FUNDAMENTOS DE

ESPECTROFOTOMETRA Y
CURVA PATRN
Profesor: M. en C. Gerardo Omar Hernndez Segura
Departamento de Fisicoqumica
Laboratorio de Equilibrio y Cintica
Universidad Nacional
Autnoma de Mxico
Facultad de Qumica
OBJETIVO GENERAL

Conocer y aplicar los fundamentos
de la ESPECTROFOTOMETRA
para la determinacin de
concentraciones en soluciones.
a. Conocer los fundamentos de la
espectrofotometra y las variables
involucradas en la ley de
Lambert-Beer.

b. Seleccionar la longitud de onda
apropiada para la determinacin
de la absorbancia.

c. Construir una curva patrn de la
solucin de yodo-yodurada o
solucin de lugol (I
2
-KI) (serie
tipo) a diferentes concentraciones.
OBJETIVOS PARTICULARES:
PROBLEMA:
A partir del ESPECTRO DE ABSORCIN de una solucin
acuosa de yodo-yoduro de potasio (I
2
-KI), seleccionar la
longitud de onda apropiada para determinar el coeficiente
de absortividad molar de soluciones acuosas de yodo por
medio de una curva patrn.
Reaccin de formacin del ion I
3

:
- -
2 3
I ( ) I ( ) I ( ) + ac ac ac
| |
2
I 0.002 = M
-
I 0.2 ( =

M
- 3
3
I 2 10

(
=

x M
ESPECTROFOTOMETRA:
La espectrofotometra son todos
los mtodos cuantitativos de anlisis
qumico que utilizan la luz para medir
la concentracin de las sustancias.

Este mtodo de anlisis ptico es el
ms usado en las investigaciones
qumicas y biolgicas.

Consiste en la medicin de la
cantidad de energa radiante que
absorbe un sistema qumico en
funcin de la longitud de onda de la
radiacin.
ESPECTROFOTOMETRA:
Este anlisis espectral, permite detectar la absorcin o
emisin de radiacin electromagntica a ciertas
LONGITUDES DE ONDA, y relacionar stas con los niveles
de energa implicados en una transicin electrnica.
Onda electromagntica: Transiciones electrnicas:
TIPOS DE ESPECTROFOTOMETRA:
1.- Absorcin de IR
2.- Absorcin de UV-vis
3.- Absorcin atmica
4.- Resonancia Magntica Nuclear
5.- Flourescencia
6.- Emisin atmica
7.- Rayos X
8.- Espectrometra de masas
ESPECTROFOTMETRO:

Dispositivo experimental que
mide la absorcin o emisin
de una especie qumica al
interactuar la luz con la
materia.

Los mtodos
espectroscpicos se basan
en la capacidad de las
sustancias de ABSORBER o
EMITIR radiacin
electromagntica, y se
relacionan para determinar la
concentracin de un reactivo
o producto durante una
reaccin.



ESPECTROSCOPA UV-VISIBLE:
La absorcin de la radiacin UV o visible por
molculas, generalmente se produce por la
excitacin de los electrones de enlace.
La longitud de onda de los mximos de
absorcin se puede relacionar con los enlaces
de las especies absorbentes.
Regin UV-vis del espectro electromagntico en
estudio para la prctica: (320 500) nm
UV medio: UV cercano: Visible:
200 300 nm 300 380 nm 380 780 nm
El aparato DETECTA la cantidad de luz transmitida y/o
absorbida a travs de la solucin en la celda y la COMPARA con
la que se transmite o absorbe a travs de una solucin de
referencia o blanco.
P
0

