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PRÁCTICA: ESPECTROFOTOMETRÍA
OBJETIVOS
Obtener el espectro de absorción del colorante E-124 y determinar, a partir del espectro,
a) El coeficiente de absortividad molar k del colorante y b) la concentración de una
muestra problema.
INTRODUCCIÓN
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la
detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su
aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y
estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos de la
espectrofotometría son relativamente sencillos.
A + h A*
1
Análisis de alimentos 2
Absorbanci
A*(1)
B*(1)
1 2
3
molécula A molécula B
4 2 1 3
Longitud de onda
LÁMPARA
LUZ DE "COLOR"
LUZ "BLANCA"
DETECTOR DE LUZ
MONOCROMADO
MUESTRA A ANALIZAR
I0
If
L
R
2
Análisis de alimentos 2
La intensidad del haz de luz se va atenuando a medida que atraviesa la cubeta debido a
la absorción de las moléculas de la muestra. El ritmo de absorción depende de la
intensidad inicial de luz y de la concentración de moléculas. De esta manera, cuando un
haz de luz de intensidad I recorre una distancia dL en una muestra con una
concentración de moléculas [B], se produce una atenuación de intensidad dI dada por:
dI k B I dL
I f I 0 e k BL
PARTE EXPERIMENTAL
ESPECTRO DE ABSORCIÓN DE UN COLORANTE Y DETERMINACIÓN DE
CONCENTRACIONES
1
En realidad, la ley de Beer-Lambert se define con una potencia de 10, en lugar de una exponencial. Para
corregir este hecho basta recordar que ln x = (ln 10) log x. El coeficiente de absorción molar sería en
rigor =k/ln10.
3
Análisis de alimentos 2
Procedimiento
1. Preparación de 4 disoluciones patrón de colorante E-124 a partir de una disolución
concentrada del colorante (concentración 0,15 g/l de colorante rojo E-124) que se
proporciona ya preparada. En la preparación de las disoluciones patrón se utilizarán:
4
Análisis de alimentos 2
¿Por qué, en el caso concreto del colorante considerado, no era necesario usar un
tampón de pH, sino que podrían haberse realizado las medidas en agua destilada
sin tampón? Recurrir a datos de la literatura para contestar a esta pregunta.
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Análisis de alimentos 2
ANEXO
N N SO3Na
SO3Na
SO3Na
Este colorante, al igual que la mayoría de los colorantes de su clase y de otras clases,
puede perder un protón (H+) en medio básico:
AH ↔ A- + H+
En las condiciones en las que se realiza esta práctica, el color se debe a la molécula
neutra. A menudo, el anión correspondiente tiene otro color o es incoloro. Esto se
podría comprobar en la práctica echando unas gotas de NaOH 1 M a una pequeña
cantidad de la disolución 4.
También sería posible, en una ampliación a la práctica, medir el espectro de un segundo
colorante y ver como interfiere en la determinación de la concentración de E-124.