MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE INGENIERIA

PESQUERA

PRACTICA DE LABORATORIO N°03

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

 DOCENTE:
- Dra. María Jimenez Forero

 INTEGRANTES:

- Camacho Vinces, Yessenia

- Nevado Llontop, Anahí
- Del Rosario Merino, Oreana
- Antón Cherres, Natalia
- Cornejo Arreategui, Alessandra
- Salazar Vicente, Carmín

 CURSO:
- Microbiología de Alimentos

2017- II

INGENIERIA PESQUERA Página 1

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I. INTRODUCCION

La microbiología nace como ciencia con la invención del microscopio y la

observación de los primeros microorganismos, mas con la preparación de los
medios de cultivo y la utilización del agar como solidificantes fueron factores
importantes por su evolución.

Actualmente uno de los procesos más importantes para la identificación de los

microorganismos es observar su crecimiento en medios de cultivo artificiales
preparados en el laboratorio, por lo que se han diseñado varios tipos para el
aislamiento y la identificación de los microorganismos. Un medio de cultivo
adecuado para el uso microbiológico ha de contener como mínimo carbono,
nitrógeno, fosforo y sales inorgánicas como calcio, magnesio, sodio o potasio.
En muchos casos para bacterias heterótrofas exigentes son necesarias ciertas
vitaminas, extractos de carne o levaduras.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios

es utilizar la peptona que, además, representa una fuente asequible de
nitrógeno y carbón; también se podrán incluir carbohidratos para aumentar el
valor energético del medio de cultivo y detectar reacciones de fermentación
que faciliten la identificación de los microorganismos fermentativos.

Todos los medios de cultivo deben de estar estériles para evitar la aparición de
formas de vida que puedan alterar, e incluso impedir el crecimiento microbiano
normal de las especies microbiológicas inoculadas o sembradas.

El método más usado para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave, a

temperatura de 121°C.
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II. COMPETENCIAS

2.1. COMPETENCIAS ESPECIFICAS

 Aplica eficazmente metodologías correctas para preparar y

esterilizar medios de cultivo.

 Prepara medios de cultivo con diferente estado físico y explica

la diferencia en el procedimiento de preparación.

2.2. COMPETENCIA PROFESIONAL

 Capacidad para preparar diferentes tipos de medio de cultivo

eficazmente para efectuar cultivos microbiológicos en alimentos en
el área de control de calidad.
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III. FUNDAMENTACION TEORICA

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos a nivel de

laboratorio para su estudio, son los medios de cultivo que deben contener los
nutrientes necesarios y estar exento de todo microorganismo o contaminante.
La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque
las necesidades nutricionales varían considerablemente de una especie a otra.
Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios
comunes como el agar nutritivo y microorganismos muy exigentes que
necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para
crecer.

Entre los principales agares tenemos:

 AGAR NUTRITIVO

Es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de

bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas
temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la
superficie, por lo que se distinguen, mejor las colonias pequeñas.

En un caldo de nutrientes, la bacteria crece el líquido, y aparece como una

sustancia espesa, con colonias difícilmente observables. El agar nutritivo
contiene normalmente: 0.5% de peptona; 0.3% de extracto de carne/ extracto
de levadura; 1.5% de agar: 0.5% de cloruro de sodio; agua destilada.

 AGAR MC-CONKEY

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado para

aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados
normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la
fermentación de la lactosa. El cristal violeta y las sales biliares inhiben el
crecimiento de organismos grampositivos, lo que permite la selección y el
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aislamiento de bacterias gramnegativas. Las bacterias entéricas que tienen la

habilidad de fermentar lactosa pueden ser detectadas utilizando el carbohidrato
lactosa y el indicador de pH rojo neutro.

 AGAR COLIFORMES

Es un medio de cultivo cromogénico diferencial para el análisis microbiológico

de muestras de agua. En un plazo de 24 horas este medio permite la
detección, la diferenciación y la enumeración simultaneas de E. coli y bacterias
coliformes.

 BALANZA ANALITICA

Es una clase de balanza de laboratorio diseñada para medir pequeñas masas,

en un principio de un rango menor de miligramos. Los platillos de medición de
una balanza analítica están dentro de una caja transparente provista de
puertas para que no se acumule el polvo y para evitar que cualquier corriente
de aire en la habitación afecte al funcionamiento de la balanza.

 AUTOCLAVE

Es un recipiente de presión métalico de paredes gruesas con un cierre

hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción
industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua. Su construcción
debe ser tal que resista la presión y temperatura desarrollada en su interior. La
presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los
100°C.
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 AGAR SABORAUD

Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,

particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo, etc.).

En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para

el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia
de cloranfenicol y el pH ácido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre
el de bacterias.

 AGAR ESCHERICHIA COLI.

Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento

selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas
exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae.

 CALDO NUTRITIVO.

FUNDAMENTO

Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que

constituyen la fuente de carbono y nitrógeno necesarias para el adecuado
desarrollo bacteriano.

Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el desarrollo de

microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.

Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de

alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
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 CAMARA DE INCUBACION.

Una incubadora sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos

o cultivos celulares, regulando factores de crecimiento viables como por
ejemplo la temperatura, la humedad y la ventilación.

Este equipo sirve para cultivo microbiológico, teñido o secado de porta

objetos, incubación de muestras de leche, cultivos de tejido y sangre, etc.

Existen incubadoras que tienen la capacidad de controlar temperaturas

extremadamente bajas (incubadoras microbiológicas), humedad y niveles
de dióxido de carbono (incubadoras para cultivos celulares). Las
incubadoras microbiológicas se usan principalmente en el crecimiento y
almacenamiento de cultivos bacterianos a temperaturas entre 5 y 37oC. Por
su parte las incubadoras para cultivo celular trabajan a temperatura de
37oC, simulando las condiciones de la temperatura corporal.

