LEY DE LAMBERT-BEER

Si se hace incidir radiacin monocromtica sobre una muestra con una concentracin C de una sustancia que absorbe a esa longitud de onda , la intensidad de la radiacin que la atraviesa, I, est relacionada con la intensidad incidente I0 y con el espesor de la muestra,l , por la expresin

:
Habitualmente, el cociente I/ I0 se denomina transmitancia de la muestra y se suele expresar como porcentaje de luz transmitida: I/ I0 100 . Por otra parte, se define la absorbancia de la muestra como:

A log1/T.

Tanto la absorbancia como la transmitancia son magnitudes que se obtienen directamente en el espectrofotmetro. Segun estas definiciones, queda finalmente la siguiente expresin que se conoce con el nombre de la ley de Lambert-Beer:

donde es la absortividad molar (una medida de la radiacin absorbida), que es un valor constante para cada sustancia a cada longitud de onda y en unas condiciones experimentales determinadas; tambin se denomina coeficiente de extincin molar si, como es frecuente, la concentracin se expresa en moles por litro. Si se opera, por tanto, a una longitud de onda dada y con una cubeta de un determinado espesor, l , la absorbancia A, medible directamente, es proporcional a la concentracin molar de la muestra, c, lo que constituye el fundamento del anlisis espectrofotomtrico cuantitativo. Existen, sin embargo, distintos factores que afectan al cumplimiento de la ley de Lambert-Beer, especialmente a concentraciones elevadas. Por ello antes de proceder al anlisis de una muestra es preciso comprobar experimentalmente el rango de concentraciones en que dicha ley se cumple, obteniendo la curva de calibrado que relaciona las absorbancias con las concentraciones.

La ley de Lambert-Beer puede tambin aplicarse al anlisis cuantitativo de mezclas de dos o ms sustancias, siempre que sus respectivos espectros de absorcin sean lo suficientemente distintos. El procedimiento se basa en que la absorbancia es una propiedad aditiva, de tal forma que la absorbancia total de una mezcla es la suma de cada uno de los componentes. As, para una mezcla de dos componentes, 1 y 2, que absorben radiacin de una misma longitud de onda, se cumplir que:

Supongamos, entonces, que nuestro problema es el anlisis de una mezcla de dos sustancias. En primer lugar se habr de registrar el espectro de absorcin de cada una de ellas por separado, con lo que nos podremos encontrarnos en una de las dos situaciones siguientes: a) Ambos espectros no presentan solapamiento en el margen de longitudes de onda de trabajo. El problema se reduce, entonces, a sendos anlisis por separado, cada uno en la zona del espectro en donde cada componente de la mezcla se presenta como nico absorbente. b) Ambos espectros presentan solapamiento en una zona determinada de longitudes de onda. En este caso se han de seleccionar dos longitudes de onda diferentes, 1 y 2, y obtener, con disoluciones de las sustancias puras, las respectivas absortividades molares a cada longitud de onda: 11, 12 , 21, 22. Con estos datos se pueden determinar las concentraciones de los dos componentes de la mezcla a partir de las medidas de la absorbancia de la misma a las longitudes de onda de trabajo seleccionadas, A1y A2. El clculo se realiza resolviendo el siguiente sistema de 2 ecuaciones con 2 incgnitas: