RAE 2 Osteomielitis crónica

BM: Describir en qué consisten las técnicas de biología molecular para el diagnóstico de infecciones
osteoarticulares, sus ventajas y limitaciones.

• Glosario:
• Inoculación: la presencia de algo que crecerá y se reproducirá
• Osteonecrosis: la perdida de suministro de sangre en los huesos lo que a futuro causa que el
hueso colapse y el tejido muera. Puede ser causado por alguna lesión, enfermedad crónica,
medicamento mal suministrado y el aumento de presión en los huesos que obstruye y
colapsa el conducto sanguíneo
• Hematógena: conducto sanguíneo

• Enfermedades osteoarticulares:

Las enfermedades osteoarticulares son aquellas que comprometen el sistema musculo

esquelético, hoy en día son las enfermedades más comunes. Diferentes estudios señalan
que el 10% y el 40% de la población general presentan enfermedades osteoarticulares.
Estas enfermedades comprometen permanentemente la vida de los pacientes y son la
primera causa de bajas permanentes laborales puesto que suelen disminuir en gran
cantidad la calidad de vida de los pacientes.

Los principales síntomas son el dolor y la impotencia funcional de alguna parte del
aparato locomotor y las articulaciones

Las enfermedades más comunes son:

o Artritis
o Bursitis
o Capsulitas adhesivas
o Espondilosis cervical
o Fibromialgia
o Osteoporosis
o osteoartritis

Los huesos del cuerpo humano:

Se tomará en cuenta los huesos más largos puesto que esto nos permite analizar la
anatomía en general.

La epífisis proximal: Está formada por un tejido óseo esponjoso en su parte más
profunda y por una capa de tejido óseo compacto en la región más exterior.
Metáfisis: La metáfisis es la región del hueso que comunica los extremos (epífisis) con la
parte central (diáfisis).
Diáfisis: diáfisis es la parte alargada del hueso que empieza justo después de la metáfisis
próxima, a diferencia de la epífisis y de la metáfisis está conformada por tejido óseo compacto
 • Osteomielitis

La osteomielitis se refiere a la inflamación del hueso, causada por una infección de la cortical y la
medula del hueso, más frecuente en los huesos largos del cuerpo como los brazos y las piernas.

• La osteomielitis es causada por la inoculación (feeding) directa, por continuidad o por vía
hematógena (sanguínea) de un microorganismo (bacteria)
• Es mayormente común en los pacientes politraumatizados, diabéticos con lesiones en los
pies con ulceras por presión y portadores de implantes osteoarticulares

TIPOS DE OSTEOMIELITIS:
La osteomielitis de califica según su duración.
• Aguda o crónica
Y según la forma en la que fue infectada: hematógena o por continuidad

• Hematógena es la osteomielitis que llega a el hueso por medio del conducto sanguíneo
provenientes desde otro órgano.
Predomina en los niños y asienta en la metáfisis de huesos largos como fémur y
tibia, En adultos predomina en vertebras dorsales y lumbares afectando más
frecuentemente dos cuerpos continuos y el disco intervertebral.
La osteomielitis hematógena suele ser Mono microbiana y solo el 10% se
cronifican
• La osteomielitis por contigüidad, desde un foco infeccioso adyacente o causada por
inoculación directa tras traumatismo abierto o cirugía (el contacto directo de hueso con el
microorganismo)
o Es la más frecuente en la actualidad y se manifiesta generalmente de forma precoz a
después de la inoculación.
o Los síntomas más frecuentes son el dolor, la tumefacción local y en ocasiones la
superación a través de la fistula
o La osteomielitis por contigüidad siempre es considerada crónica

o Microorganismo involucrado

S. epidermidis es el microorganismo más frecuente en las formas asociadas a material de

osteosíntesis o prótesis articulares. forma parte de los microorganismos normales en la piel y en la
mucosa del ser humano, sin embargo, al entrar en contacto con el hueso u otros organismos puede
generar infecciones. Esta generalmente presente en catéteres o prótesis valvulares cardiacas.
P.aeruginosa es frecuente en osteomielitis asociadas a pie diabético y osteomielitis de huesos del pie
tras heridas punzantes.
Y finalmente Otras bacterias como Brucella spp. y Salmonella spp. son poco frecuentes en la
actualidad. La primera suele causar osteomielitis vertebral y la segunda se puede observar en
pacientes con inmunodepresión o drepanocitosis.

