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“FACULTAD DE OCEANOGRAFÍA, PESQUERÍA, CIENCIAS

ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA”
“ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA
ALIMENTARIA”

Asignatura: Microbiología – Práctica

Tema: Factores físicos y químicos que influencian en el crecimiento microbiano

Docente: Dra. Nilda Quispe Alvarado

Integrantes:

 Castilla Lecca Sandra


 Curo Cueva, Fabiola del Pilar
 Díaz Asenjo Xiomara
 Gonzales Villacorta Christian
 Salcedo Agüero Harol Johann

Sección: Tercer año “B”

MAYO 2017
Microbiología 2017

I. RESUMEN

El objetivo de este trabajo es aprender a determinar cómo influyen algunos factores físicos
y químicos del medio en la velocidad de crecimiento de los microorganismos. Las
actividades de los microorganismos se ven muy afectadas por las condiciones químicas y
físicas del medio. Al respecto se pueden considerar muchos factores ambientales, pero
hay cuatro factores que tienen una función destacada en el control del crecimiento
microbiano: la temperatura, el pH, la disponibilidad de agua y el oxígeno. Las siembras que
realizamos fueron de echerichia coli para posteriormente someterla a algunos agentes
físicos y químicos. Primero trabajamos con el factor de la temperatura los cuales incubamos
para ver si eran psicrofilos, termófilos y mesófilos, seguimos con el pH incubando esas
siembras a 35°C por 24h, luego sometimos otras siembras a agentes químicos germicidas y
finalmente los sometimos a la acción de antibióticos.
ABSTRACT
The objective of this work is to learn how to determine how some physical and chemical
factors influence the medium in the growth rate of microorganisms. The activities of
microorganisms are greatly affected by the chemical and physical conditions of the
environment. Factors that have a prominent role in the control of microbial growth:
temperature, pH, water availability and oxygen. The plantings that were made were of
echerichia coli and later subjected to some physical and chemical agents. First we worked
with the temperature factor in which they were incubated to see if they were psychophiles,
thermophiles and mesophiles, we continued with the pH incubating those lenses at 35 ° C
for 24h, then some others sowing to germicidal chemical agents and finally we submitted
them To the action of antibiotics.

II. INTRODUCCIÓN

Para obtener el crecimiento óptimo de los microorganismos, no solo son indispensables


los requerimientos nutricionales, sino otros factores ambientales, tanto físicos como
químicos .Un agente físico es una condición física o propiedad física que causa cambio.
La humedad, la temperatura la presión osmótica, el pH, las radiaciones y los filtros son
ejemplos de agentes físicos .El crecimiento de los microorganismos se modifica al
cambiar los factores ambientales. (1)

Los factores químicos se utilizan para el control del crecimiento microbiano tanto en
tejidos vivos como en objetos inanimados .Lamentablemente son pocos los agente
químicos que logran la esterilidad; la mayor parte de ellos solo reducen las poblaciones
microbianas a niveles seguros o eliminan las formas vegetativas de los patógenos .Un
problema frecuente en la desinfección es la selección de un agente .No existe un
desinfectante único que sea apropiado para todas las circunstancias. (2)

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Microbiología 2017

El objetivo es determinar la influencia de los factores ambientales en el crecimiento


microbiano, manifestados en la presencia o ausencia de crecimiento o la velocidad de
crecimiento.

III. PARTE EXPERIMENTAL

MATERIALES, INSUMOS, EQUIPOS:


• Tubos de ensayo.
• Asa de kolle.
• Aguja de kolle.
• Agar nutritivo.
• Caldo nutritivo.
• Estufas de diferentes temperaturas
• Refrigeradora
• Recipientes para realizar los baños de los tubos de ensayo.
• Placas Petri.
• Mechero.
• Antibiótico
• Agar Mueller Hinton.
• Fenol 0.5%.
• Medios de cultivos de diferentes concentraciones de NaCl y sacarosa.

PROCEDIMIENTOS

1. LA TEMPERATURA:

a) Determinación de la temperatura óptima de crecimiento:


 Sembrar en múltiples tubos un pequeño inóculo de un cultivo joven.
 Incubar por separado en estufas reguladas a temperaturas perfectamente controladas

5°C / 21°C / 35°C / 60°C.

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b) Determinación de las temperaturas mínimas y máximas de crecimiento:


 Con el mismo procedimiento de siembra, incubación y lectura que el punto anterior,
considerar como la temperatura mínima decrecimiento en la cual aparece cierto
vestigio de crecimiento en un periodo suficientemente largo y no se nota
crecimiento a la temperatura inmediatamente inferior, y como la temperatura
máxima de crecimiento aquella que aparece pequeño vestigio de crecimiento, pero a
una temperatura inmediatamente superior ya no se aprecia crecimiento.
c) Ubicación de un microorganismo en un grupo de temperatura:
 Temperatura óptima de crecimiento en microorganismos:
- Mesófilos: 20°C - 45°C
- Termófilos: +45°C.
- Psicrófilos: forma colonias visibles a 0°C en 7 días.

