UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

LICENCIADO EN QUÍMICA INDUSTRIAL (LQI).

ASIGNATURA: BIOQUIMICA MICROBIANA

DOCENTE: Dra. Adriana Karina Leura Vicencio

EVIDENCIA 2
REPORTE #5 “RECUENTO BACTERIANO EN PLACA”

NOMBRES: Kathia Montserrat Garza Ríos - 1915855

GRUPO: 001

San Nicolás de los Garza, Nuevo León, a viernes 15 de mayo de 2023.

Resultados
Recuento de colonias:
Se realizaron 2 siembras por las ultimas 3 diluciones, quedando 6 cajas Petri en total.
Caja Petri (1) dilución 10-3= 21 colonias
Caja Petri (2) dilución 10-3= 28 colonias
Caja Petri (1) dilución 10-4= 191 colonias
Caja Petri (2) dilución 10-4=>300 colonias
Caja Petri (1) dilución 10-5= 137 colonias
Caja Petri (2) dilución 10-5= 49 colonias
Cálculos del recuento en placa:
UFC/mL=(número de colonias contadas)/(volumen de la muestra sembrada)(factor de
dilución)
Dado que en cada paso se toma 1 mL de muestra original y se diluye en un total de 10 mL
(1 mL de muestra + 9 mL de solución), el factor de dilución en cada paso es 1:10. Para
calcular el factor de dilución total, debemos multiplicar los factores de dilución de cada
paso:
Factor de dilución total = (1:10) * (1:10) * (1:10) * (1:10) * (1:10) = 1:10^5
Por lo tanto, el factor de dilución total en este caso sería de 1:100,000.
Este factor de dilución indica que la muestra original se diluyó 100,000 veces en relación a
la muestra original.
Caja Petri (1) dilución 10-3= 21 colonias
UFC/mL=(21 colonias)/(1mL)(100,000)=0.00021 UFC/mL
Caja Petri (2) dilución 10-3= 28 colonias
UFC/mL=(28 colonias)/(1mL)(100,000)=0.00028 UFC/mL
Caja Petri (1) dilución 10-4= 191 colonias
UFC/mL=(191 colonias)/(1mL)(100,000)=0.0191 UFC/mL
*El conteo con mas de 300 colonias no es viable para este cálculo*
Caja Petri (1) dilución 10-5= 137 colonias
UFC/mL=(137 colonias)/(1mL)(100,000)=0.00137 UFC/mL
Caja Petri (2) dilución 10-5= 49 colonias
UFC/mL=(49) colonias)/(1mL)(100,000)=0.00049 UFC/mL
Promedio=0.00429 unidades formadoras de colonias por mililitro.

Discusión
-Se realizaron 5 diluciones, cada una tomando 1 mL de muestra y diluyéndolo en ellas entre
sí, así mismo, tomando 1 mL entre estas, diluyéndose de 9 mL de solución salina con 1 mL
de muestra (E. coli).
-Al momento de dejar los tubos en la mesa, se notó que uno de ellos había derramado algo
de su volumen inicial antes de diluir, lo cual pudo afectar los cálculos. No se supo
exactamente cuánto se derramó, esto claramente también afectó a las demás
concentraciones.
-Cuando se estuvo realizando las diluciones, creímos confundir las diluciones, pero
afortunadamente no fue así.
-En el momento de realizar los estriados, no se tuvo ninguna dificultad, no hubo ruptura de
agar.
-Se observo el crecimiento de las colonias, afortunadamente se obtuvo un crecimiento en
todas las cajas petri, casi todas con números de colonias favorables, estas entre 30 y 300,
solamente se obtuvo una no favorable con más de 300 colonias.

Conclusión

En conclusión, el recuento en placas y el cálculo de Unidades Formadoras de Colonias

(UFC) desempeñan un papel fundamental en la microbiología. Estas técnicas permiten
evaluar la carga microbiana, controlar la calidad y seguridad de productos, investigar la
eficacia de procesos y estudiar la viabilidad de microorganismos en diferentes entornos. El
recuento en placas proporciona una estimación de la cantidad de microorganismos viables
presentes en una muestra, mientras que el cálculo de UFC/ml ofrece una medida
cuantitativa de la concentración de microorganismos en la muestra original.
Es importante tener en cuenta que el recuento en placas y el cálculo de UFC/ml son
técnicas basadas en el conteo de colonias en placas de agar, y pueden estar sujetas a
limitaciones y variaciones. Sin embargo, siguen siendo herramientas valiosas para evaluar
la presencia y concentración de microorganismos viables en diferentes muestras.

