FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE ENFERMERÍA

PRÁCTICA Nro. 02

Laboratorio de: Fecha :

Microbiología y Parasitología 10 al 14 de abril del 2023
Temática :
Crecimiento microbiano: generalidades. Control del crecimiento microbiano: desinfección,
esterilización y antisepsia. Agentes microbicidas y microbiostáticos. Acción de los agentes físicos y
químicos sobre los microorganismos
Sesión: 2 Resultado de aprendizaje:
Explica el crecimiento microbiano
considerando los procesos de desinfección,
esterilización y antisepsia que se utiliza
para el control de microorganismos.
Estudiante: Tiempo desarrollo de la guía:
IV Ciclo de la Escuela Profesional de Enfermería 150 minutos

I. INTRODUCCIÓN
El crecimiento microbiano requiere energía para la formación de proteínas, ácidos
nucleicos, polisacáridos y lípidos a partir de elementos preformados en el medio de
crecimiento o ser sintetizados por la propia célula, donde cada especie microbiana tiene
un tamaño más o menos estable. Cuando se siembran microorganismos en un medio de
cultivo apropiado, los mismos comienzan a dividirse activamente empleando los
nutrientes que le aporta el medio de cultivo para "producir" nuevos microorganismos. Este
proceso continúa hasta que algún nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato
limitante) y el crecimiento se detiene. También puede detenerse el crecimiento por
acumulación de alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos.
No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor ambiental.
Así, unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una especie, y en cambio ser
neutras o beneficiosas para otra. Entre los factores ambientales se encuentran factores
físicos (temperatura desecación, radiaciones, ondas sonoras, presión hidrostática, presión
osmótica) y químicos (pH, salinidad). Así mismo, el crecimiento microbiano se ve
influenciado por la presencia de sustancias químicas en el ambiente, las cuales pueden ser
perjudiciales para su crecimiento, y que, en muchas ocasiones estas sustancias se utilizan
como agentes desinfectantes o antisépticos.
II. OBJETIVOS
Determinar el crecimiento microbiano considerando los procesos de desinfección, esterilización y
antisepsia que se utiliza para el control de microorganismos
III. CONOCIMIENTOS PREVIOS:
¿Qué es crecimiento microbiano?
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¿Todos los microorganismos crecen de la misma manera?

¿Cómo se puede medir el crecimiento microbiano?
¿Qué es un desinfectante?
¿Qué es un antiséptico?

IV. MATERIAL

1. Material de Laboratorio (por mesa de práctica).

 01 Mechero de alcohol.
 01 Asa bacteriológica
 02 Placas con PCA sembradas en superficie (diferentes diluciones, para recuento)
 02 Placas con Agar Sabouraud sembradas con hongos
 02 Placas con Agar Mueller Hinton sembradas para lectura de acción de los
desinfectantes (una placa con Staphylococcus aureus y una con Escherichia coli)
 01 Placa con Agar Mueller Hinton
 01 Placa con discos de papel filtro estériles
 01 Pinza
 06 Tubos con Caldo Nutritivo
 01 Set de lectura de acción de la temperatura
 01 Cultivo de Staphylococcus aureus
 01 Cultivo de Bacillus sp.
 02 Tubos con Solución Salina Fisiológica Estéril (5mL c/u)
 04 Hisopos estériles

2. Material individual
 Guía de prácticas
 Guantes descartables, mascarilla descartable y gorro
 01 Marcador indeleble

3. Material grupal
 01 Regla
 01 Jeringa de 5 ó 10mL
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V. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Actividad 1. Crecimiento microbiano
 Crecimiento bacteriano: recuento de placa
A partir de una muestra líquida se añade 0.1mL en la superficie del placas de Petri
conteniendo PCA (Plate Count Agar: Agar Cuenta Gérmenes), posteriormente la muestra
se extiende utilizando el asa de Drigalsky. Finalmente se incuba a 37°C por 24 horas, y
posteriormente se cuenta las colonias que desarrollan.

