INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

TINCIONES DIFERENCIALES Y SELECTIVAS PARA LAS BACTERIAS

PRESENTADO POR:
MARCELA CASTRO OVIEDO

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

GRUPO: 16A

DOCENTE:
MARÍA CECILIA LEÓN PEÑA

UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO

FACULTAD: EDUCACIÓN

PROGRAMA: LICENCIATURA EN BIOLOGÍA Y QUÍMICA

BARRANQUILLA – ATLÁNTICO

20 DE SEPTIEMBRE DE 2021
 INTRODUCCIÓN

Las tinciones son una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias
que usualmente se utilizan en la biología y la medicina para resaltar estructuras en
tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de
microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la
definición y examinar grandes cortes de tejido, poblaciones celulares o incluso para
resaltar orgánulos dentro de células individuales.
Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el
laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más
de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una
gran variedad de tinciones, que se han ido desarrollando para la detección de los
diferentes agentes infecciosos en los que se incluyen bacterias, parásitos y hongos.
La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial de muestras para
análisis bacteriológico, mientras que la tinción de esporas es usada para colorear
las estructuras de resistencia que forman algunos géneros bacterianos cuando se
encuentran en condiciones desfavorables; estas estructuras corresponden a una
forma de supervivencia. Hay técnicas tintoriales específicas de gran utilidad, como
la tinción de BAAR el cual es un método de tinción que permite un diagnóstico
rápido y presuntivo de infección por micobacterias. Las diferentes tinciones en el
laboratorio microbiológico tienen una utilidad fundamental para el diagnóstico y
tratamiento oportuno de múltiples patologías de etiología infecciosa.
 OBJETIVOS
Objetivo General

• Exponer las distintas tinciones diferenciales y selectivas para las bacterias

reconociendo los métodos, fundamentos, utilidades y procedimientos
principales en las distintas preparaciones de cada una de estas.

