PRACTICA N° 1

PROCEDIMIENTOS BÁSICOS UTILIZADOS EN EL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGÍA

Esta práctica ha sido diseñada para identificar los procedimientos

básicos utilizados en el laboratorio de Microbiología

I OBJETIVO GENERAL

Identificar las técnicas básicas que se utilizan en el laboratorio de

Microbiología

II OBJETIVOS ESPECIFICOS

Al, finalizar la práctica el o la estudiante será capaz de:

- Utilizar adecuadamente un desinfectante en superficies de trabajo.

- Encender un mechero utilizado en laboratorio de Microbiología

- Esterilizar el asa bacteriológica

- Inocular un medio cultivo líquido

- Identificar la base y cubierta de la caja de Petri

- Inocular un medio de cultivo solido a partir de un medio de cultivo

líquido (Método de Estriado)

- Identificar un medio inoculado

- Incubar los medios de cultivos en forma adecuada.

- Reconocer la importancia de un frotis bacteriano.

III PRESENTACION DE MATERIAL AUDIO VISUAL

Se presentara una serie de imágenes que contienen la práctica de este

día y que se aplicara en el procedimiento de laboratorio con fines
didácticos demostrativos.
IV MATERIALES Y EQUIPOS (por cada dos alumnos)

• Mechero
• Esponja
• Tubo con solución Salina Estéril 0.85%
• Tubo con caldo nutritivo
• Placas con Agar Simple
• Asas Bacteriológicas
• Laminas portaobjetos 3 x 1”
• Frasco con desinfectante (Fenol al 5%) por lado de mesa.

MATERIALES PARA EL DOCENTE

• Placas con Agar Simple

• Tubo con caldo nutritivo
• Placa con Tripticasa Soya Agar (TSA)
• Caldo Nutritivo inoculado con Bacillus subtilis
• Laminas portaobjetos 3 x 1”
• Cañón, CPU y Teclado

V PROCEDIMIENTOS

A continuación el Docente hará una demostración de cada uno de los

objetivos específicos. Además se indicara las medidas de bioseguridad
que deben de cumplir cuando se trabaja en un laboratorio de
Microbiología.

GUIA A SEGUIR CON SU DOCENTE:

1. Como usar el desinfectante en sus mesas de trabajo.

2. Como encender el mechero.

3. Como esterilizar el asa bacteriológica

4. Como inocular un medio de cultivo líquido

5. Identificar base y cubierta en las placas de Petri

6. Como inocular un medio de cultivo sólido a partir de un líquido

(siembra en estrías)

7. Como manipular e identificar un medio inoculado.

8. Como incubar los medios de cultivo inoculados.

9. Como hacer un frotis a partir de un medio líquido

10. Como hacer un frotis a partir de un medio sólido.

A. ESTERILIZACION DEL ASA BACTERIOLOGICA

El asa bacteriológica es un instrumento extraordinariamente sencillo,

pero de gran valor en el trabajo microbiológico.

Consiste en un alambre delgado de platino o de cobre que rápidamente

se pone incandescente al colocarlo en la parte en la parte mas caliente
de la llama de un mechero de Bunsen (parte superior de la llama color
azul claro) Igualmente se enfría con rapidez al retirarlo de la llama.

Cualquier Microorganismo vivo que se encuentre en el asa será

incinerado en pocos segundos, quedando el asa estéril y lista para
utilizarse en los diferentes procedimientos bacteriológicos.

1- FLAMEAR primero la punta del ASA

introduciéndola en el centro de la
llama.

2- Esperar que la parte en contacto

con la llama externa se ponga al rojo
vivo.

3- Exponer el resto a la llama externa

hasta que se ponga al rojo vivo.
 B. TECNICA DE PREPARACION DE UN FROTIS DE BACTERIAS A
PARTIR DE UN MEDIO SÓLIDO.

• Con el asa previamente esterilizada deposite sobre el portaobjetos

una gota de solución salina al 0.85% estéril.

• Esterilice de nuevo el asa bacteriológica y déjela enfriar cerca del

área del mechero.

