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1. OBJETIVOS
1.1 Demostrar el efecto o influencia del pH sobre la velocidad de reacción de la
amilasa.
1.2 Demostrar el efecto o influencia de la temperatura sobre la velocidad de
reacción de la amilasa.
2. INTRODUCCION
Respecto al pH, las enzimas requieren, para actuar con máxima eficiencia, una
determinada concentración de iones hidrogeno en el medio, por tanto, cada enzima tiene
un pH óptimo de acción. El efecto del pH se explica por la acción de la concentración
de protones en la disociación de distintos grupos del sustrato y en especial de la enzima,
que participan tanto en la unión enzima-sustrato y en el mecanismo catalítico mismo,
como en el mantenimiento de la determinada conformación de la enzima. A valores de
pH por encima o por debajo del pH optimo, disminuye la actividad enzimática por lo
que, generalmente se describe una curva en forma de campana.
Respecto a la temperatura, al igual que el pH, existe un rango, algunas veces muy
pequeño, donde es máxima la actividad enzimática, que está determinado por la
magnitud de las variaciones de la velocidad inicial en función de la temperatura del
medio, lo que significa que la velocidad inicial de reacción aumentará con la
temperatura hasta que se haga prácticamente imposible de medir debido a una
activación. La mayoría de las enzimas son completamente inactivadas por encima de los
70 °C.
Las moléculas deben poseer cierta energía de activación para que puedan reaccionar y
las enzimas actúan disminuyendo la energía de activación, permitiendo que la reacción
avance rápidamente. Se puede determinar fácilmente el efecto de la temperatura,
INSTRUCTIVO
DEMOSTRACION DEL EFECTO DEL pH Y Página: 2 de 10
LA TEMPERATURASOBRE LA VELOCIDAD
DE LA REACCIÓN ENZIMÁTICA
Para estudiar el efecto de estos factores sobre una reacción enzimática, se debe trabajar
en condiciones de operación bien determinadas. Los otros paramentos o factores, deben
permanecer constante respecto al factor determinante. Para ello se trabajará como
sustrato almidón y se determinara las variaciones del almidón según procedimiento de
identificación y cuantificación de sustrato residual, utilizando solución iodada.
3. MATERIAL METODOS
3.1 Material Biológico :
Amilasa
3.2 Materiales:
Pipetas
Tubos de ensayos
Baño maría
Cocina eléctrica
Balanza
3.3 reactivos
Solución buffer acetato.
Solución buffer fosfato.
Solución buffer carbonato.
Solución de almidón al 1%.
Solución de enzima al 1%.
Solución NaCl 0.1M
HCl 0.05 M
Solución Iodada
Sol. Cúprico alcalino
4. PROCEDIMIENTO:
SISTEMA (Tubos)
COMPONENTES Y PROCESO
Blanco 1 2 3
Soluc. HCl 0.5N 4.0 4.0 4.0 4.0
Agua destilada 0.5 - - -
De los tubo 1-3 parte A - 0.5 0.5 0.5
Solucion Iodada 0.5 0.5 0.5 0.5
SISTEMA (Tubos)
COMPONENTES Y PROCESO
Blanco 1 Blanco 2 1 2 3
Soluc. HCl 0.5N 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
Agua destilada 0.5 - - - -
Soluc. Almidón 1% - 0.5 - - -
De los tubo 1-3 parte A - - 0.5 0.5 0.5
Solucion Iodada 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
5. RESULTADOS:
INDICADOR T1 T2 T3
pH 4 pH 7 pH8
Presencia de sustrato No No No
residual (Almidón)
Actividad amilásica Si Si Si
INDICADOR T1 T2 T3
0°C 37°C 100°C
Presencia de almidón Si No Si
residual
Actividad amilásica No Si No
INSTRUCTIVO
DEMOSTRACION DEL EFECTO DEL pH Y Página: 6 de 10
LA TEMPERATURASOBRE LA VELOCIDAD
DE LA REACCIÓN ENZIMÁTICA
6. DISCUSIONES:
7. CONCLUSIONES
8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
CUESTIONARIO:
2.
Efecto de pH
Efecto de
Temperatura
3.
4.
- La estabilidad enzimática es la medida en que una enzima mantiene su
actividad o conformación estructural cuando es sometida al
almacenamiento, aislamiento y purificación o varias otras
manipulaciones físicas o químicas incluyendo enzimas proteolíticas y
calor.
- El pH es una medida del grado de acidez o alcalinidad de una
sustancia; el grado de acidez o alcalinidad afecta la estabilidad de
algunas sustancias, en particular, sustancias orgánicas
- Las enzimas son proteínas que frecuentemente son inactivadas
cuando son expuestas a temperaturas demasiado altas