P. 1
curva de calibración

curva de calibración

|Views: 23|Likes:
Publicado porRosario Meneses

More info:

Published by: Rosario Meneses on May 15, 2013
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOC, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

08/19/2014

pdf

text

original

TEMA

:
Curva de Calibración

I.

INTRODUCCIÓN La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Principio de la Espectrofotometría Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo. La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas. La espectrofotometría ultravioleta-visible usa haces de radiación del espectro electromagnético, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro. Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce también como rango de uv cercano , la espectrofotometría visible solamente usa el rango del campo electromagnético de la luz visible , de 400 a 800 nm.

Además, no está de menos mencionar el hecho de que la absorción y trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la concentración y de la distancia recorrida. Ley de Beer La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentración en la solución. Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar diluida y en otro tenemos un vaso con la misma cantidad de agua pero con más azúcar diluida. El detector es una celda fotoeléctrica, y la solución de azúcar es la que se mide en su concentración. Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo,las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y moléculas y son absorbidos por estos. Ley de Lambert En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la distancia recorrida por la luz. Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora, pensemos que ambos tiene la misma cantidad de agua y la misma concentración de azúcar, pero, el segundo tiene un diámetro mayor que el otro. Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y moléculas y son absorbidos por estos; de la misma forma que se explicó en la ley de Beer. Ley de Bouguer-Beer-Lambert

Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert (también conocida como ley Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinación de las citadas anteriormente. Transmitancia y absorción de las radiaciones Al hacer pasar una cantidad de fotones o de radiaciones, por las leyes mencionadas anteriormente, hay una pérdida que se expresa con la ecuación: It/Io=T-kdc'' Donde It , es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la celda fotoeléctrica (llamada radiación o intensidad transmitida); y Io que es la que intensidad con la que sale al atravesar la celda (radiación intensidad incidente) y la relación entre ambas ( T) es la transmitancia. En el exponente, el signo negativo se debe a que la energía radiente decrece a medida que el recorrido aumenta. Donde k es la capacidad de la muestra para la captación del haz del campo electromagnético, d es la longitud de la cubeta de espectrofotometría que recorre la radiación, y c es la concentración del soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta. La ecuación simplificada de la ley de Beer-Lambert A = ε.d.c Comprende a la mínima ecuación que relaciona la concentración (c), la absorbancia de la muestra (A), el espesor recorrido por la radiación (d) y el factor de calibración (ε). El factor de calibración relaciona la concentración y la absorbancia de los estándares. La absorción (o absorbancia) es igual a A, la es el logaritmo del reciproco de la transmitancia:1 A= log 1/T lo que es igual a: A= -log T Las ecuaciones mencionados de las leyes son validas solo y solo sì: 1

 

La radiación incidente es monocromática. Las especies actúan independientemente unas de otras durante la absorción.

La absorción ocurre en un volumen de sección trasversal uniforme.

1. REACTIVOS KMnO4 1% Azul de Metileno 1% CuSO4 10 % Anaranjado de metilo 10 mg % 2. EQUIPOS Espectrofotometría 3. PROCEDIMIENTO a) A partir la solución stock de permanganato de potasio al 1% hacer diluciones de 1:10 para un volumen final de 5 mL. Y proceder de acuerdo al siguiente esquema. Tubos Sol KMnO4 Agua Destilada 1 0.25 4.75 2 1 4 3 2 3 4 3 4

b) A partir de la solución de azul de metileno 1% hacer una dilución 1:10 para un volumen final de 5 Ml. Y preparar el siguiente batería. Tubos Sol. Diluida Agua Destilada 1 0.05 4.95 2 0.2 4.8 3 0.4 4.6 4 0.5 4.5

c) A partir de la solución de sulfato de cobre al 10% se prepara la siguiente batería Tubos Sol. CuSO4 Agua destilada 1 0.125 4.875 2 0.25 4.75 3 1 4 4 2 3

d) Leer en el espectrofotómetro cada btería con la longitud de onda determinada en la práctica anterior y anote las lecturas para cada experimento e) Realizar los cálculos correspondientes para encontrar las concentraciones de los 1,2,3 y 4 para cada batería RESULTADOS 1. Graficar las absorbancias vs. Concentración para su respectiva longitud de onda. La práctica consiste en preparar soluciones de concentración creciente de un colorante anaranjado de metilo y leer D.O, Y %T. Asimismo, de determinará la concentración de un problema Procedimiento N° de tubo Anaranjado de Metilo (10 mg %) mL Problema : mL Agua Destilada: mL D.O (Abs) % Transmisión Mg % de anaranjado de Metilo 1 1 4 2 2 3 3 3 2 4 4 1 5 5 6 0.5 3.5

Mezclar, Leer la longitud de onda de máxima absorvancia determinada en el experimento N° 1, colocando a 0 con agua destilada

II.

MATERIALES:

Sol KMnO4 Tubo Tubo Tubo Tubo 1 2 3 4
0.25 1 2 3

Agua destilada
4.75 4 3 2

• • • • •

KMnO4

AGUA DESTILADA TUBOS DE PRUEBA GRADILLA ESPECTROFOTOMETRO

III.

PARTE EXPERIMENTAL
EXPERIMENTO 2: Demostración de la ley de Lambert y Beer. • Se utiliza cuatro tubos de ensayo para preparar la solución .