Añadir 0.1 mL Extender Contar las colonias

PLACA NÚMERO DE COLONIAS DILUCIÓN RECUENTO (ufc/mL)

1

 Crecimiento fúngico: medición del crecimiento lineal

A partir de un cultivo puro de un hongo se siembra por puntura en la parte central del Agar
Sabouraud, luego se incuba a 25°C por 3 a 5 días. El crecimiento radial se registra a partir del
segundo día, y se mide cada 24 horas, hasta que el hongo haya crecido en toda la superficie
del medio de cultivo.
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Actividad 2. Acción de los antisépticos y desinfectantes sobre las bacterias

Se realiza a mediante el método de Kirby Bauer modificado, para lo cual, a partir de una
suspensión bacteriana (concentración aproximada a 1,5x10 8 cel. /mL), utilizando un hisopo estéril,
se siembra por superficie en placas con Agar Mueller Hinton, luego se lleva a secar a la estufa por
10 minutos aproximadamente. Posteriormente se coloca, equidistantemente, discos embebidos
con diferentes de dicloxacilina en la superficie del Agar Mueller Hinton contenido en las placas de
Petri, y luego se incubó a 37º C por 24 horas. Finalmente se mide el halo de inhibición de
crecimiento

2 PUNTOS
DESINFECTANTE HALO DE INHIBICIÓN DE INTERPRETACIÓN
CRECIMIENTO (mm)
Dicloxacilina

Actividad 3. Acción de la temperatura sobre las bacterias

A partir de un cultivo puro de una bacteria, se siembra en 4 tubos conteniendo Caldo Nutritivo, a
continuación, se colocan, 3 de los tubos sembrados, en baño María a 100°C, durante 1; 5 y 10
minutos respectivamente; el cuarto tubo no se somete a la temperatura de 100°C, con la
finalidad de utilizarlo de control. Posteriormente los 4 tubos se incuban a 37°C por 24 horas.
Finalmente se observa si hay o no crecimiento.
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VI. PRECAUCIONES Y BIOSEGURIDAD

Aprender el manejo cuidadoso de muestras que pueden contener organismos vivos
peligrosos.
Portar la bata y equipo de protección (guantes)
Trabajar siguiendo cuidadosamente el protocolo de la práctica.
Cumplir con las normas establecidas en el reglamento del laboratorio.
Avisar al responsable de la práctica de cualquier accidente por insignificante que parezca.
No usar equipo que desconozcas su manejo o del cual se tengan dudas.

VII. CONCLUSIONES

VIII. EVALUACIÓN

1. Mencione 4 formas de medición del crecimiento microbiano

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2. Teniendo en cuenta los resultados de acción de los antisépticos y desinfectantes sobre

las bacterias, ¿Cuál o cuáles de ellos, recomendaría usted para realizar la higiene de la
zona de toma de muestra de orina? Fundamente su respuesta.

3. Explique los resultados obtenidos de acción de la temperatura sobre las bacterias.

IX. OBSERVACIONES Y RECOMENDACIONES

Trabajar en grupos de mesa siguiendo cuidadosamente el protocolo de la práctica.
Preguntar cualquier duda al docente de mesa
Cumplir con las normas establecidas en el reglamento del laboratorio.
No correr, saltar, gritar
No cambiarse de mesa salvo autorización del docente

X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (4 PUNTOS)

Código de LIBROS/REVISTAS/ARTÍCULOS/TESIS/PÁGINAS WEB.TEXTO
biblioteca
616.01 / M95c Murray P, Rosenthal K, Pfaller M. Microbiología Médica. 6ta. ed. Madrid:
Elsevier España; 2009.
579.1788 / M14A Madigan M, Martinko J, Parker J. Biología de los Microorganismos de Brock.
12ava ed. Madrid: Pearson; 2009.
616.01 / K74A Koneman E et al. Diagnóstico Microbiológico Texto y Atlas. 6ta ed. Argentina:
Médica Panamericana S.A; 2008.
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Bauer AW, Kirby WM, Sherris JC, Turck M. Antibiotic susceptibility testing by a
standardized single disc method. Am. J. Clin. Pathol. 1966, 45: 493
Zwietering M, Jongenburger I, Rombouts F, Van'T Riet K. Modeling of the
Bacterial Growth Curve. Applied and Environmental Microbiology. 1990; 56 (6):
1875–1881
Jurado Gamez Henry. Cinética de crecimiento de Lactobacillus lactis y
determinación del efecto probiótico en cepas patógenas. Revista Biosalud 2015;
14(2): 49-62. DOI: 10.17151/biosa.2015.14.2.5