7- ) PRE LABORATORIO:

1. EMPLEO DE LA LEY DE LAMBERT-BEER EN MEZCLAS DE ANALITOS

LEY DE LAMBERT-BEER

Si se hace incidir radiación monocromática sobre una muestra con una

Concentración “C” de una sustancia que absorbe a esa longitud de onda “l”, la intensidad

De la radiación que la atraviesa, I, está relacionada con la intensidad incidente

I0 y con el espesor de la muestra,l , por la expresión :

-€/c
I = Io Ǝ10

Aplicando logaritmos:

Log I = Log I

Reordenando términos:

Log Io - Log I = €

Pudiéndose escribir:

Log Io/I = € l c

Habitualmente, el cociente I/Io se denomina “transmitancia” de la muestra y se suele expresar

Ǝ100
como porcentaje de luz transmitida: I/Io .

Por otra parte, se define la “absorbancia” de la muestra como: A = log (1/T). Tanto la
absorbancia como la transmitancia son magnitudes que se obtienen directamente en el
espectrofotómetro.

Según estas definiciones, queda finalmente la siguiente expresión que se conoce con el
nombre de la ley de Lambert-Beer:

A=€lc

Donde € es la “absortividad molar” (una medida de la radiación absorbida), que es un valor

constante para cada sustancia a cada longitud de onda λ y en unas condiciones experimentales
determinadas; también se denomina “coeficiente de extinción molar” si, como es frecuente, la
concentración se expresa en moles por litro.

Si se opera, por tanto, a una longitud de onda dada y con una cubeta de un determinado
espesor, l , la absorbancia A, medible directamente, es proporcional a la concentración molar
de la muestra, c, lo que constituye el fundamento del análisis espectrofotométrico
cuantitativo.
Existen, sin embargo, distintos factores que afectan al cumplimiento de la ley de Lambert-Beer,
especialmente a concentraciones elevadas.

Por ello antes de proceder al análisis de una muestra es preciso comprobar

experimentalmente el rango de concentraciones en que dicha ley se cumple, obteniendo la
curva de calibrado que relaciona las absorbancias con las concentraciones.

La ley de Lambert-Beer puede también aplicarse al análisis cuantitativo de mezclas de dos o

más sustancias, siempre que sus respectivos espectros de absorción sean lo suficientemente
distintos.

El procedimiento se basa en que la absorbancia es una propiedad aditiva, de tal forma que la
absorbancia total de una mezcla es la suma de cada uno de los componentes. Así, para una
mezcla de dos componentes, 1 y 2, que absorben radiación de una misma longitud de onda, se
cumplirá que:

A = A1 + A2 = €1 l c1 + €1 l c2

Supongamos, entonces, que nuestro problema es el análisis de una mezcla de dos sustancias.
En primer lugar se habrá de registrar el espectro de absorción de cada una de ellas por
separado, con lo que nos podremos encontrarnos en una de las dos situaciones siguientes:

a) Ambos espectros no presentan solapamiento en el margen de longitudes de onda de

trabajo. El problema se reduce, entonces, a sendos análisis por separado, cada uno en la zona
del espectro en donde cada componente de la mezcla se presenta como único absorbente.

b) Ambos espectros presentan solapamiento en una zona determinada de longitudes de onda.

En este caso se han de seleccionar dos longitudes de onda diferentes, €1 y €2, y obtener, con
disoluciones de las sustancias puras, las respectivas absortividades molares a cada longitud de
onda:

k1 k2 k1 k2
€1 , €1 , €2 , €2

Con estos datos se pueden determinar las concentraciones de los dos componentes de la
mezcla a partir de las medidas de la absorbancia de la misma a las longitudes de onda de
x1 x2
trabajo seleccionadas, A y A . El cálculo se realiza resolviendo el siguiente sistema de 2
ecuaciones con 2 incógnitas:

k1 K1 K1
A = €1 l C 1 + €2 lC2

k2 K2 K2
A = €1 l C 1 + €2 lC2
 CARACTERÍSTICAS DE UN ESPECTROFOTÓMETRO UV-VISIBLE

La medida de la absorbancia se lleva a cabo con la ayuda de un espectrofotómetro, que en

esencia consta de un monocromador (prisma o red de difracción) que controla la longitud de
onda de la radiación que se hace incidir sobre la muestra.

La radiación no absorbida se detecta y mide convenientemente. La absorbancia de la muestra

se compara con la de una “referencia” que consta estrictamente de disolvente.

Las instrucciones generales de manejo de un espectrofotómetro serían:

1.- Encendido de lámparas:

1.1. Lámpara de tungsteno (zona del Visible, 900 a 340 nm), encendido instantáneo.

1.2. Lámpara de Deuterio (zona del UV, 340 a 200 nm aprox.), necesita un calentamiento
previo.

2.- Adaptación del espejo a la lámpara adecuada, atendiendo al rango de longitud de onda de
trabajo (sólo en los espectrofotómetros no automáticos).

3.- Seleccionar el valor de longitud de onda con el mando correspondiente.

4.- Ajuste del cero de transmitancias (tapa levantada) con ayuda del mando “Ajuste del cero”,
hasta que aparezca CERO en la pantalla.

5.- Ajuste del 100% de transmitancia (0 de absorbancia) con la referencia, que normalmente
es el disolvente de la muestra, utilizando para ello el mando “A-T”.