Luego se procedió a leer la muestra problema y cada una de las soluciones hechas, en el espectrofotómetro:

Y se obtuvieron los siguientes resultados: Muestra problema ABSORBAN CIA M.PROBLEMA 1 0.128 nm TRANSMITA NCIA 74.5 % 86.6 %

0.063 nm M. PROBLEMA 2 ABSORBANCI A 0.115 nm Tubo 1

TRANSMITAN CIA 76.7 % 42.6 % 18.9 % 8.3 %

Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
IV. CUESTIONARIO

0.37 nm 0.722 nm 1.082 nm

1.- CALCULAR LA CONCENTRACIÓN DE LAS MUESTRAS PROBLEMAS La fórmula para hallar la concentración es: A= E x B x C Donde: A: Absorvancia

E: 2.2 ( para todos los valores ) B: 1cm ( para todos los valores ) C: Concentracion Para la muestra problema 1: 0.128 = 2.2 x 1 x C 0.128/2.2 = C ---- C= 0.0581 Para la muestra problema 2: 0.063 = 2.2 x 1 x C 0.063/2.2= C ---- C= 0.0286 5.ESPECTRO DE ABSORCION DEL KMnO4 LONG. DE ONDA 0 320 350 380 410 440 470 500 530 550 570 % TRAMITANCIA 100% 0% 0% 46.30% 75.60% 75.30% 56.50% 18.20% 16.40% 10.40% 24.70% ABSORBANCIA 0 0 0 0.329 0.12 0.124 0.297 0.739 1.083 0.984 0.608

7. EN LA GRAFICA 2 OBTENIDA, HALLE LA CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA PROBLEMA POR EXTRAPOLACIÓN. [MP1]= 0.128 A     [MP]=[0.01][0.128] [MP]=[0.01][0.128] [MP]=[0.01][0.128] [MP]=[0.01][0.128] / / / / [0.115] = 1.11 x 10-2 [0.37] = 3.46 x 10-3 [0.722] = 1.77 x 10-3 [1.082] = 1.18 x 10-3

[MP2]= 0.063 A

   

[MP]=[0.01][0.063] [MP]=[0.01][0.063] [MP]=[0.01][0.063] [MP]=[0.01][0.063]

/ / / /

[0.115] = 5.47 x 10-3 [0.37] = 1.70 x 10-3 [0.722] = 8.72 x 10-4 [1.082] = 5.82 x 10-4

8. Una muestra de solución de permanganato dio una lectura de 0.162. Hallar su concentración.

[KMnO4 1 x 10-2M] --- 0,420 X --- 0,162 X = [1 x10-2 M] x 0,162 ------------0,420 X = 3.86 x 10
-3

M de concentración

Tubo Tubo Tubo Tubo

1 2 3 4

ABSORBANCIA 0.115 nm 0.37 nm 0.722 nm 1.082 nm

TRANSMITANCIA 76.7 % 42.6 % 18.9 % 8.3 %

V.

CONCLUSIONES:

Se ha llegado a la conclusión de que la espectrofotometría es un método analítico indirecto porque se basa en la medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran utilidad en la actualidad para la identificación de un analito en una muestra problema. La espectrofotometría es el método más usado, debido a que es sencillo, específico y sensible. La espectrofotometría ultravioleta-visible usa haces de radiación del espectro electromagnético, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a

400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro. Por medio de esta práctica se logró observar la relación que existe entre la absorbancia de una solución y su concentración, que a medida que disminuye la concentración de una sustancia, también disminuye su absorbancia y por lo tanto, en caso contrario, para la transmitancia, conforme disminuye la concentración de una sustancia, aumenta su transmitancia. También como ya se mencionó se logro comprobar experimentalmente que la absorbancia equivale al logaritmo del inverso de la transmitancia y que por lo tanto esto es igual a la densidad óptica para cada sustancia como se muestra en las fórmulas investigadas en la teoría. Por lo tanto con este tipo de experimentación se pueden observar los comportamientos que rigen a las fórmulas teóricas. Se pudo observar la variación de la absorbancia con respecto a la concentración madre que preparamos. Se estudiaron los fundamentos de los métodos espectroquímicos, así como la ley de absorbancia. También se aplico lo que es la ley de Beer que se puede utilizar de diferente manera como las absortividades molares, también se puede utilizar el valor de la absorbancia medida para conocer las concentraciones, si es que se conocen la absortividad y la longitud de la trayectoria de la radiación. La absorbancia esta relacionada linealmente con la concentración de las especies absorbentes y con la longitud de la trayectoria de la radiación. La relación lineal entre la absorbancia y la longitud de la trayectoria de la radiación a una concentración fija, es una generalización para la que hay pocas excepciones. De los resultados obtenidos de la rectas de regresión notamos q el valor de R2 son aproximadamente la unidad lo q nos da una buena aproximación a la recta pronosticada. Esto es, tenemos una buen recta de calibración para calcular la concentración de una muestra problema cuya matriz es similar a la preparadas en nuestro laboratorio.

VI.

Bibliografia http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa

http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa www.scribd.com/doc/8553130/Espectrofotometria http://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Beer-Lambert FISICOQUIMICA DE CHANG, RAYMOND Bioquímica de Lehninger Principios de Bioquímica

You're Reading a Free Preview

Descarga
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->