See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/361449495

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS RECUENTO DE LOS MICROORGANISMOS

AEROBIOS MESOFILOS

Research · June 2022

CITATIONS READS

0 4,032

2 authors:

Estiven Amazará-García Yeison Quintero-Lidueñez

Universidad Francisco de Paula Santander Universidad Francisco de Paula Santander
2 PUBLICATIONS   0 CITATIONS    2 PUBLICATIONS   0 CITATIONS   

SEE PROFILE SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

SISTEMA ADMINISTRATIVO “YOGOXOTIC” View project

All content following this page was uploaded by Estiven Amazará-García on 21 June 2022.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 Laboratorio N° 8 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
RECUENTO DE LOS MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS

Amazará, E, (711042); Tarazona, G, (711046); Quintero, Y, (711052); Vacca, Y, (711073) & Vaca, D,
(711056), Programa Zootecnia, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Francisco de Paula Santander,
Vía Acolsure, sede Algodonal, Ocaña, Colombia, 2022

RESUMEN

Para empezar, preparamos la muestra pesando 10 g de leche de cabra, luego la agregamos en un frasco de
dilución con 90 ml de solución salina estéril o agua peptonada y agitamos para homogenizar la muestra.
Esta dilución correspondió a 10-1. Así, se tomaron 1 ml de la dilución 10-1 y se trasladaron a un tubo que
contenía 9.0 ml de agua peptonada y tomo el número 10-2. Dicha operación se repitió para preparar tantas
diluciones decimales como fuese necesario; 10-3 , 10-4 , hasta 10-5. A partir de las diluciones, depositamos
con una pipeta, 1 ml de cada dilución en las cajas de Petri, añadimos a cada caja de Petri unos 15 ml del
medio de cultivo previamente preparado y atemperado (45 a 47 ° C), mezclamos el medio sobre la mesa de
trabajo, haciendo movimientos circulares con la placa, a favor y en contra del sentido de las agujas del reloj,
evitando al mismo tiempo que el medio impregne la tapa. Dejamos solidificar el agar de las placas sobre
una superficie horizontal y cuando se ha solidificado perfectamente introdujimos en la incubadora, evitando
que se apilaran en exceso y que entraran en contacto con sus paredes; las incubamos a 35°C por 24 a 48
horas y, por último, después de transcurridas las 48 horas estudiamos una muestra del agar 10-5 mediante
la tinción de gram.
Palabras claves: Muestra, dilución, incubadora, agar
ABSTRACT
To begin, we prepared the sample by weighing 10 g of goat milk, then added it to a dilution bottle with 90
ml of sterile saline solution or pepton water and shaken to homogenize the sample. This dilution
corresponded to 10-1. Thus, 1 ml of the 10-1 dilution was taken and transferred to a tube containing 9.0 ml
of pepton water and took the number 10-2. This operation was repeated to prepare as many decimal dilutions
as necessary; 10-3, 10-4 , up to 10-5 . From the dilutions, we deposited with a pipette, 1 ml of each dilution
in the Petri dishes, we added to each Petri dish about 15 ml of the culture medium previously prepared and
tempered (45 to 47 ° C), we mixed the medium on the work table, making circular movements with the
plate, clockwise and counterclockwise, avoiding at the same time that the medium impregnates the lid. We
let the agar of the plates solidify on a horizontal surface and when it has solidified perfectly, we introduced
it into the incubator, avoiding excessive piling up and contact with its walls; we incubated them at 35°C for
24 to 48 hours and, finally, after 48 hours, we studied a sample of the 10-5 agar by gram staining.
Keywords: Sample, Dilution, Incubator, Agar
INTRODUCCIÓN
Los aerobios mesófilos son un grupo de
microorganismos capaces de desarrollarse en
presencia de oxígeno a una temperatura
comprendida entre 20°C y 45°C con una óptima
entre 30oC y 40oC. El recuento de estos
microorganismos, en condiciones establecidas,
estima la microflora total sin especificar los tipos
que se encuentran. Los alimentos son productos
con poblaciones microbianas diversas, desde un
escaso número en la mayoría de los preparados, a
cifras considerablemente significativas en
alimentos fermentados. En ocasiones pueden ser
conducir agentes microbianos patógenos o sus
toxinas, con riesgo para la salud del consumidor.
El examen microbiológico de alimentos está
basado, principalmente, en tres aspectos
importantes: El muestreo, la elección de técnica
analítica y la interpretación de los resultados
analíticos. Por otro lado, recuento en placa es la
