UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DEL VALLE DE TOLUCA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

GRUPO IBT5MB

FUNDAMENTOS DE BIOPROCESOS

PRÁCTICA 3: EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD Y LA VELOCIDAD

ENZIMÁTICA

FACILITADOR: ARAUJO GUZMÁN ALMA FABIOLA

ALUMNOS:

● AGUILAR NAVA MARÍA FERNANDA

● GARCÍA DÍAZ DANIELA GUADALUPE

● RAMÍREZ PERDOMO JUAN CARLOS

● RUIZ MARTINEZ MARIAJOSÉ

● SALGADO OTAÑEZ KARLA YARELI

ALMOLOYA DE JUÁREZ, 15 DE FEBRERO 2022.

RESUMEN

Se realizó el análisis del efecto del pH en la actividad enzimática del producto

obtenido de nuestro trigo (enzima α-amilasa) en donde primero se obtuvo el
sustrato y se dividió en tres tubos diferentes para poder manipular a tres diferentes
temperaturas; se le añadió a cada tubo una solución de pH a diferentes medidas del
mismo; se colocaron a baño maría para obtener la temperatura óptima de la enzima
y poder observar a qué medidor reaccionaba y se observó el cambio de coloración
en la reacción.
INTRODUCCIÓN

Una enzima es un catalizador biológico. Es una proteína que acelera la rapidez de

un cambio químico específico en la célula. La enzima no se elimina a lo largo de la
actitud y se usa constantemente. Una célula tiene una gran cantidad de diversos
tipos de moléculas de enzimas concretas para cada reacción química especial.

Las características de las enzimas derivan del hecho de ser proteínas y de actuar
como catalizadores. Como proteínas, tienen una conformación natural más estable
que las otras conformaciones probables. De esta forma, cambios en la conformación
acostumbran ir asociados a cambios en la actividad catalítica. Los componentes que
influyen de forma más directa sobre la actividad de un enzima son:

● pH: La mayor parte de las enzimas resultan muy propensas a los cambios de
pH. Desviaciones de escasas décimas por arriba o por debajo del pH óptimo
tienen la posibilidad de influir extremadamente en su actividad.
● Temperatura: Generalmente, los aumentos de temperatura aceleran las
actitudes químicas: por cada 10ºC de crecimiento, la rapidez de actitud se
duplica.La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se
denomina temperatura óptima. Por arriba de esta temperatura, el crecimiento
de rapidez de la actitud gracias a la temperatura es contrarrestado por la
pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la
actividad enzimática decrece inmediatamente hasta anularse.
● Cofactores: Una vez que los cofactores y las coenzimas se hallan juntos
covalentemente a la enzima se denominan equipos prostéticos. La manera
catalíticamente activa de la enzima, o sea, la enzima unida a su conjunto
prostético, se denomina holoenzima.

Las enzimas poseen una gigantesca pluralidad de funcionalidades en la célula:

degradan azúcares, sintetizan grasas y aminoácidos, copian fielmente la
información genética, participan en el reconocimiento y transmisión de señales del
exterior y se delegan de degradar subproductos tóxicos para la célula, entre muchas
otras funcionalidades vitales.
MARCO TEÓRICO

“Efecto del pH sobre la actividad y la velocidad enzimática”

Se comprobará y analizará el efecto de las temperaturas en relación con las

reacciones de pH ideales de la temperatura adecuada de la alfa-amilasa. Para ello
nos basaremos en las temperaturas ideales de crecimiento de la enzima, mediante
la obtención de la misma a partir del almidón del trigo, para su posterior filtrado para
dar seguimiento a el cambio de coloración de valores establecidos de pH (Reactivo
Buffer pH 5.0, 7.0 y 9.0).

Recordando que el efecto del pH sobre la catálisis enzimática refleja el estado de

ionización de algunos aminoácidos importantes para que se lleve a cabo la
reacción catalítica.

A demás de que la mayoría de las amilasas utilizadas en la sacarificación del

almidón no son estables a pH ácido por lo tanto se comprobará que en las al añadir
el reactivo de Buffer a temperaturas ideales (37 °C) existirá un cambio de coloración
reaccionando con 7.0, acercándose a valores ideales estudiados.

En toda reacción enzimática si se incrementa la concentración de la enzima, se

formará una mayor cantidad de producto por unidad de tiempo. El incremento en la
concentración de enzima es directamente proporcional al incremento de la velocidad
de reacción siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea limitante,

La concentración afecta la velocidad de reacción en muchas formas. El proceso

catalítico usualmente requiere de que la enzima y el sustrato tengan grupos
químicos en una forma iónica para poder interactuar, el pH modifica el estado y por
tanto la velocidad de reacción.
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

El objetivo principal de la práctica propuesta es la identificación de la estructura

química y los factores que afectan la actividad enzimática, haciendo uso de
procedimientos vistos de manera previa en las prácticas anteriormente realizadas.