P
0
=
P
T
P
0
log
P
A
P
=
P
P
T A
0
log log = =
FUNDAMENTO DE LA ESPECTROFOTOMETRA:
TRANSMITANCIA: ABSORBANCIA:
LEY DE LAMBERT BEER:
c = A bc
c
b
I- -I
LEY DE LAMBERT-BEER:
c = A bc
A: Absorbancia (adimensional)
: coeficiente de absortividad molar o de extinsin
molar (M
-1
cm
-1
)
b: longitud de paso ptico (usualmente b = 1 cm)
c: concentracin molar (M)
El fundamento de la espectrofotometra se cumple para una
radiacin monocromtica que atraviesa una disolucin
diluida (C 0.01M), cuando la especie absorbente no
participa en un equilibrio que dependa de su concentracin.
Curva Patrn de soln de yodo ( Abs/ nm)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025
I2 (mol/L)
A
b
s
bc A c =
b mx y + =
CURVA PATRN:
[I
2
] / (mol/L)
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
CONSTRUCCIN DEL ESPECTRO DE ABSORCIN:
Prepara 10 mL de una solucin de I
2
-KI 2x10
-4
M, virtindola
en la celda a un 75% de su capacidad, e inicia la lectura de
la absorbancia con previa calibracin del
espectrofotmetro (blanco), utilizando la otra celda con
agua destilada.
Realizacin del barrido. Mide la absorbancia (A) como
funcin de la longitud de onda () cada 10 nm en el intervalo
de 320-500 nm, registrando los datos en la siguiente tabla .


Evento: (nm) Absorbancia:
1 320
2 330
..
n 500
Encender el
espectrofotmetro y
esperar 15 min.
Seleccionar la
longitud de onda
girando la perilla.
Introducir la celda con el blanco
(con un volumen por arriba de la
mitad; nunca llena) en el porta-
celda, esperar a que se ponga en
ceros la absorbancia.
Tomar la lectura de absorbancia de
la solucin propuesta a una
longitud de onda baja ( nm).
Utilizar como blanco agua
destilada.
Repetir el procedimiento desde el punto
4 dando incrementos regulares de 10 nm
a la longitud de onda. Registrar los
datos en una tabla.
CALIBRACIN DEL EQUIPO Y BARRIDO DEL ESPECTRO
Espectro Yodo 0.0002M
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520
l (nm)
A
b
s
Seleccionar una de esta zona
ESPECTRO DE ABSORCIN:
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

(nm)
Preparar soluciones de distinta
concentracin a partir de la
solucin de referencia I
2
KI
(0.002M-0.2M) (Serie tipo).
Seleccionar una longitud de
onda adecuada para hacer las
lecturas de Absorbancia para las
soluciones de la serie tipo.
Introducir la celda con el blanco (agua
destilada), con un volumen por arriba
de la mitad; nunca llena, en la porta-
celda, oprimir la tecla y esperar a que
se ponga en ceros la absorbancia.
Tomar la lectura de
absorbancia de las soluciones
propuestas para la serie tipo, a
la longitud de onda
seleccionada ( nm).
Registrar las lecturas de
absorbancia y concentracin de la
serie tipo en la tabla. Que se
muestra en la siguiente diapositiva.
CURVA PATRN
ABSORBANCIA A DIFERENTES CONCENTRACIONES
MOLARES DE I
2
-KI

Mezcla:
Volumen de I
2

2X10
-4
M
(mL)
Volumen de
H
2
O
(mL)
Concentracin
de [I
2
]
(mol/L)

Absorbancia:
1 5 0
2 4 1
3 3 2
4 2 3
5 1 4
FACTOR DE DILUCIN:
1 1 2 2
CV C V =
1 1
2
2
CV
C
V
=
Calcular la
concentracin de I
2

en cada mezcla
empleando el
factor de dilucin.
c = A bc
APLICACIN DE LA LEY DE LAMBERT-BEER A LOS
DATOS EXPERIMENTALES





A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

C / (mol/L)
y
=
m x +
B
Elaborar la grfica
Absorbancia vs concentracin
molar (mol/L) y realizar la
regresin lineal.
0 B =
PENDIENTE:
m b c =
1cm b =
DETERMINAR EN
(M
-1
cm
-1
)

e-mail: omar.termo@hotmail.com
Profesor: M. en C. Gerardo Omar Hernndez Segura