1 TITULO:

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

2 RESUMEN:

Se realizó el análisis de La Actividad Enzimática de la reacción en función de la

cantidad enzimática (composición), de la temperatura y del pH. Así mismo se
analizó la especificidad de la acción enzimática, empleando la solución de
almidón. Los resultados obtenidos demostraron que la actividad enzimática se
ve influenciada por la cantidad de enzima presente en solución. La Actividad
Enzimática se ve reflejada con los factores físico-químicos (Temperatura, pH,
concentración de enzima, concentración de sustrato), lo cual permite pensar
que con la cantidad de concentración de la enzima el tiempo de que se necesita
para transformar el sustrato en producto es menor o mayor en la actividad
enzimática. Estos últimos resultados son consistentes por el hecho que las
enzimas son catalizadores biológicos de una reacción. Así mismo se demostró
que la temperatura tiene un efecto importante en la Actividad enzimática. Si la
temperatura aumenta considerablemente la reacción puede no producirse
debido a la desnaturalización de la enzima. Si la temperatura es alta y propicia
se obtienen los productos de la acción enzimática sobre el sustrato, siendo 38°
a 37°C la temperatura óptima para la acción enzimática del almidón. De igual
forma se pudo observar que la reacción enzimática también se ve influenciada
por el cambio del pH del medio hasta alcanzar un pH óptimo, el cual para el
almidón está alrededor de 5 a 9 (6.6) cerca del pH neutro lo que no sucede con
un pH muy básico o muy acido ya que estas condiciones pueden desnaturalizar
a la enzima.
3 FUNDAMENTACION:

Se realizó este trabajo con la finalidad de poner en manifiesto la importancia de

recocer, de productos que se pueden encontrar en las muestras, debido a la
actividad enzimática que ésta posee a su especificidad, una vez identificados,
podremos saber la velocidad de reacción, si hay productos, degradaciones,
cambios en su estructura, etc.

4 INTRODUCCION:

La Actividad Enzimática, es decir, la función de una enzima se puede

determinar midiendo la cantidad de sustrato que desaparece o la cantidad de
producto formado por unidad de tiempo, viéndolo de esta forma en realidad se
mide la velocidad de la reacción. Esta contiene factores que afectan la actividad
enzimática:

- Concentración de sustrato
- Concentración de Enzimas.
- Temperatura
- pH
- Presencia de inhibidores, etc.

5 OBJETIVOS:

- Familiarizarse con el concepto de Actividad Enzimática

- Determinar la Actividad Enzimática de los sistemas propuestos.
- Características de las Actividades Enzimáticas.

6 MATERIALES Y METODOS:
a) Materiales:
- Tubos de Ensayo
- Incubadora para Baño María
- Cocina Eléctrica
- Pipetas
- Gradilla
- Reactivos

b) Métodos:

ETAPA A

SISTEMA
COMPONENTES I II
Solución de 5ml 5ml
almidón al 1% pH
6.6
Solución de 1ml 1ml
Cloruro de Sodio
0.1M
Agua Destilada 4ml 3ml

1 Colocar los tunos al BAÑO MARÍA DE AGUA A 37°C, por 5

minutos.
2 AGREGAR 1ml. De ENZIMA al tubo II, sin retirar del B.M.
3 Seguir con el BAÑO MARÍA DE AGUA A 37°C, durante 30 minutos.
4 CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR EL SUSTRATO
RESIDUAL.
De cada uno de los tubos de incubación (de la etapa A) trasferir 0.1ml. De sus
correspondientes del cuadro siguiente del cuadro siguiente (etapa B).
Inmediatamente de cumplidos los 30 minutos de incubación.

ETAPA B

SISTEMA
COMPONENTES I II
De los tubos I y II: 01ml 01ml
De la Etapa A.
Ácido Clorhídrico 5ml 5ml
0.05 N
Solución Yodada 0.5ml 0.5ml

Mezclar: Observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad

del color resultante.

ETAPA C

SISTEMA
COMPONENTES I II
De los tubos I y II: 1ml 1ml
De la Etapa A.
Benedict 1ml 1ml

7 RESULTADOS:
 ETAPA A: En este sistema se determina la actividad enzimática, porque es
alterada por lo niveles de pH, en este caso, el pH es óptimo porque está en 6.6.

La reacción se evidencia cuando cambia de color, de Blanco lechoso a

transparente, porque se alteró su pH. Al ser almidón una proteína, uno
esperaría que la proteinasa le haga perder su funcionalidad, sin embargo esto
no ocurrió, puesto que luego de un determinado periodo de tiempo se observó
el efecto acromático.

ETAPA B: En este sistema la alteración que sufre la actividad enzimática al ser

sometida a T° alta produce que la enzima se pueda inhibir, reaccionar
adecuadamente o desnaturalizar.