2. EL pH:

 Para determinar los puntos cardinales de pH de un microorganismo y así conocer :


- pH óptimo: mayor crecimiento en el tiempo más corto.
- pH mínimo: ligero crecimiento en un tiempo largo, pero a un pH
inmediatamente inferior no muestra crecimiento.
- pH máximo: ligero crecimiento en un tiempo largo, pero no muestra
crecimientoa un pH inmediatamente superior.
 Sembrar en múltiples tubos de medio de cultivo, ajustados a un pH conocido (4,0
;5,0 ;6,0 ;7,0 ;8,0 y 9,0), pequeños inóculos de una cepa joven.
 Incubar a la temperatura óptima de crecimiento (35°C / 24 – 48h ).

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3. RESISTENCIA AL CALENTAMIENTO:

 Sembrar en caldo nutritivo alícuotas de 0,1 ml de un cultivo joven, en 5 tubos con 5


ml de medio de cultivo.
 Calentar en baños de agua, regulados a temperaturas controladas, cada uno de los
tubos por un periódo de 10 minutos. Las temperaturas utilizadas en laboratorio
fueron de : 50°C / 70°C / 80°C / 90°C / 100°C.
 Enfriar en agua corriente
 Incubar a 35°C / 24 – 48 h.

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4. INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTOS:

a) Determinación del halofilismo:


 Sembrar un microorganismo en placas con medio de cultivo favorable, preparado
con diferentes concentraciones de cloruro de sodio: 5% / 10% / 15% de ClNa.
 Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura óptima (35°C / 1,2,3 y 7
días).
b) Determinación de la osmofilia:
 Sembrar el microorganismo en placas con medio de cultivo favorable, preparado
con diferentes concentraciones de sacarosa: % / % / % de sacarosa.
 Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura óptima.

5. DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN GERMICIDA DE ALGUNOS


AGENTES QUÍMICOS:
 Colocar 0,5 ml de inóculo de un cultivo fresco en 5 ml de solución de fenol al 0,5%.
 Agitar y dejar actuar durante 1 minuto.
 Tomar una asada de la mezcla y sembrar a un tubo con caldo nutritivo, marcado
convenientemente.
 A los 2,5 minutos de realizar la mezcla, repicar nuevamente a otro tubo con caldo
nutritivo, marcado convenientemente.
 A los 5 minutos proceder igual que el paso anterior.
 Alos 10 minutos realizar una última siembra semejante.
 Incubar todos los tubos a la temperatura óptima de crecimiento ( 37°C / 24 horas).

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6. DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS:


 Sembrar por extención en superficie 0,1 m de inóculo de una cepa joven,
distribuyéndolo uniformemente.
 Aplicar inmediatamente los discos con antibióticos.
 Incubar las placas a la temperatura óptima de crecimiento (37°C/24horas).

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IV. RESULTADOS

• TEMPERATURA:

- 05°C: No hubo desarrollo (no hay resistencia).


- 21°C: Si hubo desarrollo en forma rizoide.
- 37°C: Si hubo desarrollo en forma arborecente.
- 60°C: No hubo desarrollo (no hay resistencia).

CONCLUSIÓN: El eschericia coli es mesófilos ya que crece mejor a una


temperatura de 37 °C lo cual oscila entre 20 °C a 45 °C.

• pH:
- pH 4.0: No hubo desarrollo (no hay resistencia)
- pH 5.0: Si hubo desarrollo (escaso) en precipitado o floculo.
- pH 6.0: Si hubo desarrollo (regular) en precipitado o floculo.
- pH 7.0: Si hubo desarrollo (abundante) en precipitado o floculo.
- pH 8.0: Si hubo desarrollo (regular) en precipitado o floculo.
- pH 9.0: Si hubo desarrollo (regular) en precipitado o floculo.

CONCLUSIÓN: El escherichia coli su pH interno es siempre 7.6 o muy cercano a


ese valor. En los resultados obtuvimos una oscilación entre (pH 5 a pH 9).

• RESISTENCIA AL CALENTAMIENTO:
- 50°C: Si hubo desarrollo (abundante) en precipitado o floculo.
- 70°C: Si hubo desarrollo (regular) en precipitado o floculo.
- 80°C: Si hubo desarrollo (regular) en precipitado o floculo.
- 90°C: Si hubo desarrollo (escaso) en precipitado o floculo.
- 100°C: No hubo desarrollo (no hay resistencia).

CONCLUSIÓN: El eschericia coli tiene una temperatura mínima de crecimiento de


50 °C y máxima de crecimiento de 90 °C.