Material de laboratorio:
Tubos de ensaye 1.5 x 15 cm.
Vaso de ppdo. 250 ml.
Gradillas.
Pipetas 1ml.
Mechero y tina para baño maría.
Reactivos:
Buffer pH 5.0
Buffer pH 7.0
Buffer pH 9.0
Equipo:
Potenciómetro.
Material biológico:
Enzima
De acuerdo al tipo de enzima para la determinación de su actividad.
Sustrato (dependiendo del tipo de enzima).

PROCEDIMIENTO

Preparación de la enzima:

● A partir de semillas germinadas, prepare 30 mL de un macerado acuoso con

10 g de semillas de germen ya germinadas en agua a una temperatura de
50°C.
● Deje reposar de 15 - 20 minutos entre 30-45ºC y filtre el extracto obtenido .
● Añada 5 gotas de glicerina para extraer lo más posible las enzimas.
Preparación del sustrato:

● Realizar una solución al 10% de almidón de maíz

Efecto del pH en la actividad enzimática:

● En un vaso de precipitados de 250 ml prepare un baño a una temperatura de

37 °C.
● Tome 3 tubos de ensayo, para después se proceda a su etiquetado del 1 al 3.
● En los tubos del 1 al 3 agregue los reactivos en el orden de la siguiente tabla

Tubo 2 ml 0.8 ml 2 ml
1 Substrato Sol. pH 5.0 Extracto
2 Substrato Sol. pH 7.5 Extracto
3 Substrato Sol. pH. 10.0 Extracto

Finalmente Incube los 3 tubos 30 minutos a la temperatura óptima de la enzima (37

°C). Detenga la reacción colocando los tubos en un baño de hielo.
RESULTADOS Y DISCUSIONES

Una vez realizada la experimentación analizamos los resultados. Para que se

pueda llevar a cabo esta reacción se utilizaron tres pH diferentes, todos a la misma
temperatura de 37°C pues a esta temperatura ocurre la reacción de la alfa amilasa,
una vez que se macero el trigo y filtro agregamos la alfa amilasa le agregamos 1 mL
de pH de 4,7,9 de cada uno en un tubo diferente

Buffer con pH de 4 La reacción no se llevó

a cabo pues no cambió
a su tono original.

Buffer con pH de 7 Cambia de color y de

vira al color original con
el que se comenzo

Buffer con pH de 9 no cambia de color, es

decir, no hay una
reaccion

Estos resultados obtenidos nos indica que hay una presencia de la enzima alfa
amilasa reaccionada en la del pH de 7 pues cambio de color, a comparacion coN
los otros pH este volvio a su color inicial posterior a 30 minutos de reposo a una
temperatura consyante , esto quiere decir que a una temperatura constante de
37°C y con un pH de 7 la reacción se va a poder a llevar a cabo en sus propias
condiciones y en determinado tiempo, para realizar la acitividad enzimatica.
CONCLUSIONES

El resultado en la presente práctica fue corroborar mediante la preparación de las

semillas germinadas, preparadas en un macerado acuoso a una temperatura de
50°C y la filtración de los mismos con la glicerina integrada, se pudo concluir que a
partir del sustrato obtenido y la división del mismo a las mismas proporciones en los
3 tubos de ensayo con la solución de pH: el tubo que tenía el pH de 10 no sucedió
nada teniendo una reacción neutra, sin cambio alguno mientras que en el pH de 7
cambiaba, por lo cual pudimos concluir y llegar a una discusión de que la amilasa
reacciona con un pH cercano a 7.
ANEXOS
REFERENCIAS

● KIRK, O., BORCHERT, T.B. Y FUGLSANG, C.C. Industrial Enzyme

applications, Curr Opin Biotechnol, 13, 345­51, 2002.
● Yañiquez Vedia, Jorge F., Huanca Lopez, Susana, Tejeda, Leslie K., Aliaga
Rossel, Enzo, Peñarrieta Loria, J. Mauricio, Mollinedo Portugal, Patricia A..
(2019). Determinación de los parámetros temperatura, pH y concentración
para la nueva enzima α-Amilasa Mg. Revista Boliviana de Química, 36(1),
51-59. Recuperado em 14 de feveiro de 2022, de
http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0250-546020190
00100005&lng=pt&tlng=es.