 REFRIGERADORA .

En microbiología, los científicos utilizan refrigeradores para crear un entorno

para replicar células y para llevar a cabo experimentos en algunas de éstas
para determinar cómo es que las afectan las bacterias u otros
microorganismos. Los tipos de células generalmente dirigidas para
refrigeración son microorganismos llamados "mesófilos" y "psicotrópicos".
Los científicos normalmente tienen tres usos para las células de
refrigeración los cuales son, el almacenamiento para su uso posterior, evitar
el crecimiento excesivo de éstas y reducir la tasa de actividad celular para
evitar que aparezcan mutaciones y microorganismos bacteriales
adicionales.
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IV. MATERIALES

4.1. INSTRUMENTOS

 12 tubos de cultivo
 8 pipetas
 2 varillas de vidrio
 1 malla metálica
 8 mecheros de Bunsen
 6 matraz de Erlenmeyer
 4 espátulas
 Probetas
 4 pizetas con agua destilada

4.2. MEDIOS DE CULTIVO

 Agar nutritivo
 Agar MC-Conkey
 Agar Baird-Parker
 Agar Saboraud
 Agar E.Coli
 Caldo nutritivo

4.3. EQUIPOS

 Balanza analítica
 Autoclave
 Cámara de incubación
 Refrigeradora, etc.
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V. PROCEDIMIENTO

1. Se desinfecta el área de trabajo.

2. Identificar los instrumentos, equipos y medio de cultivo a utilizar.

3. Se enciende el mechero cuidadosamente.

4. Para la preparación del medio de cultivo solido se debe leer las

instrucciones del fabricante indicadas.

5. Hallar la cantidad necesaria a pesar según el volumen requerido.

6. Pesar la cantidad hallada según el volumen requerido siguiendo las

instrucciones de la docente.

7. Colocar los medios de cultivo en un Erlenmeyer o frasco que contenga

agua destilada en el volumen requerido.

8. Agitar rotando levemente hasta disolver el agar.

9. Rotular el tubo o frasco colocando número de grupo y medio de cultivo

utilizado.

10. Calentar o llevar a baño María el agar hasta disolver completamente

solución.

11. Tapar el tubo de ensayo con algodón o tapar el frasco evitando que se
contamine.

12. Esterilizar los medios de cultivo en la autoclave a temperatura de 121°C, a

15 lbs, de presión durante 15 minutos.
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VI. RESULTADOS

FIGURA N°01:
IDENTIFICACION DE LOS INSTRUMENTOS, EQUIPOS Y ME
CULTIVO A UTILIZAR.

FIGURAN°02: ENCENDIDODEL
MECHERO DE MANERA
CUIDADOSA
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FIGURA N°03: LECTURA DE

LAS INDICACIONESDEL
FABRICANTEINDICADAS
(AGAR COLIFORME).

ULO DE LA CANTIDAD NECESARIA A PESAR SEGÚN EL VOLUMEN REQUERIDO

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FIGURA N°05: PESAMOS LA CANTIDAD HALLADA (5.3 gr) SEGÚN EL

REQUERIDO SIGUIENDO LAS

ISNTRUCCIONES DE LA
DOCENTE.

6: MEDICION DEL VOLUMEN REQUERIDO (200 ML) EN LA PROBETA.

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FIGURA N°07: AGREGAMOS EL VOLUMEN DE AGUA REQUERIDO AL AGAR COLIFORME PARA

EMOS EL MEDIO DE CULTIVO A BAÑO MARIA PARA ASI PODER DISOLVERLO COMPLETAMENTE.
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VII. CUESTIONARIO

7.1. ¿Qué son medios de cultivo enriquecidos y qué tipo de

microorganismos los requieren?

Un medio de enriquecimiento es un medio de cultivo que contiene los nutrientes

necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismos, entre ellos algunos de los más exigentes. Se utilizan
comúnmente para la cosecha de diferentes tipos de microbios que están
presentes en la muestra.

Ciertos organismos no crecen en medios de cultivo ordinarios. Requieren

ingredientes que promueven el crecimiento, como la sangre, glucosa, suero,
huevo, entre otros. Los medios de enriquecimiento contienen ingredientes que
aumentan las cualidades estimulantes del medio propiciando un crecimiento
elevado. Otra característica de los medios de enriquecimiento es que pueden
contener componentes químicos que inhiben ciertos tipos de microorganismos. De
este tipo de Medios de cultivo se puede obtener un subcultivo de una colonia
aislada.

- Microorganismos que la requieren: Streptococcus, Escherichia

coli, Enterobacter, Klebsiella, Salmonella, Proteus, Shigella,
Francisella, Candida albicans, etc.

7.2. ¿Qué son medios para mantenimiento de cepas? Mencione 3

ejemplos.

Son aquellos medios que controlan el crecimiento celular y suprime las actividades
metabólicas de los microorganismos. Estos medios tienen como objetivos principal
la preservación de cepas manteniéndolas puras, viables, sin variaciones y
mutaciones.
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Ejemplo:
- Liofilización
- Cultivo en CTA
- Mantenimiento en tierra estéril

7.3. ¿Qué son medios de pruebas?

Medios estandarizados en sus concentraciones iónicas para ser utilizados por la

técnica de difusión con discos para determinar MO’s de los antibióticos en las
pruebas de sensibilidad.

7.4. Para preparar el tipo y cantidad de medio de cultivo ¿Qué se

requiere conocer?

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el

crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien
en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que
necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
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FIGURA N°09: GRUPO DE TRABAJO EN EL LABORATORIO CON LOS IMPLEMNTOS NECESARIOS (T