• ¿Qué es un diagnostico?
• En términos de la práctica médica, el diagnóstico es un juicio clínico sobre el estado
psicofísico de un paciente ya sea animal o humano, representa una manifestación en
respuesta a una demanda para determinar tal estado, el único que puede indicar un proceso
diagnóstico o manejo del paciente es el Profesional (Médico clínico que lleva a cabo la
recepción del paciente y realiza tratamiento de emergencia según los casos clínicos del
paciente).

• Diagnósticos microbiológicos
• El diagnóstico microbiológico se basa en la positividad de la tinción de Gram, el
cultivo del líquido sinovial o de la membrana sinovial y en la presencia de un cuadro
clínico compatible asociado a dos o más hemocultivos (cultivo de sangre) positivos
para el mismo microorganismo.
• En los pacientes en los que se produce una osteoartritis por afectación en las
articulaciones axilares (difícil acceso como la sínfisis de pubis, sacroilíacas, etc.) y en
los que no se produce un cumulo significativo del líquido articular y no se puede
extraer muestra para el cultivo, el diagnóstico se basa en la positividad de los
hemocultivos y en las pruebas radiológicas y gammagráficas.
• El estudio microbiológico de líquido articular incluye: la tinción de Gram y la siembra
de medios de cultivo convencionales con incubación aeróbica y anaeróbica.
• Tinción de Gram: Proporciona una información útil e inmediata en relación con el
diagnóstico y la orientación del tratamiento. La sensibilidad y especificidad de la
tinción de Gram no están bien definidas. Para que entiendan es, De las CITOCINAS
INFLAMATORIAS presentes en el LIQUIDO SINOVIAL únicamente el factor de
necrosis tumoral alfa (TFN) presenta una sensibilidad del 95% y especificidad del
71% para un diagnóstico de artritis séptica, pero no se recomienda para su
determinación.

Buscas un Staphylococus aureus = 95% seguro de que hay un Staphylococus pero solo vas a estar un
71% seguro de que va a ser un Staphylococus aureus

• El cultivo del líquido, o de la membrana sinovial es el método diagnóstico definitivo

de la artritis séptica ¿Qué es? (infección del líquido sinovial). En los pacientes con
artritis séptica no tratada, el cultivo del líquido articular resulta ser positivo en el 80
– 90% de los casos. Hay que tener en cuenta que el resultado negativo del cultivo y
en la tinción de Gram no excluye una artritis séptica. En los casos positivos por
cultivo, se deben tratar con antibióticos, pero si los cultivos son negativos y el
recuento celular es mayor a 50.000 células /mm3 y se han excluido otras
enfermedades reumáticas se debe mantener el tratamiento con antibióticos
empíricos.
• Otros aspectos a tener en cuenta:
 Las limitaciones más frecuentes de la positividad del cultivo son la administración de
antibióticos previa a la artrocentesis ¿Qué Es?(La artrocentesis es el procedimiento
 que consiste en la punción articular y extracción de una muestra del líquido sinovial
del espacio articular en una articulación) y a la infección por microorganismos
atípicos.
 El cultivo del tejido sinovial indica principalmente la presencia de microbacterias y
hongos
 No decirlo En la enfermedad de Lyme, el cultivo tiene el máximo valor diagnóstico,
ya que una serología (Estudio de los sueros biológicos, comprueba antígenos y
anticuerpos) positiva no necesariamente establece una conexión entre los síntomas
y la enfermedad.

➢ En resumen, diagnostico en osteomielitis

➢ El diagnóstico microbiológico es crucial para instaurar el tratamiento antibiótico
➢ Las muestras adecuadas para el diagnóstico de la osteomielitis son:
✓ 1. Hemocultivos (Los hemocultivos son una herramienta diagnóstica esencial para
determinar la presencia de microorganismos en sangre como bacterias). Pueden ser
positivos en aprox la mitad de las osteomielitis agudas.

