INGENIERIA BIOTECNOLÓGICA

MICROBIOLOGÍA GENERAL
CÓD.1610322-B
DOCENTE: LAURA YOLIMA MORENO ROZO PhD
I SEMESTRE DE 2023

LABORATORIO Nº 5. TOMA DEMUESTRAS, PREPARACION DILUCIONES Y METODOS DE

RECUENTO

I. OBJETIVOS
- Aprender diluciones, siembra y métodos de recuento para análisis microbiológico de alimentos.
- Realizar análisis microbiológico a un alimento asignado utilizando lo aprendido teóricamente.

II. GENERALIDADES
I. La finalidad del muestreo es obtener una muestra representativa del alimento para su análisis inmediato y
conseguir resultados fiables sobre su estado higiénico-sanitario.
Los métodos de toma de muestras dependerán del tipo de alimento y la cantidad de cada unidad deberá ser
determinada, con minucioso cuidado, aplicando principios estadísticos que aseguren cumplir con los objetivos del
examen; es necesario que el producto reúna las mismas condiciones microbiológicas en el momento del muestreo
por eso se debe tener en cuenta lo siguiente:
1. Realizar muestreo aséptico empleando recipientes e instrumentos estériles.
2. Proteger la muestra de contaminación externa y mantenerla bajo condiciones que no permitan la muerte ni la
multiplicación de su flora original.
3. Mantener bajo congelación las muestras que se mantengan en estado en el momento de procesarlas deben
descongelarse en se envase original en una nevera entre 2 y 5 grados
4. Refrigerar las muestras perecederas entre 0 y 5 grados.
Una vez tomadas las muestras se empacan según su naturaleza para evitar su deterioro.

Etiquetado de las muestras: (realice el etiquetado de su muestra e inclúyalo como su primer resultado)
 Nombre del producto
 Marca
 Características organolépticas: color, olor. Aspecto.
 Temperatura
 PH
 Tipo y estado del envase
 Dirección
 Número de registro sanitario
 Número de lote
 Razón por la cual se solicita el análisis: rutina, intoxicación etc.
 Método de muestreo utilizado
 Forma de transporte, condiciones de envío al laboratorio

La cantidad mínima de una muestra para realizar los análisis es de 200gr aprox. 100gr son utilizados y los otros
100gr sirven de reserva por si es necesario repetir el análisis.
Cuando se trata de alimentos sólidos es necesario someterlos previamente a una suspensión utilizando un diluyente
estéril. Si el alimento: es líquido se agita en su envase original y se pasa sépticamente a un recipiente estéril.
Los diluyentes más utilizados son: agua de triptona con 5% sal, solución de Ringer ¼, agua de peptona tamponada.

PREPARACION DE DILUCIONES
Tiene por objeto efectuar diluciones progresivas de la muestra para poder realizar recuentos microbianos con una
población exacta de dicha muestra.
 Microbiología General, Práctica Nº 5 I SEMESTRE DE 2023 -2

Dilución:
Muestra (g ó Diluyente (mL) Dilución
mL)

10 (11) 90 10 -1
1 90 10 -2
0,1 90 10 -3
0,01 90 10 -4
0,001 90 10 -5

1 9 10 -1
0,1 9 10 -2
0,01 9 10 -3
0,001 9 10 -4
0,0001 9
10 -5

METODOS DE RECUENTO EN PLACA

Para el recuento en placa de microorganismos se han establecido los rangos principales en los cuales debe hacerse
el conteo.

1. RANGO ENTRE 30-300 COLONIAS POR PLACA

Contempla un número de bacterias de diferentes tipos sin importar reacciones bioquímicas o características
microscópicas.
EJ: Recuento de aerobios mesófilos, coliformes totales y fecales.

a. para cajas duplicadas:

contar todas las colonias en cada placa, tomar promedio aritmético y multiplicar por el factor de dilución
(correspondiente a la respectiva dilución)

Ejemplo: 10-1: Caja 1: 140 colonias

Caja 2: 180 colonias 140 + 180 * 10 = 16 * 10 2 ufc/ gr o ml
2

b. Para diluciones consecutivas:

Proceder como en a, e informar para cada dilución el promedio de los 2 conteos, luego dividir el mayor
recuento entre el menor recuento:
Si el de los dos conteos es menor o igual a 2, se informa el promedio.
Si el cociente en mayor a 2 se informa el menor conteo.

c. si no se presenta crecimiento en 10 0 se informa NEGATIVO; si se presenta crecimiento en 10 0 se reporta

tal como da el conteo Ej: 250 colonias se informa: 250 ufc / gr o ml.

d. Mas de 200 colonias por octavo de caja en la mayor dilución sembrada se informa mayor de 1600 ufc/gr
o ml por el recíproco de la dilución correspondiente y conteo estimado (CE).

2. RANGO ENTRE 20 – 200 COLONIAS POR PLACA: Cuando el recuento contempla un número de
bacterias que presentan alrededor de su crecimiento alguna reacción enzimática por ej. S aureus
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3. RANGO ENTRE 10- 100 COLONIAS POR PLACA: se aplica para hongos y levaduras.

4. COLONIAS INVASORAS: se cuentan solo cuando:

- existen colonias bien distribuidas en áreas dónde no hay invasores
- cuándo el área cubierta por invasores no excede a la mitad superficial de la placa.
- De lo contrario se informa Spreader

III. MATERIALES
- Alimento asignado: (muestra completa) Deberá traer la muestra asignada el día de la práctica, manteniendo
sus condiciones de conservación y su empaque intacto.
- Erlenmeyer con 90 mL de Agua peptona y tubos tapa rosca con 9 mL de agua peptona, gradilla, balanza.
- Pipetas estériles, Placas estériles,
- Agar Plate Count (para Aerobios mesófilos), Agar Saboraud 4% (para hongos y levaduras), Agar Chromocult
(para coliformes totales y coliformes fecales)

IV. PROCEDIMIENTO
Pesar asépticamente 10 gr (o tomar 10 ml en caso de muestras liquidas) y realizar las diluciones correspondientes
según las indicaciones que dé el profesor, en el agua peptona estéril (un Erlenmeyer con 90 ml de agua de dilución
y tubos con 9 ml de agua de dilución). Es importante homogenizar la muestra cuando se realiza la dilución 10 -1.

Técnica de recuento en placa:

A partir de la serie de diluciones decimales siembre por duplicado, 1 ml de la dilución correspondiente en placas de
petri estériles.
Añadir a cada placa el medio de cultivo según el análisis (agar Stándar Plate Count para Aerobios Mesófilos, Agar
Chromocult específico para Coliformes Totales y Coliformes Fecales, agar Saboraud 4% para Hongos y
levaduras,), previamente atemperado a 35 – 40 ºC. Mezclar perfectamente medio e inóculo sobre la mesa de
trabajo, haciendo movimientos circulares con la placa en el sentido de las manecillas del reloj evitando que el
medio impregne la tapa. Dejar solidificar e incubar las placas invertidas. Incubar de la siguiente forma:
Aerobios Mesófilos (AM): 35+- 2 ºC / 24 – 48 horas
Coliformes Totales y Coliformes Feacales (CT/CF): 35+- 2 ºC / 24 – 48 horas
Hongos y Levaduras (HyL): 25 ºC / 3 – 5 días

V. RESULTADOS
Después de la incubación se realiza el recuento correspondiente, por gramo o mililitro de la muestra analizada.
(Importante tener en cuenta los casos de recuento estudiados)
a) Realice el dibujo de los resultados obtenidos y describa los diferentes tipos morfológicos de colonias que
observa en los medios de cultivo. (Descripción morfológica de colonias)
b) Realice el recuento e informe el resultado obtenido para cada grupo microbiano
c) Discuta la calidad microbiológica del alimento analizado y discuta las posibles causas del recuento obtenido.

VI. CUESTIONARIO

Describa el fundamento de las siguientes técnicas para cuantificación microbiana: espectrofotometría y

cuantificación de ácidos grasos de membrana.