técnica comúnmente utilizada cuando se requiere
investigar el contenido de microorganismos
viables en un alimento. Esta iniciativa refleja la
calidad sanitaria de los productos analizados
indicando, además de las condiciones higiénicas
de la materia prima, la forma como fueron
manipulados durante su elaboración. Un recuento
bajo de aerobios mesófilos no implica o no
asegura la ausencia de patógenos o toxinas, de la
misma manera un recuento elevado no significa
presencia de flora patógena. Ahora bien, en los
alimentos obtenidos por fermentación, no son
recomendables recuentos elevados.
MATERIALES
1 matraz Erlenmeyer de 500 ml, 5 Pipetas estéril
de 1ml, 1 Pipeta 10 ml, 4 Cajas Petri de vidrio o
desechables (estériles), 1 Probeta 100 ml, 1 Vaso
de precipitado 500 ml, 5 Tubos con tapa rosca, 1
Agitador de vidrio, 1 Piceta con agua destilada, 1
Balanza analítica, 1 Asa microbiológica, 1
Incubadora Portaobjetos y cubreobjetos, 1
Refrigerador Guantes Escobillones, fibra,
detergente y toallas de papel secante, 1Marcador
sharpie, Mechero Fisher, Microscopio óptico, 1
Cuenta-colonias, Cinta adhesiva protectora, Agar
Plate Count, Agua Peptonada Tamponada y
Muestra de leche.
METODOLOGIA
Primero que todo se inició con el proceso de
Cuenta total estándar de microorganismos
mesófilos aerobios
1. Preparación de la muestra: Diluciones.
a) Dilución primaria: Pesar 10 g del alimento en
condiciones asépticas. Transferir a un vaso de
licuadora previamente lavado y desinfectado con
alcohol, agregar 90 ml de solución salina estéril
(0.9 % p/v) y licuar por un minuto. Por ende
procede a agitar vigorosamente para homogenizar
la muestra. Esta dilución corresponderá a 10-1.
b) Diluciones decimales: Se tomará 0.1 ml de la
dilución 10-1 y se transferirán a un tubo que
contiene 9.0 ml de solución salina estéril (10-2).
Esta operación se repetirá para preparar
diluciones como sea necesario (10-3, 10-4, 10-5).
2. Inoculación por la técnica de extensión
superficial en placa
Inocular 0.1 ml de cada dilución en placas de agar
de cuenta estándar, extendiendo
homogéneamente sobre la superficie con una
varilla de vidrio en ángulo previamente
esterilizada, luego invertir las cajas e Incubar a
35°C por 24 a 48 h.
3. Interpretación de los resultados de la cuenta
total estándar
Completada la incubación seleccionar las placas
que contengan entre 30 y 300 colonias.
Contar todas las colonias desarrolladas en las
placas seleccionadas. Posteriormente utilizar el
microscopio para resolver los casos en los que no
se pueden distinguir las colonias de las pequeñas
partículas de alimento. Determinar las unidades
formadoras de colonia (UFC) donde se realiza de
acuerdo a la ecuación
Seguidamente se procede a la Prueba presuntiva
para coliformes e interpretación de los resultados
del número más probable y consecutivamente la
prueba confirmativa de coliformes fecal
RESULTADOS Y DISCUSION
A la hora de hacer el conteo de las colonias, en el
cuenta colonias este nos dio incontables con todos
los cultivos.
Fig. 1 Conteo de colonias
Fuente: Amazará E (2022)
Para finalizar se tomo una pequeña muestra de
una colonia y a esta se le hizo tinción de Gram y
al llevar esta al microscopio y se observo
bacterias Gram positivas con forma de bacilos.
Fig. 2 Tinción de Gram en el microscopio
Fuente: Amazará E (2022)
CONCLUSIONES
El conteo microbiológico de colonias fue
imposible de hacer en todas las diluciones de
leche que se tenían, debido a que la presencia de
estas era muy numerosa.
Es necesario que se mejoren las prácticas de
manejo y ordeño en los animales para así evitar la
contaminación de la leche y disminuir la
presencia de patógenos en la misma.
Se considera pertinente aumentar el apoyo
técnico para la mejora de estos procesos, ya que
la producción artesanal de leche es un volumen
importante de la producción y el consumo del
país. Los resultados obtenidos son sólo una
muestra de lo que ocurre en varias unidades de
producción de leche en el país.
La baja eficiencia higiénica constatada en las
instalaciones repercute de manera significativa en
la calidad higiénica de la leche; en este sentido los
ordeñadores no poseen ninguna capacitación en
cuanto a prácticas y hábitos higiénicos, es posible
que no se laven las manos en forma minuciosa;
además, en la rutina de ordeño también es posible
que no realicen el respectivo lavado y secado de
los pezones de los animales.
BIBLIOGRAFIAS
• Arana, I; Orruño, M; & Barcina, I.
Departamento Inmunología, Microbiología y
Parasitología Universidad del País
Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea.
• Madigan, M. T., Martinko, J. M., & Parker, J.
(Ed. 14). (2015). Biología de los
microorganismos: Brock. Madrid, España:
Pearson Educación.
• Norma Oficial Mexicana NOM-242-SSA1-
2009: Productos y servicios. Facultad de
química farmacéutica biológica manual de
microbiología de alimentos. Especificaciones
sanitarias y métodos de prueba
CONSULTA.
1 ¿Por qué se cuentan entre 30 y 300 colonias en
el método de cuenta total estándar y que otro
método de cuantificación en placa de
microorganismos existe?
Rta: Con el objetivo de disminuir el error de la
medida.
Otros métodos de cuantificación son:
Filtración por membrana: En este método el
recuento se realiza por filtración de un volumen
de la muestra a través de un filtro de membrana
de tamaño adecuado para retener las bacterias
(0.22-0.45 µm). Una vez filtrada la muestra, el
filtro se coloca sobre un medio de cultivo sólido
y se incuba. El recuento del número de colonias
formadas sobre el filtro determina el número total
de bacterias en la muestra filtrada. Es un método
útil cuando el número de bacterias presentes en la
muestra es muy bajo. Se utiliza con frecuencia
para determinar el número de bacterias en agua.
Sembrado por vertido en placa: Consiste en
añadir medio de cultivo fundido y enfriado a 50ºC
sobre placa de Petri que contiene una cantidad
determinada de la muestra diluida. Se tapa la
placa y se rota para mezclar la muestra en el agar.
Cuando el agar solidifica se incuban las placas.
Las colonias se desarrollan tanto dentro del agar
como en la superficie. Es un método
generalmente utilizado para el recuento de
microorganismos anaerobios facultativos.
Asa calibrada: La utilización de agujas o asas
calibradas permite tomar volúmenes pequeños,
que son inoculados en la superficie del agar
mediante la técnica de siembra masiva. Las
colonias son contadas y se multiplican por el
factor de dilución del asa empleada. El uso más
frecuente de este método es en el urocultivo. Se
determinan las UFC/g o ml de muestra
Diluciones seriadas: Se hacen diluciones de la
muestra (solución madre) y se depositan gotitas
de 10 ml en una placa Petri (gotitas de cultivo +
agar). Se examina el crecimiento de las colonias
en las gotitas tras la incubación.
Recuento directo de bacterias al microscopio:
Es una técnica para determinar el número total de
organismos de una muestra. Se utilizan cámaras
de recuento (cámara de Petroff-Hauser) y
visualización al microscopio. Es un método
rápido del número total de células de una muestra,
pero no distingue entre viables o no viables.
2. Explique si las colonias observadas provienen
de grupos de bacterias o de una sola célula ¿Qué
significa el término de Unidad Formadora de
Colonia (UFC)?
Rta: Término que debe utilizarse para reportarla
cuenta de colonias en placa, las cuales pueden
surgir de una célula o de un cúmulo de células. Es
la cantidad de células separables sobre la
superficie o dentro de un medio de agar
semisólido que da lugar al desarrollo de una
colonia visible del orden de decenas de millones
de células descendientes.
3. ¿Por qué las pipetas deben de cambiarse entre
cada dilución?
Rta: Se debe cambiar la pipeta entre cada dilución
para evitar arrastrar residuos de las diluciones
anteriores que contienen más células.
4. ¿Cuáles son las características generales de los
coliformes y cuál es su importancia como
indicadores sanitarios?
Rta: Los coliformes se clasifican en Totales y
Fecales. Los coliformes totales como
características comunes destacan que:
• Poseen morfología bacilar.
• Pueden ser aerobias o anaerobias facultativas.
• No forman endosporas.
• Gram Negativas.
• Fermentan la lactosa produciendo ácido y gas
en 24-38 hrs. A 36 °C
Los coliformes Fecales comparten las mismas
características que los totales, pero además:
• Crecen con lactosa y la fermentan a 44.5°C ±
2°C produciendo ácido y gas en las primeras
48 hrs. De incubación.
• Son coliformes termotolerantes .
• Incluye cepas de los géneros Klebsiella y
Escherichia siendo esta última el más útil
indicador de calidad de alimentos.
Referencias
• Perilla, M, Allejo, G, Popovic, T, Wells, J.
2014. Manual de laboratorio para la
identificación y prueba de susceptibilidad a
 los antimicrobianos de patógenos bacterianos
de importancia para la salud pública del
mundo en desarrollo. Organización Mundial
de la Salud.

• Norma Oficial Mexicana, Bienes y Servicios.

Método para la cuenta de microorganismos
coliformes totales en placa.

View publication stats