✓ 2. Muestra obtenida por punción de absceso cerrado: En caso de abscesos cerrados

o fistulas aspirará el pus o líquido con una jeringa y una aguja. En ocasiones es
necesario cortar la piel sobre el absceso para llegar al pus en el interior. Esta
muestra es muy útil para el diagnóstico etiológico. Si la obtención de la muestra es
adecuada, se puede evitar el sobrecrecimiento del organismo en la piel.

✓ 3. Biopsia ósea (La biopsia ósea es un procedimiento en el que una pequeña

muestra de hueso se extrae del cuerpo y se analiza con un microscopio para
detectar cáncer, infecciones u otros trastornos de los huesos.) Los cultivos de este
tipo de muestra son positivos hasta en el 87% de los casos de osteomielitis. Se debe
hacer la biopsia antes del inicio de la administración de antibióticos

• Diagnósticos no microbiológicos
• El procedimiento para el diagnóstico no microbiológico o los síntomas frecuentes son, en la
artritis séptica, por ejemplo: Dolor, inflamación, limitación para mover la articulación
afectada y calor. Otros tipos de Artritis como, la artritis por cristales y la artritis reumatoide,
pueden presentar fiebre, inflamación, dolor y rigidez articular.
• Existen diferentes tipos de diagnóstico para la osteomielitis:

-Radiografía simple:
Las radiografías solo muestran alteraciones de partes blandas (inflamación en el músculo) por la
infección. Las lesiones óseas se aprecian cuando existe una pérdida del contenido cálcico al
menos del 36%. Esto ocurre en la segunda semana desde el comienzo de la infección.
-Técnicas gammagráficas (medicina nuclear):
Método más rápido de diagnóstico. Tiene una sensibilidad del 90% pero con una especificidad
del 50%. El Tecnecio-99 meta-estable-metilen-difosfato es captado por el hueso donde aparece
aumento en la vascularización y diferencia lesión ósea de tejido blando. Si se asocia con el
Citrato de Galio 67 la especificidad mejora.
- Tac y RMN:
Método con mayor especificidad y sensibilidad. Detectan edemas, destrucción medular, reacción
perióstica, lesión cortical, daño articular y alteración de partes blandas. La Resonancia magnética
Nuclear (RMN) es especial para el diagnóstico de osteomielitis de columna vertebral
- Ecografía:
En una ecografía se encuentra: absceso (colección) adyacente al hueso y elevación del periostio
de 2mm, engrosamiento del periostio con zonas hipoecoicas, e inflamación de la musculatura y
los tejidos blandos adyacentes
- Estudios histopatológicos (estudio de los tejidos):
Se usa para la confirmación del diagnóstico de osteomielitis. Se hace el estudio de biopsia ósea
donde se observa la necrosis ósea, reabsorción y exudado inflamatorio.
• En Resumen:
→ Obtener la historia minuciosa de todos los antecedentes del paciente, en particular la
existencia de una enfermedad articular subyacente (en especial artritis rumatoide),
presencia de enfermedades de transmisión sexual, enfermedad de Lyme (por garrapatas),
diabetes, etc.
→ Examen cuidadoso de la articulación en cuanto a signos de eritemas, inflamación, calor y
dolor al palpar.
→ Presencia de un derrame y limitación de los movimientos. En la cadera y vertebras los
síntomas pueden estar silenciados y aún más en las personas de edad avanzada.
→ Aspiración urgente del líquido articular (liquido sinovial)
→ Evaluación macroscópica del líquido:
✓ El líquido de una articulación normal es de volumen escaso, claro, sin color y consistencia
viscosa.
✓ Un líquido transparente y viscoso corresponde, en general, a un problema mecánico.
✓ Un líquido con aspecto turbio de color amarillo verdoso es sospechoso de infección articular
✓ El recuento de leucocitos en el líquido sinovial junto con la determinación del porcentaje de
polimorfonucleares constituyen el principal dato diagnóstico, mientras se esperan los
resultados del estudio microbiológico.
✓ Un recuento celular entre 10.000 - 30.000 células/mm3 indica que es poco probable
presencia de artritis
✓ Un recuento celular de 50.000 o más células/ mm3 es altamente sugestivo a artritis séptica
✓ A medida que aumenta el recuento de leucocitos es más probable encontrar artritis séptica
✓ La presencia de eosinofilia en el líquido sinovial indica una infección parasitaria, neoplasia o
enfermedad de Lyme.

