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RESUMEN
El objetivo del presente informe es determinar la calidad de la leche a través de los pruebas físico
químicas como acidez, sólidos totales, prueba del alcohol y cloruro. La Leche es uno de los alimentos
más requeridos por niños y adultos, por lo que es fundamental tener conocimiento de los
procedimientos para determinar su calidad. En la práctica se utilizó dos muestras de leche una sin
grasa y otra normal, está inició con la determinación de sólidos totales, llevando la muestra a la estufa
a 90°C y resultando mayor el porcentaje para la leche con grasa, luego se determinó la acidez titulable
en base a ácido láctico, siendo los resultados cercanos a 0,12 para las dos muestras. Los valores
obtenidos de la prueba de cloruros estuvieron en el rango óptimo de calidad y finalmente para la
prueba de alcohol todas las muestras resultaron negativas.
ABSTRACT
The objective of this report is to determine the quality of milk through physical chemical tests such as
acidity, total solids, alcohol and chloride tests. Milk is one of the foods most required by children and
adults, so it is essential to have knowledge of the procedures to determine its quality. In practice, two
milk samples were used, one without fat and the other normal, it is started with the determination of
total solids, taking the sample to the oven at 90 ° C and resulting in a higher percentage for fat milk,
then the Titratable acidity based on lactic acid, the results being close to 0.12 for both samples. The
values obtained from the chloride test were in the optimum quality range and finally for the alcohol
test all samples were negative.
A. Materia prima: Se trabajó con leche en bolsa con grasa y sin grasa, la cual fue comprada en
el Mercado de Bayóvar, San Juan de Lurigancho. La evaluación de calidad de la leche se
realizó en el laboratorio de Análisis de los Alimentos de la Escuela profesional de Ingeniería
Agroindustrial de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, San Juan de Lurigancho,
Lima, Perú.
B. Materiales
● Matraz
● Bureta
● Pipeta volumétrica de 10 ml
● Placa Petri
● Tubos de ensayo
● Gradilla
● Piceta
C. Reactivos
● NaOH 0.1 N
● Fenolftaleína
● Agua destilada
● Bicarbonato de sodio
● Cromato de potasio
● Nitrato de plata
● Alcohol
D. Equipos
● Estufa
● Balanza analítica
2. Determinación de Sólidos Totales: En una placa petri, limpia, seca y previamente
tarada; se colocó 10 ml de leche homogenizada. Se llevó a la estufa a una temperatura
de 100 °C durante 1 hora. Al finalizar el tiempo, fue pesada nuevamente.
Según la NTP 202.001 “Leche y productos lácteos. Leche cruda y requisitos” (2003)
los sólidos totales se expresan en g/100g.
Tabla 1
Resultados de la determinación de acidez expresado en porcentaje de ácido láctico.
● En cuanto al % de acidez obtenido, para la leche con grasa, por la mesa 3 es de 0.166 %
siendo este valor mayor que los obtenidos por la mesa 1 y 2, 0.109 % y 0.122%,
respectivamente. Según los estudios realizados por Nolasco y Rodríguez (2008)
obtuvieron un valor de 0.15% en la determinación de acidez de leche entera, teniendo
en cuenta una adecuada manipulación, refrigeración y transporte, sobre todo que ha
estado en una temperatura adecuada en su almacenaje.
● Según la NTP 202.001 “Leche y productos lácteos. Leche cruda y requisitos” (2003) el
% de acidez para leche cruda con y sin grasa es de 0.14 - 0.18, teniendo en cuenta estos
valores se puede concluir que el resultado obtenido por la mesa 1, en cuanto a leche sin
grasa, se encuentra dentro de los límites permitidos; mientras que la mesa 3 tiene el
mejor valor en la determinación de acidez de la leche con grasa o entera.
● Según Luis Artica (2014) la materia seca (extracto seco), está formada por los
compuestos sólidos de la leche. Dentro de la composición de la leche de vaca
constituye un promedio de 12.5%.
● Nuestros resultados coinciden con los encontrados por Cosme, 1997 para leche fresca
(13.23%), leche descremada (10.72%) y leche entera (12.65%)
C. Determinación de Cloruros
Tabla 3
Resultados de la determinación de cloruros expresado en porcentaje de cloruro de sodio.
● En base a los resultados obtenidos, para las tres mesas de trabajo obtuvieron un % de
acidez mayor de lo establecido por las especificaciones de la Norma Tecnica Peruana,
por lo tanto estos valor indicarían una posible Mastitis.
Tabla 4
Resultados de la prueba de alcohol para los dos tipos de leche.
● En la Tabla 4 se puede observar los resultados para la prueba de alcohol para los dos
tipos de leche, obteniendo resultados negativos para la leche con y sin grasa.