La temperatura incrementa la cinética de la reacción enzimática, es decir

aumenta la velocidad de reacción pero solo hasta el punto en el cual, por acción
de la misma temperatura, se inactiva la enzima. Se evidencia por que cambia el
color Blanco Lechoso a un color Mostaza oscuro, que indica que se ha alterado
su estructura original y hay menos productos.

ETAPA C: En este sistema identificamos que la alta concentración de sustrato

al igual que los demás factores afecta la velocidad de la reacción enzimática,
este factor produce que la reacción sea más lenta. Es evidente que a bajas
concentraciones del mismo la velocidad de formación de producto es
proporcional a la concentración del sustrato o viceversa.

La coloración Azul, producto de Benedict, indica que la Concentracion de

sustratos y productos es baja, contrariamente, si se nos mostraba un Amarillo
como resultado, la concentración de sustratos y productos era alta.

8 DISCUSION:
Al analizar los resultados, obtenemos que al utilizar un pH ácido, hay actividad
enzimática, esto se debe a que la enzima al someterla a un pH muy básico (3.6)
se desnaturaliza; utilizando un medio de pH optimo (6.6) la enzima va a desarrollar
una velocidad de reacción enzimática alta y al someterla a un medio de pH muy
acido (10) al igual que con el pH básico la enzima se va a desnaturalizar. Doran,
P. (1998)

En el caso de pH 6.6, al hacerlo reaccionar con los indicadores como el Benedict y

la solución yodada en la etapa B y C, da un color azul que es la indicación de que
no hay actividad enzimática por lo que no hay velocidad de reacción; lo contrario
sucede con la solución yodada, que muestra un color marrón oscuro. Según
UNAMB, (2000). Indica que hay actividad enzimática (muy lenta en relación a los
resultados y muy rápida en relación a otro grupo de práctica).

Al medir el efecto de la temperatura se mide la actividad enzimática en el almidón

a temperatura normal y no se presentaron cambios de color significativos, es decir
que el color nunca desapareció. Por lo tanto, se podría decir que el almidón no
actuó. A diferencia de las otras temperaturas, en la temperatura de 37°C sí se
presentaron cambios, porque el almidón al igual que las otras enzimas tienen su
propio rango de temperatura optima, al encontrarse en el cuerpo siempre tiene
una temperatura de 37°C y en esta temperatura ocurre una velocidad alta en las
reacciones enzimáticas.

Los resultados obtenidos en relación al factor de la concentración de sustrato

muestran que la enzima al reaccionar con menor concentración como 1ml de
almidón, la velocidad de la actividad enzimática es alta lo que no sucede con una
concentración de almidón elevada, ya que al haber más sustrato (almidón) la
enzima va entra a un estado de saturación, lo que provoca la disminución de la
velocidad en la actividad enzimática. Doran, P. (1998).
Analizando los colores de las reacciones obtenemos, que el color azul es dado por
la solución yodada al interactuar con el almidón e indica que no hay actividad
enzimática ya sea por inactivación, desnaturalización, concentración de la enzima.
Según José O. Valderrama, (2012). El color mostaza oscuro es producido por la
solución de Benedict que reacciono con los azucares reductores (aquellos que
tienen su OH libre del C anomérico) como glucosa, maltosa, celobiosa y lactosa,
los cuales actúan sobre el cobre reduciéndolo

Estos resultados obtenidos nos muestran la estrecha relación que existe entre los
factores físico-químicos con la velocidad de reacción enzimática. Los la
interpretación de los resultados obtenidos están dados en comparación de las
muestra de los otros grupos de practica ya que en nuestras reacciones hubo una
variación mínima debido al error humano (no siguiendo la secuencia de la práctica,
un mal manejo de los instrumentos, y reactivos).

9 CONCLUSIONES

- El Almidón tiene un pH y una temperatura óptima para que no sufra

inhibición, desnaturalización o disminución en la velocidad de la actividad
enzimática.

- Para que el Almidón no sufra variaciones en velocidad de reacción

necesita una concentración de sustrato en relación a la concentración de la
enzima para poder desarrollar la actividad enzimática de una manera
rápida.

- La solución de Benedict nos ayuda a detectar la presencia de azúcares.

 - Los factores que afectan la actividad enzimática: Concentración de sustrato,
Concentración de Enzimas. Temperatura, pH, Presencia de inhibidores, etc.

10 BIBLIOGRAFIA

- Doran, P. En: “principios de ingeniería de los bioprocesos”. Editorial acribia

SA. Zaragoza. 1998; 126 – 130.
- Colegio de Ciencias y Humanidades Plantel Sur UNAMB
- Diccionario de medicina/Océano Mosby
- www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz1.htm
- José O. Valderrama. En: Información tecnológica, 2012, 16 - 17
 Universidad Nacional de Cajamarca
Ingeniería en Industrias Alimentarias
Facultad de Ciencias Agrarias

Tema:

“DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA”

Nombres:

Montoya Viera, Walter

Curso:

BIOQUÍMICA - Práctica

Profesor:

Salomón Murrugarra

Ciclo:

“III“
Cajamarca, 12 de Mayo del 2014