Objetivos específicos

• Introducir los fundamentos, utilidades y procedimientos aplicados a las

tinciones bacterianas para la observación de las principales estructuras.
• Distinguir las diferencias entre las preparaciones en fresco, diferenciales y
selectivas más utilizadas para el estudio microscópico de las bacterias.
• Desarrollar las metodologías de tinciones simples y compuestas aplicadas a
las bacterias reconociendo la funcionalidad y finalidad de cada una.
 MATERIALES Y EQUIPOS
o PRÁCTICA DE GRAM
• El mechero de Bunsen
• Microscopio
• Un cultivo
• Porta objetos
• Asa bacteriológica
• Cristal violeta
• Yodo
• Alcohol acetona
• Safranina
• Pipeta Pasteur
• Bandeja de coloración
• Agua destilada
o TINCIÓN DE ESPORAS
• Colorante verde de malaquita
• Safranina
• Mechero portátil o de gas líquido
• Una fruta podrida
• Agua destilada
• Microscopio
• Porta objetos
• Bandeja de coloración
o TINCIÓN (BAAR)
• En la placa de portaobjetos vamos a realizar un cuadrado de 2 por 2 en el
centro esto se realiza con un lápiz demográfico o algún marcador que sea
para vidrio
• Mechero de Bunsen
• Carbol fucsina
• Azul de metileno
• Alcohol ácido
• Mechero
• Microscopio
• Bandeja de coloración
• Agua destilada
• Hisopo esterilizado
 DESARROLLO
PRACTICA DE GRAM
1. Para empezar, se necesitará una esterilidad del ambiente, para lo cual vamos
a usar el mechero de Bunsen qué nos va a brindar una zona estéril de 20 cm
de diámetro.
2. Se procederá a esterilizar el asa bacteriológica con la ayuda del mechero
hasta que se vea al rojo vivo, seguido de eso dejamos que se enfríe.
3. Luego con el asa bacteriológica se tomará una muestra de una colonia
separada.
4. En el porta objetos hacemos un estirado no muy grueso, se deja a secar o
podemos ayudarnos con una parte del mechero para fijar la muestra (se pasa
lentamente de dos o tres veces por el fuego)
5. A continuación, se procederá a deslizar la tinción GRAM para lo cual vamos
a utilizar como colorante primario el cristal violeta (permitirá tener las
estructuras de la pared) y lo vamos a dejar por un minuto.
6. Transcurrido el tiempo se lavará con agua, luego se va a utilizar el yodo (este
va a teñir las grampositivas y va a adherir el color contra la pared).
7. Luego se lavará y se le agregará el alcohol acetona (ayudará a desteñir
permitiendo así que las GRAM negativas se destiñan el color y las
grampositivas continúen de color morado).
8. Se lavará con agua y pasaremos al colorante secundario que van a teñir de
color rosa las células GRAM negativas.
9. Se lavará con agua teniendo así la placa ya teñida y se escurre el exceso de
agua dejando que se seque (otra manera es que lo coloquemos frente del
fuego sin que haga contacto directamente con el).
10. Por último, ponemos dos gotas de aceite de inmersión en la muestra y se
procederá a colocarlo en el microscopio para así enfocarlo y ver lo que
obtenemos.
TINCIÓN DE ESPORAS
1. Para empezar, se esteriliza el asa bacteriana con el mechero y una vez al
rojo vivo se deja enfriar.
2. Luego se procederá a tomar la muestra de nuestra fruta prohibida y se
realizará el frotis en la placa, una vez que el frotis esté realizado vamos a
fijar la muestra pasándola ligeramente por el fuego de dos a tres veces.
3. Una vez la placa esté seca se procederá a realizar la tinción, para esto se
utilizará primero el verde de malaquita como colorante principal, colocando
gotas en la muestra.
4. Una vez realizado se va a flamear la placa de forma lenta sin llegar a hervir
el verde de malaquita esto se realiza durante 5 minutos (mantener el
mechero cerca de la bandeja decoloración para más comodidad).
5. Una vez pasados los 5 minutos de flameo se dejará enfriar la placa y lo se
lavará con agua.
6. Luego contra coloreamos con safranina al 0,5% por un minuto, pasado este
tiempo vamos a volver a limpiar la placa con agua y se dejará secar la placa
al aire.
7. Se le echa el aceite de inmersión y se procede a ver por el microscopio.
TINCIÓN (BAAR)
1. Vamos a utilizar el esputo de una muestra biológica con la ayuda de un
hisopo estéril.
2. Se extrae una cantidad necesaria de la muestra biológica y se colocará
en nuestro porta objeto.
3. Primero se cubrirá el frotis con carbón fucsina, luego lo pasamos
lentamente por la flama del mechero durante el tiempo que sea
necesario hasta que veamos la emanación de vapores y retiramos la
placa del fuego.
4. Luego lavaremos con agua hasta que el mordiente primario sea anulado
en el porta objeto.
5. Una vez escurrido el agua de la placa se le agregará alcohol ácido este
nos permitirá descolorar la primera tinción.
6. Después de 2 minutos se cubrirá la plaga con azul de metileno (este nos
permitirá colorear otra vez la placa).
7. Luego de 2 minutos se lavará nuevamente con agua hasta ahogar de
cierto modo la placa.
8. Una vez tenido la placa fijada se procederá a mirar por el microscopio
utilizando aceite de inmersión.
 CONCLUSIONES
Las tinciones utilizadas en el laboratorio de microbiología permiten el diagnóstico oportuno
y sugerente de los agentes infecciosos, por lo que juegan un papel importante en la decisión
del tratamiento inicial de las enfermedades infecciosas. Se debe practicar la tinción
adecuada de acuerdo con el agente infeccioso en sospecha y el tipo de muestra clínica.
Las tinciones son herramientas elementales, vigentes y de uso universal que coadyuvan al
diagnóstico microbiológico.

Como resultados pudimos apreciar las esporas que se tiñeron de color verde, en
este caso se denomina endosporas ya que se encuentra dentro de la bacteria, en
el caso contrario sería exosporas. La parte rosas que podemos observar en las
prácticas es la safranina, la cuál es el colorante secundario que pinta la célula
vegetativa. Para terminar las endosporas se puede clasificar según la posición que
tengan en la célula, podemos encontrar tres tipos: Central, subterminal y terminal.
Como ejemplo de las bacterias con endosporas terminales incluyen el Clostridium
tetani, el cuál es el patógeno qué causa el tétano, un ejemplo de bacteria con
endosporas centrales sería el Bacillus cereus y con endosporas subterminales un
ejemplo sería el bacillus subtilis.
 BIBLIOGRAFÍA

• Pablo Rayo, Andrés Rosero, Andrés Cevallos. Tinciones diferenciales y

selectivas para las bacterias. Laboratorio clínico.
https://www.youtube.com/watch?v=Kda-98QHalU
• Roberto C. Gonzales, Briseida Cuevas, Manuel Sanches. 2020. Las tinciones
en el laboratorio de Microbiología. Universidad Nacional autónoma de
México.
https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/publicaciones/libros/cbiologicas/libros/Tinciones.pdf
• Luis López, Melissa Durán, Claudia Castro, Silvestre Ortega, Guillermo
Cerón, Rafael Cendejas. 2014. Las tinciones básicas en el laboratorio de
microbiología. https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf