucleares

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Informes:

 Pre-informe:

1. Establezca la diferencia entre movilidad bacteriana verdadera y movimiento

browniano.
La movilidad bacteriana verdadera: es un proceso que tiene las bacteria
filogenéticamente diversas y no teniendo la utilización de flagelos.
Movimiento browniano: fenómeno de transporte aleatorio y se observan partículas
en un medio fluido.

2. Explique el fundamento de la Tinción de Gram de acuerdo a la estructura

de la pared celular bacteriana.
La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para
observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de
la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias
que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están
formadas por una pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y
una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al
microscopio aparecen incoloras.
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un
gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram,
dando un color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +.
La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo
de antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de
atravesar la pared bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o
negativa se seleccionará el antibiótico más eficaz.

3. Cuál es la función de cada uno de los colorantes utilizados en la Tinción

Gram.

 Cristal violeta o Violeta de Genciana (Colorante Primario)

 Lugol, funciona como fijador del colorante inicial
 Alcohol acetona, es un decolorante.
 Safranina o Fucsina básica (Colorante Secundario

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 4. Cuál es la importancia de la Tinción Gram para el diagnóstico médico.

La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo

de antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de
atravesar la pared bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o
negativa se seleccionará el antibiótico más eficaz.
También podemos decir que es una manera más rápida para tratar al paciente.

5. Elabore un dibujo coloreado de las diferentes morfología bacterianas y

resultados de la tinción Gram (+) y Gram (-)

Resultados de la tinción Gram (+) y

Gram (-)

Morfología bacteriana

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Informe final:
Para esto realizaran una integración de todos los resultados obtenidos en las
prácticas realizadas, incluyendo dibujos de lo observado al microscopio.

Observación al microscopio 100X

Estreptococos y polimorfonucleares

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Conclusión

1. Podemos concluir que el aprendizaje previo al laboratorio nos ayudó en

realización del mismo.
2. La tinción ayuda a determinar el tipo de antibiótico así como su eficacia. El
antibiótico de elección ha de ser capaz de atravesar la pared bacteriana, en
función de si la bacteriana es Gram positiva o negativa se seleccionará el
antibiótico más eficaz.
3. La adquisición de conocimiento de la toma de muestra.

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 Referencias bibliográficas

 Brooks Geo; Janet y Morse Stephen. Microbiología de Jawetz, Melnick y

Adelberg. 2005. 19 edición. Manual Moderno: México.
 Koneman, E; y col. Diagnóstico Microbiológico, texto y atlas color. 1999. 5ª.
Edición. Editorial Médica Panamericana: Buenos Aires, Argentina

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