FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA GENERAL
LABORATORIO
CRECIMIENTO BACTERIANO EN DIFERENTES CONDICIONES AMBIENTALES

INTRODUCCIÓN

Las bacterias y las archaeas son microorganismos que tienen una gran capacidad de crecer en diferentes
ambientes. Por ejemplo, son capaces de desarrollarse a temperaturas muy altas o muy bajas, a pH ácido
o alcalino, en lugares con escasez o exceso de agua, en zonas con alta concentración de solutos o en
ausencia de oxígeno, entre otros.

Es por esto, que cuando suceden cambios en algunas condiciones o factores externos, ciertos
microorganismos no son capaces de resistirlos y detienen su crecimiento o mueren. No obstante, otros
tienen la capacidad de adaptarse a los cambios y pueden sobrevivir en diferentes ambientes.

Entre los factores que más afectan el desarrollo bacteriano se encuentran el pH, la temperatura, la presión
osmótica y el oxígeno.

El rango de pH en el que se desarrollan la mayoría de los microorganismos se encuentra entre 6.5 – 7.5.
Sin embargo, ciertos microorganismos pueden crecer en pH por debajo de 6.5 y por ello se les denomina
acidófilos, mientras otros pueden crecer en pH por encima de 7.5 llamándose alcalófilos.

En cuanto a la temperatura, la mayoría de las bacterias se desarrollan a temperaturas entre 15 y 45 ºC y

se conocen como microorganismos mesófilos. Otros en cambio, necesitan temperaturas por debajo de 15
ºC para crecer y son los denominados psicrófilos. Adicionalmente, los termófilos alcanzan su crecimiento
óptimo a temperaturas por encima de 45 ºC. De éstos, aquellos que crecen a temperaturas superiores a
80 ºC se conocen como hipertermófilos.

Respecto a la presión osmótica, existen varios grupos de microorganismos. Aquellos que pueden crecer
en altas concentraciones de sal, que se conocen como halófilos; los que prefirieren concentraciones
fisiológicas (0,85 % m/v de NaCl) pero que logran crecer a mayores concentraciones, denominados
halotolerantes y los que sobreviven en altas concentraciones de azúcares, denominados osmófilos o
sacarófilos, entre otros

Con relación a las necesidades de oxígeno, los microorganismos aerobios o aerofílicos, son aquellos que
necesitan el oxígeno para sobrevivir, ya que lo emplean como aceptor final de electrones. Así mismo,
existen otros microorganismos que necesitan el oxígeno, pero en bajas concentraciones y son los
denominados microaerofílicos. Los anaerobios, por el contrario, son aquellos microorganismos que no
pueden vivir en presencia de oxígeno y emplean otros compuestos como aceptores de electrones. Por otra
parte, existen microorganismos facultativos que son capaces de crecer en presencia o ausencia de oxígeno
y los aerotolerantes, que son aquellos que pueden crecer en presencia de oxígeno, pero no lo utilizan como
aceptor de electrones.

RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPERADOS

• Evidenciar el efecto que ejercen el pH, la presión osmótica, la presencia y ausencia de oxígeno y
la temperatura, en el crecimiento de diferentes géneros bacterianos.
• Determinar, según lo enunciado en esta práctica, las condiciones ambientales óptimas de
crecimiento de diferentes géneros bacterianos.

MATERIALES

Clase:

• Generadores de anaerobiosis
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• Indicadores de anaerobiosis LABORATORIO
• Campanas de anaerobiosis

Grupo:
• 1 caja con alguno de los microorganismos modelo mencionados anteriormente.
• 1 tubo con caldo nutritivo (CN) con 1% de glucosa, pH 3.0
• 1 tubo con CN con 1% de glucosa, pH 5.0
• 1 tubo con CN con 1% de glucosa, pH 6.8
• 1 tubo con CN con 1% de glucosa, pH 9.0
• 1 tubo con CN con 1% de glucosa, pH 11.0
• 1 caja con agar nutritivo (AN) con NaCl al 0.85%
• 1 caja con AN con NaCl al 7.5%
• 2 cajas con Agar Sangre (Siembra Clostridium spp.)
• 3 tubos con CN
• 2 cajas con AN
• 2 tubos con solución salina 0.85%
• 1 tubo con 10mL de aceite material (Siembra en tubo con Clostridium spp.)
• Coloración de Gram
• Gradillas

Cada grupo de trabajo tendrá uno de los siguientes microorganismos:

• Clostridium spp. (siembra en agar sangre - AS)
• Staphylococcus aureus (siembra en AN)
• Escherichia coli (siembra en AN)
• Bacillus sp. (siembra en AN)
• Enterococcus sp. (siembra en AN)
• Proteus sp. (siembra en AN)

PROCEDIMIENTO EN SESIONES DE LABORATORIO PRESENCIAL.

A. SIEMBRA (Día 1)
• Seleccione uno de los microorganismos para desarrollar la práctica.
• Describa la morfología macroscópica y microscópica del microorganismo seleccionado. Para
describir la morfología microscópica realice una tinción de Gram.
• A partir del cultivo prepare una suspensión celular en solución salina. Pare ello tome una “asada”
del cultivo y suspéndala en el tubo de solución salina.
• Inocule 100µL de la suspensión en los medios de cultivo líquidos:
− 5 tubos de CN con 1% de glucosa: pH 3.0, 5.0, 6.8, 9.0 y 11.0.
− 3 tubos con CN.
• A partir del cultivo siembre por aislamiento en los medios de cultivo sólidos:
− 2 cajas de AN con NaCl: al 0.85 y al 7.5%.
− 2 cajas con AN.
• Lleve los tubos de CN con 1% de glucosa (pH 3.0, 5.0, 6.8, 9.0 y 11.0) y las cajas de AN con NaCl
al 0.85 y 7.5% a incubación a 37ºC, durante 24 horas.
• Lleve los tubos de CN a incubar a temperaturas de 4, 37 y 60ºC durante 24 horas.
• Lleve una de las cajas de AN a incubación a 37ºC, durante 24 horas. La otra caja, introdúzcala en
una campana de anaerobiosis e incube a 37ºC, durante 24 horas.

B. LECTURA (Día 2)
• Observe el crecimiento de los cultivos realizados, en los tubos teniendo en cuenta su turbidez y en
las cajas de Petri por presencia de colonias visibles.
• Complete la tabla y determine los valores óptimos, de cada factor evaluado, para el desarrollo del
microorganismo seleccionado.
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Microorganismo:

Morfología macroscópica:
Morfología microscópica:
Factor de crecimiento Evaluación de desarrollo
Crecimiento*
Óptimo
Abundante: +++
Medio: ++
Escaso: +
Ausencia de
crecimiento: 0
3.0

5.0

pH 6.8

9.0

11.0

Presión Osmótica NaCl 0.85%

NaCl 7.5%

4ºC

Temperatura 37ºC

60ºC

Aerobiosis
Oxígeno
Anaerobiosis

Preguntas adicionales:

1. ¿Qué reactivos son utilizados para generación de anaerobiosis? Explique el fundamento

2. ¿Cómo se comprueban las condiciones de anaerobiosis en una jarra generadora de anaerobiosis?
3. Mencione tres microorganismos aerobios facultativos, anaerobios estrictos y microaerofílicos de
interés para el medio ambiente, industrial y humano/animal.
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EJERCICIOS DE CRECIMIENTO BACTERIANO

PROCEDIMIENTO EN SESIONES DE LABORATORIO REMOTO 20-30.

TRABAJO EN GRUPOS
(ANÁLISIS Y ELABORACIÓN, sesión del 29 de septiembre
DIÁLOGO Y RETROALIMENTACIÓN, sesión del 1 de octubre)

Con base en la lista de microorganismos mencionados anteriormente y realizando una búsqueda

bibliográfica, complete la información teniendo en cuenta las indicaciones de cada caso.

CASO 1.
En la Pastelería “El Buen Bizcocho”, trabaja una panadera desde hace más de 10 años y su especialidad
es la crema de leche. Durante la última semana, la venta de fresas con crema ha disminuido; pues en el
barrio corre el rumor, de que, por comprar y comer la fresas con crema de la panadería, más de una
persona ha tenido diarrea.
Estos casos de EDA (Enfermedad Diarreica Aguda), llaman la atención de la Secretaria Municipal de
Salud y deciden hacer una visita de inspección al establecimiento. Dentro de los pasos de vigilancia
epidemiológica obtienen muestras de las manos de los manipuladores de alimentos, de las fresas y de
la crema de leche.
En el laboratorio de Microbiología de la secretaria, logran obtener un único microorganismo, este fue
aislado tanto de las manos de la panadera y como de la crema de leche.
Este microorganismo tiene las siguientes características.

Características macroscópicas Características microscópicas con

en Agar Sangre Tinción de Gram

https://www.facebook.com/109317849155157/photos/las-variantes-de-colonias-peque%C3%B1as-de-....-una-relacion-a-las-
i/322777021142571/ https://twitter.com/microbiosh/status/1224693953414430726

Describa las características macroscópicas: Reporte el Gram:

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OTRAS CONDICIONES DE CRECIMIENTO

Temperatura [NaCl]

Cómo se denomina este microorganismo según su Cómo se denomina este microorganismo

condición de crecimiento óptimo: según su condición de crecimiento óptimo:

pH Tensión O2-CO2

Cómo se denomina este microorganismo según su Cómo se denomina este microorganismo

condición de crecimiento óptimo: según su condición de crecimiento óptimo:

Según las características anteriormente descritas, el nombre del microorganismo aislado en las
muestras podría ser:
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CASO 2.
Lo han convocado para que apoye la caracterización de una cepa de Bacillus subtilis que científicos de
la PUJ aislaron del suelo de un parque natural y que después de realizar algunas pruebas para conocer
las condiciones en que crece mejor, encontraron lo siguiente:

Cultivo en diferentes agares: Describa las características microscópicas de las

colonias y reporte el crecimiento observado según
Agar sangre: su abundancia para cada uno de los medios de
cultivo:

Agar nutritivo + NaCl 0.85 % Reporte el resultado:

Agar nutritivo + NaCl 7.5 %

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Agar SIM: Reporte el resultado:

Agar nutritivo con diferentes condiciones de Reporte el resultado:

oxígeno:

Tinción de Gram: Reporte la tinción:

Según los resultados anteriores, la clasificación de microrganismo podría ser:

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CASO 3.
En el Hospital Municipal, en la sala de neonatos se encuentra una bebe de 6 meses de nacida, que ha
presentado fiebre. La mamá refiere que cuando la niña orina pareciese que le doliera por que llora. El
médico solicita un parcial de orina y un urocultivo.
La bacterióloga, procede a colocar el dispositivo de obtención de muestras y le pregunta a la mamá:
¿Cuántas veces al día le cambia el pañal a la niña?
La mamá responde: Pues doctora, solamente dos veces al día, porque están muy caros¡¡¡¡
Con este comentario y teniendo en cuenta que se trata de una niña, hay alta probabilidad de que se trate
de una infección de tracto urinario (ITU).
Una vez analizados los resultados del parcial de orina con presencia de Bacterias (+++) y Leucocitos:
15-30x/campo y correlacionándolos con el cuadro clínico la ITU es confirmada. Por lo que se procede a
realizar el urocultivo. Luego de la incubación, se obtiene un microorganismo tiene las siguientes
características.

Características macroscópicas Características microscópicas con Tinción

en Agar Sangre de Gram

https://es.123rf.com/photo_38484872_tinci%C3%B3n-de-....-.html

Describa las características macroscópicas: Reporte el Gram:

Este tipo de crecimiento denominado fenómeno de

“swarming” es característico de un microrganismo
perteneciente a la Familia Enterobacteriaceae.
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OTRAS CONDICIONES DE CRECIMIENTO

Temperatura [NaCl]

Cómo se denomina este microorganismo según su Cómo se denomina este microorganismo

condición de crecimiento óptimo: según su condición de crecimiento óptimo:

pH Tensión O2-CO2

Cómo se denomina este microorganismo

Cómo se denomina este microorganismo según su
según su condición de crecimiento óptimo:
condición de crecimiento óptimo:

Por tratarse de una Enterobacteria, la bacterióloga Según las características anteriormente

decide realizar dos pruebas adicionales (TSI-SIM), descritas, el nombre (Género) del
para confirmar el nombre específico del microorganismo aislado en las muestras
microorganismo y obtuvo: podría ser:
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Según los resultados anteriores, la

clasificación de microrganismo podría ser:

Reporte las lecturas para cada uno de los tubos y

recuerde el fundamente de cada uno de ellos:
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CASO 4.
Usted está trabajando en un laboratorio clínico de diagnóstico veterinario y le remiten una muestra de
materia fecal líquida y mal oliente, que fue tomada a un equino macho de 5 años. El veterinario indica
que el caballo está muy deprimido, ha presentado fiebre, diarrea profusa con manchas de sangre,
deshidratación membranas mucosas muy congestionadas, dolor abdominal severo y le indica que tiene
como diagnósticos diferenciales una Salmonelosis o una Clostridiosis, por lo que pide que realice un
coprocultivo para determinar cuál de estos agentes está causando el problema intestinal en este animal.
Usted procede a realizar el cultivo de la muestra y obtiene los siguientes resultados:

Cultivo en Agar sangre:

Describa las características macroscópicas:

Tinción de Gram:

Reporte la coloración:
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Crecimiento a diferentes Tensiones de Oxígeno:

En presencia de oxígeno En ausencia de oxígeno

¿Cómo se denomina este microorganismo según su condición de crecimiento óptimo?:

Crecimiento a diferentes temperaturas:

¿Cómo se denomina este microorganismo según su condición de crecimiento óptimo?:

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Crecimiento a diferentes pH:

¿Cómo se denomina este microorganismo según su condición de crecimiento óptimo?:

Según los resultados anteriores, usted determina que el microorganismo es:

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CASO 5.
Usted está trabajando en un laboratorio de investigaciones microbiológicas y se le entrega, para su
análisis, datos recolectados en campo, de un estudio que se le adelanta a una nueva cepa de Escherichia
coli, aisladas en las selvas del Putumayo. Le entregan la siguiente información:
Cultivo en agar EMB: 1. ¿Cómo se denominan ese color y cuál es
la razón para que se presente?

Coloración de Gram
2. Reporte la coloración

Pruebas bioquímicas realizadas 3. Informe el resultado de las pruebas

bioquímicas
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Pruebas de crecimiento realizadas:

4. Indique el resultado de la prueba

5. Indique el resultado de la prueba

6. Indique el resultado de la prueba

7. Según los resultados anteriores, usted determina que el microorganismo es:

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CASO 6.
Usted está trabajando en un laboratorio de calidad de aguas y recibe una muestra de agua de mar, la cual
pretende ser usada con fines recreativos, por tanto, le solicitan realizar los análisis para la detección de
Enterococcus. La muestra es procesada por la técnica de filtración por membrana y confirmada (Normas:
ISO 7899-2: 2001 o SM 9230 C: 2017). Usted obtiene los siguientes resultados:

Cultivo en agar Slanetz and Bartley: 1. Describa las colonias presentes.

Coloración de Gram 2. Describa las características microscópicas.

Pruebas bioquímicas realizadas 3. Informe el resultado de la prueba bioquímica:

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OTRAS CONDICIONES DE CRECIMIENTO

Prueba de pH
Prueba de tensión O2-CO2

4. Cómo se denomina este microorganismo según 5. Cómo se denomina este microorganismo

su condición de crecimiento óptimo: según su condición de crecimiento óptimo:

Prueba de temperatura
Prueba de [NaCl]

7. Cómo se denomina este microorganismo

6. Cómo se denomina este microorganismo según según su condición de crecimiento óptimo:
su condición de crecimiento óptimo:

8. Según los resultados anteriores, usted determina que el microorganismo es: