UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

CURSO: QUÍMICA ANALÍTICA – LABORATORIO
INFORME DE LABORATORIO N° 9

TÍTULO: ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR UV-VIS

DETERMINACIÓN DE ABSORTIVIDAD MOLAR Y LONGITUD DE
ONDA DE MÁXIMA ABSORBANCIA

Integrantes:
‌
Carbajal‌‌Bernal,‌‌Julio‌‌Ysmael‌‌ 20190493‌‌
Galván‌‌Quispe,‌‌Sol‌‌Angie‌‌ 20190498‌‌
Segovia‌‌Zapata,‌‌Susana‌E ‌ lvira‌‌ 20190516
‌
Zavala‌‌Estrella,‌‌Vivian‌‌Abigail‌ 20190527

Facultad y especialidad: Industrias Alimentarias

Horario de práctica (día y hora): Martes 11-1
Apellidos y nombres del profesor de laboratorio: Mariella Cortez
Fecha de la práctica: 06 de Octubre de 2020
Fecha de entrega del informe: 13 de Octubre de 2020
 LA MOLINA - LIMA - PERÚ
ÍNDICE

1.INTRODUCCIÓN
1.1 JUSTIFICACIÓN 3
1.2 OBJETIVOS
1.3 HIPÓTESIS

2.REVISIÓN DE LITERATURA
2.1 El Espectro Electromagnético
2.2 Absorbancia
2.3.1 Ley de Lambert y Beer
2.3.2 Ecuación de Lambert y Beer
2.4 Componentes del espectrofotómetro UV-VIS
2.5 Espectro de absorción de una sustancia
2.6 Curva de Calibración

3.MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 Materiales/ Reactivos/ Equipos
3.2 Metodología Experimental

4.RESULTADOS
Tabla 1. Espectros de absorción: absorbancia versus longitud de onda
Tabla 2. Curva de calibración

5.DISCUSIONES

6.CONCLUSIÓN

7.RECOMENDACIONES

8.BIBLIOGRAFÍA

9.ANEXOS

10.CUESTIONARIO
1. INTRODUCCIÓN
Mediante la espectroscopía se puede analizar las interacciones existentes entre la materia
y la radiación electromagnética. La radiación electromagnética es solo una forma de
transportar energía y ese transporte se realiza mediante un campo magnético y uno
eléctrico que se desplazan perpendicularmente, esto es mediante una onda. la respuesta
de la interacción de la materia con la radiación electromagnética puede ser una
absorción, una emisión, una difracción, una refracción, una dispersión o una rotación.

1.1 JUSTIFICACIÓN

En el presente informe de práctica se realizará el cálculo de la absortividad molar y

longitud de máxima absorbancia de la sustancia 1 (KMnO4 0.002M) y de la sustancia 2
(KMnO4 2x10-4 M), para finalmente construir una curva de calibración con la
concentración de la sustancia 1, teniendo en cuenta que esta curva de calibración se
construye con la absorbancia y concentración de esta sustancia.

1.2 OBJETIVOS
● Calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de un
cromóforo a partir de un espectro de absorción.
● Construir una curva de calibración

1.3 HIPÓTESIS
● La absortividad molar y la longitud de onda de máxima absorbancia depende de
cada sustancia y varía con la longitud de onda.
● La absorbancia varía en forma directamente proporcional con la concentración
de la sustancia absorbente a una determinada longitud de onda.
2. REVISIÓN DE LITERATURA

2.1 El Espectro Electromagnético

Se denomina espectro electromagnético a la distribución energética del conjunto de
las ondas electromagnéticas. Referido a un objeto se denomina espectro
electromagnético o simplemente espectro a la radiación electromagnética que emite
(espectro de emisión) o absorbe (espectro de absorción) una sustancia. Dicha
radiación sirve para identificar la sustancia de manera análoga a una huella dactilar.
Los espectros se pueden observar mediante espectroscopios.

Representación esquemática del Espectro Electromagnético

Fuente: Valenzuela, David. «Espectro Electromagnético».

2.2 Absorbancia
Cuando un haz de luz monocromática, es decir de una determinada longitud de onda,
atraviesa una solución que contiene una especie absorbente, la intensidad (o la
potencia) de la radiación disminuye como consecuencia de la absorción de energía por
parte de las especies absorbentes presentes en la solución. (Skoog, 2001)

Se define Transmitancia de una solución a la fracción de luz que deja pasar dicha
solución:
T= P/P0
Se define la Absorbancia de la solución a partir de la transmitancia de la solución
como:
A = -log T
 2.3.1 Ley de Lambert y Beer
Cuando un haz de luz monocromática (de determinada longitud de onda) atraviesa
una solución, la absorbancia es directamente proporcional a la distancia recorrida por
la luz atravesando la solución absorbente y a la concentración del analito en la
solución. La distancia recorrida por la luz atravesando la solución se denomina
camino óptico y se mide generalmente en cm (Figura 7).

2.3.2 Ecuación
de Lambert
y Beer
A: absorbancia,
adimensional.
ε: coeficiente de extinción
molar ó absortividad molar,
se define como la unidad de
absorbancia por unidad de concentración y por unidad de
longitud de la trayectoria de luz; es una constante definida
que depende de la solución y la longitud de onda, en general
su unidad es la inversa de la molaridad por la inversa de cm,
es decir (M x cm)-1 ó L/mol x cm b:es el camino óptico, en
general se mide en cm.
c: es la concentración del analito expresada en molaridad
(M).

2.4 Componentes del espectrofotómetro UV-VIS

 Descripción del proceso de absorción en el espectrofotómetro

2.5 Espectro de absorción de una sustancia

Es el gráfico que resulta de relacionar la absorbancia o absortividad molar de una
sustancia en un rango de longitudes de onda. Muestra la fracción de la radiación
electromagnética incidente que un material absorbe dentro de un rango de frecuencias.
Es, en cierto sentido, el opuesto de un espectro de emisión. Cada elemento químico
posee líneas de absorción en algunas longitudes de onda, hecho que está asociado a
las diferencias de energía de sus distintos orbitales atómicos. De hecho, se emplea el
espectro de absorción para identificar los elementos componentes de algunas
muestras, como líquidos y gases; más allá, se puede emplear para determinar la
estructura de compuestos orgánicos. (Harris, 2001)

Representación de espectro de absorción de la clorofila y pigmentos

2.6 Curva de Calibración

Una curva de calibración o curva estándar, se determina, experimentalmente,
preparando una serie de soluciones de concentración conocida y midiendo la
absorbancia de cada una de ellas a la longitud de onda de máxima absorbancia. Con
los datos obtenidos se construyen curvas de absorción – concentración como el
ejemplo de la figura. La relación Absorbancia vs distancia de recorrido de la radiación
o concentración es lineal mientras que con la transmitancia no lo es.
3.

MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 Materiales/ Reactivos/ Equipos

MATERIALES REACTIVOS EQUIPOS

● Pipetas volumétricas de 1, ● Disolución ● Balanza analítica;
2, 5 y 10 mL. estandarizada de ● Espectrofotómetro UV-
● Pipetas graduadas de 10 KMnO4 0.002 M VIS
mL ● Disolución ● Cubetas de plástico o
● Matraz volumétrico o fiolas estandarizada de vidrio y cuarzo
de 25, 50 y 100 mL (06 de K2Cr2O7 0,003 M
cada uno) ● Solución de cafeína u
● Vaso de precipitados de otro alcaloide.
100mL ● Solución de complejo
● Vaso de precipitado de 50 hierro-ortofenantrolina
mL.
● 1 piseta con agua destilada

3.2 Metodología Experimental

Actividad 1.Indicar los colores observados y absorbidos por sustancias

coloreadas
 Actividad 2. Elaborar del espectro de absorción

Actividad 3. Construcción de una curva de calibración

4. RESULTADOS

Tabla 1. Espectros de absorción:

absorbancia versus longitud de onda
Sustancia 1 Sustancia 2

KMnO4 (0.002M) KMnO4 (2x10-4 M)

Longitud Absorbancia Absortividad Longitud de Absorbancia Absortividad

de onda λ molar onda λ A molar
nm Є nm Є
-1 -1
cm .mol-1.L cm .mol-1.L

380 0.1 50 380 0.11 550

400 0.023 11.5 400 0.037 185

410 0.009 4.5 420 0.014 70

420 0.006 3 440 0.022 110

430 0.007 3.5 460 0.059 295

440 0.013 6.5 480 0.136 680

450 0.03 15 500 0.267 1335

460 0.05 25 510 0.345 1725

 470 0.091 45.5 520 0.392 1960

480 0.129 64.5 523 0.431 2155

490 0.202 101 525 0.447 2235

500 0.266 133 526 0.453 2265

510 0.342 171 527 0.453 2265

520 0.392 196 528 0.451 2255

530 0.44 220 530 0.436 2180

540 0.4 200 550 0.399 1995

550 0.403 201.5 570 0.241 1205

560 0.261 130.5 600 0.046 230

570 0.24 120 620 0.036 180

580 0.124 62 660 0.023 115

590 0.055 27.5 680 0.016 80

600 0.042 21 700 0.011 55

610 0.036 18

620 0.033 16.5

630 0.03 15

640 0.028 14

650 0.024 12

660 0.02 10

670 0.016 8

680 0.013 6.5

690 0.01 5

700 0.007 3.5

Gráfica 1: Longitud de onda vs absorbancia de la sustancia 1

 Gráfica 2: Longitud de onda vs absortividad molar de la sustancia 1

Gráfica 3: Longitud de onda vs absorbancia de la sustancia 2

 Gráfica 4: Longitud de onda vs absortividad molar de la sustancia 2

Tabla 2. Curva de calibración

Datos para la curva de calibración

Sol. Madre KMnO4 (0.02 M)

Sustancia Concentración:
1100mg Mn/L
Longitud de onda máxima. 530 nanómetros, nm
absorb λmax 0.44
Absortividad molar máxima 220 cm-1.mol-1.L
Єmax
 Longitud del lado/diámetro de 1 cm
cubeta

ppm Mn
St0 St1 St2 St3 St4 St5 Muestra
Concentración 0 2 4 6 8 10 0.91
estándar (X)
Concentración 10 8 6 4 2 0
de solución
intermedia
0 0.076 0.163 0.328 0.441 0.590 0.264
Absorbancia(Y)

100 68.71 68.71 46.99 36.22 25.70 -

Transmitancia

Gráfica 5: Longitud de onda vs absorbancia de la curva de calibración

5.

DISCUSIONES

- La longitud de onda máxima como se conoce no depende de la concentración de la

sustancia diluida, de manera que en las dos sustancias 1 y 2, la longitud máxima no
es igual para ambas, ya que podría ser que no se tomaron los datos correctamente en
el espectrofotómetro.
- La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración
(Díaz N., et al , 2007), según lo citado se mostrará en la curva de calibración que la
 recta está creciendo y no se muestra ningún descenso de la recta, por lo que a una
mayor concentración, mayor será su absorbancia.

6. CONCLUSIÓN
● Logramos calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de
una muestra a partir de un espectro de absorción el cual fue 220 cm-1.mol-1.L
● Construimos las curvas de calibración con la ayuda de los datos de la longitud
de onda y la absortividad de KMnO4 (0.002M) para calcular la absortividad
molar

7. RECOMENDACIONES

● Saber calibrar y manejar el equipo espectroscópico.

● Considerar las buenas prácticas de laboratorio para el uso de la actividad.
● Ser exactos y eficientes al momento de añadir los reactivos a los tubos de ensayos
para obtener datos precisos y de esa manera hallar la curva de calibración.
● Al momento de introducir las celdas del espectrofotómetro, comenzar con las de
concentración menor para así evitar errores.
● Colocar bien las celdas para que el espectrofotómetro de una buena leída.

8. BIBLIOGRAFÍA
 ➢ Díaz N., Bárcena J., Fernández E., Galván A., Jorrín J., Peinado J.,
Meléndez F., Túnez I. (2009). Espectrofometría: Espectros de absorción y
cuantificación colorimétrica de biomoléculas. Departamento de Bioquímica y
Biología Molecular,Facultad de Medicina. Córdoba. Obtenido de:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

➢ Harris, Daniel C.. (2001) Análisis Químico Cuantitativo. 2ª Editorial: Reverté.

➢ Skoog, West, Holler y Crouch. (2001). Química Analítica. 7ª Editorial: Mc
Graw Hill.

9. ANEXOS

Para determinar los datos de absortividad molar de la tabla 1 , se calcularon con las
 siguientes fórmulas.

A = Absorbancia de la muestra

C = Concentración de la disolución

b = Longitud del paso óptico que contiene la muestra (cm)

= Absortividad molar M-1 .longitud-1

Determinación de la concentración de la muestra

De dato nos da que la absorbancia de la muestra es 0.264, entonces reemplazando en la

ecuación de la curva de calibración con un coeficiente de regresión 0.9802
La concentración de la muestra
0.264= 0.0567x - 0.0252
X= 0.91

10.CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el propósito e hipótesis de la práctica 9?

Propósito:
- Calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de un cromófono a
partir de un espectro de de un espectro de absorción.
- Construir la curva de calibración.
Hipótesis:
 - La absortividad molar y la longitud de onda de máxima absorbancia depende de c ma
absorbancia depende de cada sustancia.
- La absorbancia varía en forma directamente proporcional con la onal con la
concentración de la concentración de la sustancia absorbente a una determinada
longitud de onda.

2. ¿Cree usted que ha logrado esa competencia?

Considerando el protocolo de cada actividad, el equipo de espectroscopia y tipo de
espectroscopia y dichos reactivos que dichos reactivos que se emplearon, se logró determinar
los se emplearon, se logró determinar los datos para ca datos para cada unidad correspondida
y de esa maner da unidad correspondida y de esa manera construir la curva de calibración.

3. Explique la espectroscopia de absorción molecular UV-VIS. Aplicaciones.

La espectroscopia UV-VISIBLE se basa en la absorción de radiación UV-VISIBLE por un
analito. Se origina un estado excitado y luego elimina su exceso de energía en forma de
energía en forma de calor.

4. ¿Qué son los colores complementarios? Explique.

Son dos colores que al ser me Son dos colores que al ser mezclados en una proporc zclados
en una proporción determinada, el resultado ión determinada, el resultado de la mezcla de la
mezcla es un color neutral (gris, blanco y negro). Los c un color neutral (gris, blanco y
negro). Los colores complementarios indican la porción del s complementarios indican la
porción del espectro que espectro que es absorbida.

5. Explique la Ley de Lambert y Beer. Defina Transmitancia y absorbancia y ¿cuál es la

relación entre ellos?

● Ley de Lambert: Se da la relación entre la absorción de la relación entre la absorción

de la radiación y de la radiación y espesor del medio espesor del medio absorbante.
● Ley de Beer: Se da la relación entre la concentración de la especie absorbante y la
relación absorbida. La ley de Beer considera:
-La radiación es monocromática.
-Los centros absorbantes son independientes.
-La sección transversal entre la radiación y la materia es la absorción.
-El único mecanismo entre la radiación y la materia es la absorción.
● Transmitancia: Se define como la fracción de luz incidente a una longitud de onda
especificada pasa a través de una muestra.
● Absorbancia: Es la cantidad de intensidad de luz que absorbe la muestra. Se define
como la intensidad después de haber habido la absorción y la intensidad de la luz que se
hace incidir sobre ir sobre la muestra.
6. A qué se refiere la naturaleza dual de la radiación electromagnética. ¿Cuáles son las
regiones del espectro electromagnético?. ¿Cuál es la ecuación que relaciona la velocidad
de la luz con frecuencia de radiación? ¿Cuál es la ecuación de Planck?.

Se refiere a que posee un comportamiento corpuscular y ondulatorio. Corpuscular, es

decir como partícula, pues la energía se transmite como paquete de energía llamado
fotones. Ondulatorio, porque la forma en la que se mueven y oscilan en todas las
direcciones es en ondas.

● Regiones del espectro:

● Ecuación de Planck:

Ecuación que relaciona la velocidad de la luz con la frecuencia:

7. Dibuje los componentes generales de un espectrofotómetro de absorción molecular.

Indique cual es la función de cada uno

● Espectrómetro:
Produce un rango deseado de longitud de onda de luz. Primero un colimador (lente)
transmite un haz recto de luz (fotones) que pasa a través de un monocromador
(prisma) para dividirlo en varios componentes de longitudes de onda (espectro).
Entonces un selector de longitud de onda (ranura) transmite sólo las longitudes de
onda deseadas
● Fotómetro:
Después de que el rango deseado de longitud de onda de luz pasa a través de la
solución muestra en la cubeta, el fotómetro detecta la cantidad de fotones que se
absorbe y luego envía una señal a un galvanómetro o una pantalla digital.

● Fuente de luz:
La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones:
estabilidad, direccionalidad, distribución de energía espectral continua y larga vida.

● Monocromador
El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se
reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.
Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de
dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que
lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el
cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige
hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida.

● Detector:
El detector es el encargado de captar la radiación y, a su vez, dejarla en evidencia para
su estudio posterior. Existen dos tipos:

a) los que responden a fotones

b) los que responden al calor
 ● Fotodetectores:
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para
percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro
visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes móviles del equipo.

● Celdas:
Son los recipientes donde se depositan las muestras líquidas a analizar. El material del
cual están hechas varía de acuerdo a la región que se esté trabajando; son de vidrio o
plástico si se trabaja en la región visible, de cuarzo si se trabaja en la ultravioleta y de
NaCl si se trabaja la región de infrarrojo.

8. ¿Qué es un espectro de absorción; cómo se construye y qué información permite

obtener?Dibuje y explique.

El espectro de absorción de una materia muestra la fracción de la radiación electromagnética

incidente que un material absorbe dentro de un rango de frecuencias. Es, en cierto sentido, el
opuesto de un espectro de emisión. Cada elemento químico posee líneas de absorción en
algunas longitudes de onda, hecho que está asociado a las diferencias de energía de sus
distintos orbitales atómicos. De hecho, se emplea el espectro de absorción para identificar los
elementos componentes de algunas muestras, como líquidos y gases; más allá, se puede
emplear para determinar la estructura de compuestos orgánicos. Un ejemplo de las
implicaciones de un espectro de absorción es que aquel objeto que lo haga con los colores
azul, verde y amarillo
aparecerá de color rojo cuando incida sobre la luz blanca. Cuando incide una luz a un metal
al superar su energía umbral saca un electrón, si la energía es superior la energía que sobra se
convierte en energía cinética.

9¿Qué es una curva de calibración y cómo se construye?. ¿Cómo demuestra si la

relación es lineal o cumple con la ley de Lambert y Beer.

Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en

función de la concentración de un analito. La calibración incluye la selección de un
modelo para estimar los parámetros que permitan determinar la linealidad de esa
curva. Y, en consecuencia, la capacidad de un método analítico para obtener
resultados que sean directamente proporcionales a la concentración de un compuesto
en una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo.

La curva de calibrado se construye midiendo la señal analítica en cada uno de los

patrones previamente elaborados. En el eje de ordenadas se asigna el valor de la señal
medida y en el eje de abscisas la concentración del patrón. De esta forma podemos
señalar puntos en la gráfica según abscisas la concentración del patrón. De esta forma
podemos señalar puntos en la gráfica según las coordenadas (concentración (x), señal
(y)).A estos puntos podemos aplicar la regresión lineal, generalmente mediante el
ajuste por mínimos cuadrados, para obtener la recta que los relaciona y su función.