Prácticas de biología CELULAR Consideraciones de seguridad:

C A R R E R A D E I N G ENI ER Í A B I O QU Í M I CA Tenga cuidado con el material de vidrio y

los reactivos químicos. Utilice guantes y
gafas mientras trabaja. No inhale los
PRÁCTICA 5. colorantes. Cuando termine, coloque todo el
material en su lugar y deje limpia su área
de trabajo. Tenga cuidado con el fuego.
TINCION DE ORGANELOS

Introducción
El tamaño de los microorganismos impide detectarlos a simple vista, por lo que es esencial el uso del
microscopio. Para que un objeto pueda ser percibido a través del microscopio, este debe poseer cierto
grado de contraste con el medio circundante. Para aumentar el contraste de los microorganismos y lograr
una mejor observación de los mismos, se emplean diferentes preparaciones y técnicas de tinción.
Las preparaciones pueden ser húmedas o frotes fijos, las primeras se utilizan para observar movilidad y en
ambos casos la adición de colorantes, al aumentar el contraste, permite una mejor observación. Por ejemplo
en el estudio microscópico de los protozoos se utilizan colorantes vitales y supravitales que tiñen ciertas
estructuras como se expone en el cuadro 1.
Los colorantes vitales permiten observar movilidad, así como algunos de sus organelos o inclusiones teñidas,
sin daño aparente; estos se preparan en soluciones acuosas o alcohólicas muy diluidas. En tanto que los
colorantes supravitales, aun cuando tienen la ventaja de hacer más evidentes algunos organelos, presentan
el inconveniente de afectar la viabilidad de los organismos. Estos colorantes varían en su composición y
consisten en mezclas de reactivos que incluyen el colorante, ácidos, aldehídos, alcoholes y agua. Los primeros
se aplican directamente en la muestra, en tanto que para los supravitales se recomienda aplicar una
pequeña cantidad del colorante al portaobjetos y dejar secar y posteriormente colocar la muestra. Para
que la aplicación del colorante sea uniforme, se recomienda extenderlo con la ayud a de otro portaobjetos.
Objetivos
Describir las características morfológicas y de locomoción de microorganismos. Realizar frotis fijos y tinciones
simples e identificar y describir las características morfológicas y de agrupación.
Material y método
Preparaciones húmedas
Muestras: Agua de charco
Material por equipo: Microscopio Pipetas Pasteur con bulbo, Solución de carboximetilcelulosa al 2.0 %
Reactivos y colorantes: azul de metileno, verde de metilo o de Janus, rojo neutro, nigrosina al 10 %, solución
de Noland, reactivo de Ringers, lugol.
Material que deben tener los alumnos: Mecheros Asas bacteriológicas Portaobjetos Cubreobjetos Charola
para tinción Puente de vidrio Paños de cocina Palillos Vaselina sólida.
Lavar y desengrasar los portaobjetos y cubreobjetos. Para ello emplear jabón líquido y agua; enjuagar
varias veces con alcohol al 95%, ponerlos a secar al aire a temperatura ambiente y flamearlos de 2 a 3
veces.
Preparaciones húmedas:
1. Con una pipeta Pasteur colocar en un portaobjetos una gota de la muestra (agua de charco) en el centro
del portaobjetos, cubrir la gota con un cubreobjetos. 2. Observar al microscopio con los objetivos de 10x
y 40x con baja intensidad de luz para conseguir el contraste con las células. 3. Esquematizar la morfología
y movimiento de los microorganismos observados.
Uso de colorantes vitales
 Prácticas de biología CELULAR

1. Colocar, con una Pipeta Pasteur, una gota de muestra en un portaobjetos y agregar una pequeña gota
de un colorante vital (rojo neutro, azul de metileno, verde de Janus). 2. Colocar un cubreobjetos sobre la
muestra. 3. Observar al microscopio, utilizando los objetivos de 10X y 40X. 4. Esquematizar y describir la
morfología y movimiento de los microorganismos, así como de los organelos observados.
Tinción simple
Muestras: Cultivos puros de las siguientes bacterias: Escherichia coli y Staphylococcus aureus
Material por equipo: Microscopio Frasco gotero con azul de metileno, cristal violeta o safranina
Material que deben tener los alumnos: Mecheros Portaobjetos Charola para tinción Puente de vidrio
Piseta Pinzas de madera para ropa Paño limpio de algodón Papel seda Frasco con una solución de
sanitizante para desechar preparaciones
1. Cubrir el frote fijo con el colorante básico (azul de metileno, safranina o cristal violeta) y dejar actuar
durante 1 minuto.
2. Escurrir el colorante y lavar la preparación con el mínimo de agua, para ello inclinar el portaobjetos y
en la parte superior aplicar el agua con una piseta de manera que resbale sobre el frote. 3. Colocar el
portaobjetos inclinado sobre una toalla de papel absorbente y dejar secar a temperatura ambiente.
4. Observar al microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100x. 5. Esquematizar sus observaciones y
describir las características de los microorganismos observados empleando los términos adecuados respecto
a la morfología, agrupación y estructuras; ejemplos: a) bacilos largos con extremos redondos, b) cocos
agrupados en cadenas denominadas estreptococos.
Resultados
Dibuje todo lo observado, indique las partes y discuta los resultados a partir de la comparaci ón con la
literatura.

Página 1