• Con el asa ya fría tome una pequeña porción de una colonia y

homogenice en la gota de solución salina del portaobjetos.

• Deje secar el frotis al aire.

• Fije el frotis, pasándolo ligeramente 2 o 3 veces por la llama del

mechero.
 PRACTICA # 2
TECNICAS DE LABORATORIO PARA LA VISUALIZACION DE
LAS BACTERIAS

Las bacterias cuando se observan al Microscopio de Luz no tienen

coloración. Para poder definir la morfología bacteriana hay necesidad de
usar métodos de TINCION. Las tinciones de rutina permiten definir la
forma, el tamaño y algunas estructuras importantes.

Los métodos de tinción se clasifican en:

a. Tinciones Simples (azul de metileno)

b. Diferenciales (tinción de Gram)

c. Tinciones especiales (de esporas, cápsulas y flagelos)

Para el estudio de las bacterias, también se utilizan los medios de cultivo,

los cuales contienen nutrientes esenciales y minerales, así como un pH
adecuado y otras sustancias necesarias para que las bacterias se
reproduzcan y crezcan.

Los Medios de Cultivo pueden ser:

• Medios sólidos

• Medios Semisólidos

• Líquidos o caldos.

Los medios sólidos permiten que el crecimiento bacteriano, se observe en

forma de agrupamientos llamados colonias que en los medios líquidos el
crecimiento se muestra como turbidez o no turbidez.

Los medios sólidos adquieren su consistencia por medio de la utilización

de una sustancia llamada AGAR, que es un polisacárido sin ramificaciones
obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los
géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria, entre otros.
La concentración de agar que se utiliza es de 1.5%.

Los medios de cultivo son imprescindibles en el estudio de los

microorganismos, ya sea con fines de investigación o de diagnóstico de
laboratorio, en general, nos permiten una identificación presuntiva de la
especie bacteriana que se estudie.

COLORACION DE GRAM.

• Con cada una de las bacterias proporcionadas haga un frotis y fije

al calor, colóquelo en la bandeja de coloración.
• Cubra la superficie del frotis con el colorante CRISTAL VIOLETA y
déjelo reposar por un minuto.
• Lave suavemente la lámina con agua de chorro y deje escurrir.
• Depositar sobre la lámina solución de LUGOL para GRAM y deje
actuar por un minuto.
• Lave con agua de chorro y escurra rápidamente.
• Decolorar con ALCOHOL ACETONA, goteando suavemente sobre
la lámina inclinada. NO DECOLORAR DEMASIADO.
• Lave con agua de chorro y deje escurrir.
• Cubra el frotis con solución de SAFRANINA al 0.5% por 30
segundos.
• Lave con agua de chorro
• Deje secar la lámina poniéndola en posición vertical.
• Observar al microscopio con objetivo de inmersión (100X)
• Esquematice la morfología de los microorganismos
proporcionados.
TABLA Nº 2

Staphylococcus aureus Bacillus subtillis Klebsiella sp.

- Observar las demostraciones que están enfocadas en los diferentes
Microscopios y luego llenaran los cuadros que aparecen a continuación:

MORFOLOGIA Y AGRUPACION BACTERIANA

Morfología Bacteriana
Agrupación Bacteriana

TABLA 3

MORFOLOGIA – AGRUPACIÓN
III DISCUSIÓN

¿Qué es un medio de cultivo?

¿Qué es el AGAR?

¿Qué es un medio sintético?

¿Qué diferencia hay entre una coloración simple y una compuesta?

¿Por qué utilizamos la Técnica de coloración de GRAM?

¿Cuál es el fundamento de la Técnica de coloración de GRAM?

¿Cuál es la aplicación de la técnica anterior en la clínica humana?

¿Qué es una espora bacteriana?

¿Qué importancia tiene la espora bacteriana en la transmisión de

enfermedades?

¿Por qué es importante la capsula bacteriana?

IV BIBLIOGRAFIA

Jawet 2, Melnick y Andelberg. Microbiología Médica 25 ª Ed. Mc Graw

Hill. Interam. Editores.seccion I. 2011