6.- Leer el valor de Absorbancia/Transmitancia de la muestra.

Las cubetas empleadas en el espectrofotómetro (1.00 cm de espesor) deben estar

escrupulosamente limpias y deben cogerse siempre por sus caras esmeriladas u opacas.

No es conveniente secarlas o limpiarlas con papel ordinario por el carácter abrasivo de éste
sino con un papel suave.

APLICACIONES DE LA TÉCNICA DEL EMPLEO DE LA LEY DE LAMBERT-BEER EN MEZCLAS DE

ANALITOS

Una de las aplicaciones prácticas de mayor interés de la espectrofotometría de absorción UV-

Visible es la del análisis cuantitativo, basada en la aplicación de la ecuación de Lambert-Beer

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA EMPLEO DE LA LEY DE LAMBERT-BEER EN MEZCLAS DE ANALITOS

Se trata de analizar la composición de una disolución que contiene una mezcla del indicador

Azul de Bromo timol en su forma molecular HA (ácida) y disociada A- (básica), las cuales
presentan absorción en la región VISIBLE del espectro. Las propiedades espectrofotométricas
del Azul de Bromotimol en ambas formas son diferentes, lo que permite su cuantificación en
disoluciones en las que aparecen mezcladas.

Para ello habrá que registrar los espectros de absorción de las dos formas (ácida y básica) y
obtener las correspondientes rectas de calibrado a dos longitudes de onda seleccionada.
2. SELECCIONE LA LONGITUD DE ONDA PARA LA LECTURA DE ANALITOS EN MEZCLAS
PROBLEMA.

Para ello vamos a utilizar las disoluciones “A” respectivas preparadas anteriormente.
En cada caso, llenaremos una cubeta con la referencia adecuada y otra con la muestra
a medir. A continuación, iremos midiendo el valor de la absorbancia de la muestra a
distintas longitudes de onda entre 400 y 680 nm, haciendo las medidas a intervalos de
10 nm.
Es importante tener en cuenta que, cada vez que se modifique el valor de la longitud
de onda, hay que ajustar de nuevo el cero de absorbancia con la referencia.
Finalmente, se representan los datos en papel milimetrado, de manera que figure la
absorbancia “A” en ordenadas frente a longitud de onda “l” en abscisas.

3. DETERMINACION DE LAS ABSORTIVIDADES MOLARES EN MEZCLAS QUE CONTIENEN

DOS ANALITOS

Adquirir destreza en la realización de medidas experimentales de absorbancia y su

aplicación a la determinación de la concentración de una mezcla de permanganato y
dicromato potásicos.

Cuando en una disolución hay varias sustancias que absorben radiación, es posible, en
muchos casos, llevar a cabo su determinación sin necesidad de separar previamente
los distintos componentes.

Cuando se trata de dos componentes, M y N, cuyos espectros de absorción están

superpuestos a todas las longitudes de onda, la forma de proceder es medir las
absorbancias A1 y A2 a las longitudes de onda λ1 y λ2 respectivamente, y planteando
las ecuaciones siguientes:
 A1 = εM1 b CM + εN1 b CN (a λ1)

A2 = εM2 b CM + εN2 b CN (a λ2)

Esto es posible porque la ley de Beer establece que la absorbancia es una propiedad
aditiva, de forma que la absorbancia total de una disolución a una longitud de onda
dada es igual a la suma de las absorbancias de los componentes individuales
presentes.
En las ecuaciones anteriores, b representa el camino óptico y εM1, εM2,
εN1 y εN2 las absortividades molares de M y N a las longitudes de onda λ1 y
λ2, que deben ser determinadas previamente a partir de disoluciones patrón, o mejor,
A partir de las pendientes de sus representaciones de la ley de Beer.
 8-) CUESTIONARIO:

1.- EXPLIQUE UD.LA SELECCIÓN DE λ1 Y λ2.

Curva de Calibración
Denominamos espectro de una sustancia a la representación de absorbancia (A) en
función de
longitud de onda (λ),este gráfico presenta ondulaciones con máximos y mínimos.
Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda
correspondiente a un máximo, pues el error de medición es mínimo y la sensibilidad
máxima.
Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de
calibración;
absorbancia (A) en función de concentración (c), para lo cual se preparan soluciones de
la sustancia
de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la longitud de onda elegida.
Si es válida la ley de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe
ser una recta,
que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan desviaciones
debidas a
diversos factores.

Si es válida la ley de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe
ser una recta, que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan
desviaciones debidas a diversos factores.
2.- DETERMINE LAS ABSORTIVIDADES MOLARES

ABSORTIVIDAD Y ABSORTIVIDAD MOLAR

La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del camino b a través de la

solución y la concentración c de la especie absorbente. Estas relaciones se dan como:
A = a·b·c

Siendo a una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a

dependerá de las unidades empleadas para b y c. A menudo b es dada en términos de
cm y c en gramos por litro, entonces la absortividad tiene unidades de l·g–1·cm–1.

Cuando la concentración se expresa en moles por litro y la longitud de la celda en

centímetros, la absortividad se llama absortividad molar, se designa como ε y tiene
unidades de L·mol–1·cm–1, entonces la absorbancia es:

A = ε·b·

3.- PARA UN VOLUMEN DE 50 ml DE SOLUCION PROBLEMA.DETERMINE USTED LA

CONCENTRACION DE Cr y Mn.