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• DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN GERMICIDA DE ALGUNOS AGENTES

QUÍMICOS:

- 1 min: Si hubo desarrollo


- 2.5 min: Si hubo desarrollo
- 5 min: Si hubo desarrollo
- 10 min: Si hubo desarrollo

CONCLUSIÓN: En todo hubo resistencia.

V. DISCUSIÓN

Según Díaz Ramón (2003) Las altas temperaturas provocan efectos letales sobre los
microrganismos. Una bacteria sometida a una temperatura superior a la que normalmente
crece sufre en primer lugar daños en sus proteínas y ácidos nucleicos, estos primeros daños
impiden que la bacteria se reproduzca y por consiguiente forme una colonia sobre un medio
de cultivo adecuado.
Esto fue explicado en la práctica por tal motivo la bacteria E. Coli se incubó a una
temperatura máxima de 60 °C para que no haya desnaturalización del bacteria.

Según Olivas E E, Alarcón L. Manual de prácticas de Microbiologiá básica y


Microbiología de alimentos; 2001:
Para mantener el crecimiento óptimo de los microorganismos, no solo son indispensables
los requerimientos nutricionales, si no también otros factores ambientales tanto físicos
como químicos. Un agente físico es una condición física o propiedad física que causa un
cambio. La humedad, la temperatura, la presión osmótica, el Ph, las radiaciones y los filtros
son ejemplos de agentes físicos. El crecimiento de los microorganismos se modifica al
cambiar los factores ambientales.
Concordamos con el texto ya que se observa una notable diferencia de turbidez en el
primer tubo de ensayo con los tubos restantes, lo que nos indica que los factores
físicos también alteran el medio de crecimiento en la cepa E. Coli.

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Microbiología 2017

Según el autor M. Hernández Rodríguez en su libro “tratado de nutrición” la salmonella


typhi es un microorganismos gran negativo, aeróbico, no formador de espora, móvil
perteneciente a la familia enterobacteriaceae, del que se conoce numerosos serotipos. Todos
son potencialmente patógenos para el hombre, su temperatura de crecimiento optimo es de
35°c- 37°c, pudiéndose desarrollarse entre los límites de mayor a 5°c y menores a 45°c-
47°c, su pH óptimo de desarrollo es de 6.5 a 7.5 (límites entre mayores a 4,5 y menores a
9).

Según lo realizado en el laboratorio a temperatura de 18°c y 37°c tuvieron un poco de


desarrollo microbiano, pero a temperatura de 5°c no se observó nada. y según el pH
tubo mayor desarrollo entre los 6 a 8 , dentro de los limites establecido por el autor.

La temperatura es uno de los factores más relevantes en el crecimiento de los


microorganismos. Y si pensamos en la seguridad alimentaria acaba siendo el más
importante de todos. En lo que respecta a las toxiinfecciones de origen alimentario, la
utilización de temperatura inadecuada durante el procesado de los alimentos se apunta
como la principal causa de toxiinfecciones.
Estamos de acuerdo con lo mencionado por el autor ya que al someter las
siembras a diferentes temperaturas la temperatura optima es aquella que da
mayor masa microbiana en menor tiempo.

VI. CONCLUSIÓN
 Reconocimos aquellos factores que influyen al crecimiento microbiano, ya sea
factores físicos (Temperatura, pH, resistencia al calentamiento) o factores químicos
(Halofinismo, osmofilia, desinfectantes y antibióticos).
 Observamos que las concentraciones menores de NaCl y sacarosa presenta mayor
crecimiento microbiano, que las que tienen mayor concentración.
 Observamos que la cepa E. Coli en el método de los antibióticos es una bacteria
muy sensible, ya que presentó mayor halo de inhibición por lo cual tiene menor
resistencia.
 La cepa E. Coli, es resistente a una temperatura por bajo de 60 ºC, a mayores
temperaturas es menor su resistencia al calentamiento.

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VII. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

Gamazo de la Rasilla C, López-Gońi I, Díaz R. Manual práctico de


microbiología. Barcelona: Elsevier Masson; 2010.

Gil Hernández A, Sánchez de Medina Contreras F. Tratado de nutrición.


Madrid: Médica Panamericana; 2013.
Olivas E E, Alarcón L. Manual de prácticas de Microbiología básica y
Microbiología de alimentos. Ciudad Juárez, Chihuahua, México:
Universidad Autónoma de Ciudad Juárez; 2001.

(1)Tortora, J., Funke, B. Case, B. (2007) Introducción a la Microbiología.


Editorial Medica Panamericana. Madrid .España.

(2)Olivas,E . , Alarcón, L. (2004) Manual de Microbiología Básica y de


Microbiología de Alimentos .Universidad Autónoma de Ciudad
Juarez.Mexico.

Microorganismos y alimentos [Internet]. in food quality; [citado 19 June 2017].


Disponible en:
http://www.epralima.com/infoodquality/materiais_espanhol/Manuais/3.Microorga
nismos_y_alimentos.pdf

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