o Otros métodos para el diagnóstico microbiológico de las infecciones osteoarticulares

▪ Técnicas biología molecular
▪ En los últimos años se ha resaltado el papel que pueden jugar los métodos moleculares,
sobre todo los basados en PCR (reacción en cadena de la polimerasa).
▪ Los métodos moleculares permiten detectar el ADN o ARN del microorganismo causante de
la infección directamente en la muestra clínica, con una gran sensibilidad y en un tiempo
corto.
▪ El más usado es la PCR. A la hora de diseñar un método de PCR para el diagnóstico de una
determinada infección se siguen las siguientes estrategias:
→ Si la infección es causada por un solo microorganismo o se quiere descartar la infección por
un microorganismo concreto, se diseña una PCR especifica que detecte ese organismo.
→ Si por el contrario la infección que se quiere diagnosticar puede estar causada por múltiples
microorganismos diferentes, se seguirá la estrategia de PCR multiplex o PCR universal que
con una sola reacción de PCR e detecte la mayoría de los microorganismos que pueden
causar la infección.
→ Existen limitaciones al usar el PCR:
 Su facilidad de contaminación al detectar la presencia de ADN contaminante en los reactivos
de PCR y de conservación y procesamiento de pruebas
 Se demoran de 24 a 48 horas en tener un resultado
 Son métodos costosos
 No permiten la detección de infecciones polimicrobianas
 La presencia d ADN no indica viabilidad de los microorganismos.
→ Existen también ventajas:
☺ Con una única reacción de PCR se pueden detectar casi cualquier bacteria
☺ Son fáciles de realizar
☺ Pueden detectar bacterias en muestras de pacientes con tratamiento antibiótico
☺ Detectan microorganismos que no crecen en los métodos de cultivo habituales.
☺ Pueden resultar más rápidos que la identificación tradicional para determinados
microorganismos.
→ Las PCR especificas son en general más sensibles que las PCRs universales, pero solo pueden
detectar microorganismos previamente sospechados.
→ En lo referente a infecciones asociadas a prótesis articulares, la PCR universal se usa para
resolver las limitaciones del diagnóstico basado en cultivo.

o PCR:
El PCR o también conocida como reacción de cadena de polimerasa, es una técnica de la
biología molecular cuyo objetivo es amplificar un segmento de ADN y así poder generar
diferentes pruebas tales como la presencia de un microorganismo que tiene ADN o una
prueba e paternidad.

• El PCR se lleva a cabo por medio de una muestra conformada por

▪ Cloruro de magnesio cofactor vital para las polimerasas
▪ DNA polimerasa TAQ (proviene de una bacteria llamado termofolus
aquiaticus el cual se adapta a altas temperaturas)
▪ Primers: cebadores o iniciadores. Se usan y se unen a la región de interés
• Cuando se está buscando la presencia de un organismo en
específico, se fabrica el primer que contiene el gen de ese
organismo y de esta manera es mucho más fácil distinguirlo
 - Dióxido trifosfato o DNTP son los ladrillos utilizados para formar una nueva
hebra de ADN
• Buffer es lo que proporciona un medio optimo a la enzima

Toda esta muestra se mete a un termociclador:

• desnaturalización: El termociclador sube la temperatura lo cual causa que los
puentes de hidrógenos se rompan
• alineación: los primer forman enlaces de hidrógeno con sus parejas respectivas
• Extensión. La polimerasa empareja los DNTPS con su pareja respectiva

después de todo esto se aplica una prueba de electroforesis:

• Las muestras se muestran con un buffer de carga el cual contiene glicerol y no deja que las
muestras se dispersen
• Se usan colorantes para que se pueda identificar cada una de las muestras
• El primer poso se muestra con una escalera de peso molecular el cual permite identificar la
presencia del organismo de interés

o PCR VERSUS CULTIVOS

PCR: el PCR es un examen totalmente especifico, te ayuda a identificar un microorganismo en

específico, sin embargo, no puede identificar cuando una enfermedad es auto inmunológica puesto
que no hay presencia de ningún microorganismo

LINKS RECOMENDADOS PARA CHEQUEAR EL PCR:

https://www.youtube.com/watch?v=tPtM78RVLM8 (ver este de primeras)

https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-
electrophoresis/v/gel-electrophoresis-dna