Cuestionario

1- ¿Cuál es la importancia de determinar el numero de microorganismos en una

muestra?
Determinar el número de microorganismos en una muestra es esencial para evaluar la
seguridad, calidad y eficacia de productos y procesos, así como para proteger la salud
pública. Brinda información valiosa para tomar decisiones informadas en términos de
control microbiano y garantizar la inocuidad de los alimentos, productos y entornos en los
que los microorganismos pueden representar un riesgo.
2- Mencione y explique que otras técnicas se utilizan para determinar el número de
microorganismos
Recuento de células por citometría de flujo:
Se basa en el paso de las células a través de un flujo laminar donde son detectadas y
contadas por láseres. Se pueden marcar las células con fluorocromos específicos para
identificar y contar diferentes poblaciones microbianas.
Métodos basados en turbidez:
La turbidez aumenta a medida que el número de microorganismos en la muestra aumenta.
Se utilizan espectrofotómetros o turbidímetros para medir la absorbancia de luz a una
longitud de onda específica y se correlaciona con la densidad celular.
PCR en tiempo real:
La PCR en tiempo real es una técnica molecular que permite la amplificación y detección
específica de secuencias de ADN de microorganismos. Utiliza sondas fluorescentes para
detectar la acumulación de producto amplificado en tiempo real, lo que permite cuantificar
el número de microorganismos presentes en una muestra.
Métodos de conteo directo con microscopía:
Estos métodos implican la visualización directa de microorganismos bajo un microscopio.
Se pueden utilizar diferentes técnicas de tinción para resaltar los microorganismos y
contarlos visualmente. Estos métodos son útiles para microorganismos que no pueden
crecer en medios de cultivo convencionales.
Métodos de fluorescencia:
Estos métodos aprovechan la emisión de fluorescencia de los microorganismos para
cuantificar su número en una muestra. Se pueden utilizar colorantes fluorescentes
específicos para teñir los microorganismos y luego contarlos utilizando citómetros de flujo
o microscopios de fluorescencia.

3- ¿Qué ventajas y desventajas tiene el método de recuento en placa?

Ventajas:
-Cuantificación de microorganismos viables
-Especificidad y selectividad
-Fácil interpretación y visualización
Desventajas:
-Tiempo y mano de obra intensivos
-Limitaciones en la detección
-No es aplicable para microorganismos no cultivables
4- ¿Por qué es necesario realizar la prueba por triplicado?
Realizar la prueba por triplicado es esencial para obtener resultados más precisos, evaluar la
reproducibilidad, detectar errores experimentales, evaluar la significancia estadística y
superar la variabilidad biológica. Es una práctica estándar en la investigación científica y
contribuye a la robustez y confiabilidad de los resultados obtenidos.
5- ¿Pueden los hongos y levaduras se cuantificados mediante recuento en placa?
Justifique su respuesta.
Sí, los hongos y las levaduras pueden ser cuantificados mediante recuento en placa. Sin
embargo, es importante utilizar medios de cultivo adecuados, proporcionar las condiciones
de incubación correctas y considerar las limitaciones en la diferenciación y la eficiencia de
recuperación. En algunos casos, pueden ser necesarias técnicas adicionales para obtener un
recuento más preciso.
6- ¿A qué cree que se deba que en ocasiones no se obtienen el mismo número de
colonias, o números muy cercanos entre si en las placas hechas por triplicado de una
misma dilución?
Error experimental:
Pequeñas variaciones en el proceso de siembra, como la dispersión de la muestra o la
distribución desigual de las colonias, pueden influir en los resultados. Esto puede ser
causado por errores humanos o técnicos durante la realización de las placas.
Variabilidad biológica:
Existe variabilidad intrínseca en la distribución de los microorganismos en la muestra. Al
realizar las diluciones y sembrar las placas, es posible que se encuentren diferentes
subconjuntos de microorganismos viables en cada placa, lo que puede resultar en
diferencias en el número de colonias.
Factores ambientales:
Pequeñas variaciones en las condiciones de incubación, como la temperatura o la humedad,
pueden afectar el crecimiento de los microorganismos en las placas. Estas variaciones
pueden conducir a diferencias en la tasa de crecimiento y, por lo tanto, en el número de
colonias observadas.
Error de conteo:
El conteo de colonias es una tarea subjetiva que puede estar sujeta a errores humanos.
Diferentes observadores pueden tener interpretaciones ligeramente diferentes sobre qué
considerar como una colonia individual, lo que puede llevar a variaciones en los resultados.
7- Mencione la importancia de esta técnica en los procedimientos llevados a cabo en
laboratorios clínicos y de investigación.
El recuento en placa es una técnica importante en laboratorios clínicos e investigaciones, ya
que permite cuantificar el número de microorganismos presentes en una muestra. Esto es
fundamental para diagnosticar infecciones, evaluar la eficacia de agentes antimicrobianos y
estudiar la microbiota en diferentes entornos.

Bibliografía:

Del Villar, A., Cerrón, J. J., García-Peña, C., Querol, M. L., & Valls, C. (2014).
Fundamentos de microbiología y parasitología. Elsevier.
Benson, H. J., & Hodges, R. S. (2009). Manual de microbiología. Pearson Educación.
Lammert, J. M., & Pierce, B. E. (2007). Técnicas de laboratorio en microbiología. Cengage
Learning.
Castillo Gutiérrez, F. J., García Hierro, P. M., & Martínez de Victoria Muñoz, E. (2014).
Microbiología de los alimentos. Pearson Educación.
Sociedad Española de Microbiología (SEM). (s.f.). Página principal.
https://www.semicrobiologia.org/
International Journal of Sterilization (IRJ). (s.f.). Homepage. https://www.irjournal.org/