● Según la NTP 202.001: 2003. Leche y Productos Lácteos, la leche cruda debe cumplir
con el requisito físico-químico de No coagulable para la prueba de alcohol (74% v/v)
según el método de ensayo establecido en la NTP 202.030: 1998.
IV. CONCLUSIONES
● Para la determinación de % acidez los mejores valores obtenidos fueron de la mesa 1 con
0.163 % para la leche sin grasa y por la mesa 3 con 0.166 % para la leche con grasa; ya que
estos se encontraban dentro de los límites permitidos (0.14 - 0.18 %) de la NTP 202.001.
● Para la prueba de sólidos los resultados fueron mayores para la leche normal en cambio para
la leche sin grasa fue menor.
● Todos los resultados para los sólidos totales estuvieron dentro del rango según la NTP
202.001
● La prueba de cloruros demostró que tanto para la leche con grasa y sin grasa tienen valores
altos con lo que respecta a lo que establece la Norma Técnica Peruana, de modo que se podria
inferir que para ambos tipos de muestra causaría Mastitis, la cual es una enfermedad
infecto-contagiosa de la glándula mamaria, en la cual la inflamación se produce como
respuesta a la invasión, a travéz del canal del pezón, de diferentes tipos de bacterias,
micoplasmas, hongos, levaduras y hasta algunos virus.
● La prueba de alcohol determinó que la leche con grasa y la leche sin grasa son aceptables, ya
que no se evidenció la presencia de coágulos ni precipitaciones. Concluyendo así que las
leches son estables y por ende aptas para el consumo humano.
V. CUESTIONARIO
Tiene la desventaja de necesitar otro reactivo, tapones especiales que deben ser reemplazados
con el uso y es más peligroso. Un inconveniente es el uso de ácido sulfúrico concentrado, el
cual es muy corrosivo y requiere medidas de precaución especiales. Además, la mezcla de
ácido sulfúrico se debe eliminar de forma ecológica considerando medidas especiales
concernientes a su eliminación. Además, se afecta la gravedad específica de la grasa al
separarse y se da la pérdida del analito con la solución de ácido sulfúrico.
Por una parte el ácido sulfúrico destruye el estado globular de la grasa y disuelve la caseína de
la leche y por otra, la fuerza centrífuga separa la grasa, facilitando dicha separación el alcohol
isoamílico, al disminuir la tensión en la interfase entre la grasa y la mezcla ácido-leche.
➔ Prueba de la fosfatasa
La determinación de la fosfatasa es una prueba que permite comprobar la correcta
pasteurización de una leche; es decir, comprobar que el tiempo y la temperatura de
tratamiento térmico de pasteurización se ha realizado correctamente. La fosfatasa es una
enzima que se encuentra en la leche cruda y se desnaturaliza por el calor, por lo cual al
pasteurizar la leche se destruye. Para comprobar la existencia (mala pasteurización) de
fosfatasa se usa un “método colorimétrico”. La fosfatasa tiene la propiedad de desdoblar el
fenilfosfato disódico en fenol y fosfato de sodio. También existen tiras indicadoras para
esta prueba. Este método pone de manifiesto la existencia de fenol mediante un indicador
de color que reacciona con él formando un compuesto de color azul (existe fenol y por
tanto fosfatasa por lo que no se ha pasteurizado correctamente). Si no existe fosfatasa
(leche bien pasteurizada), no existe fenol y se forma un compuesto de color marrón.
Materiales y Métodos
- Tubos de ensayo con tapón de rosca
- Pipetas graduadas de 10 y 1 ml
- Varillas agitadoras de vidrio
- Estufa de incubación a 37ºC o Baño María
- Pinzas y gradilla y agua destilada para análisis
- Reactivo I, II y III
Procedimiento
1) En 2 tubos de ensayo se depositan 10 ml de agua destilada para análisis y se llevan a
la estufa para que se pongan tibios o se atemperan con la mano.
2) Añadir a cada tubo una tableta de Reactivo I y disolver con ayuda de una varilla.
3) Cuando esté bien disuelta, añadir una tableta de Reactivo II y disolver.
4) Depositar en cada tubo 1 ml de la leche problema. Mezclar.
5) Llevar los tubos de ensayo a la estufa de incubación a 37ºC durante 1 hora.
6) Tras la incubación, añadir a cada tubo una cucharadita de Reactivo III.
7) Mezclar y llevar a incubación durante 10-15 minutos.
Resultados
Observar el color de los tubos de ensayo:
- Color marrón indica que no hay fosfatasa: Leche bien pasteurizada.
- Color verdoso, indica que hay una pequeña cantidad de fosfatasa: Leche sin
pasteurizar correctamente.
- Color azul fuerte, indica que hay fosfatasa: Leche cruda.
➔ Densidad de la leche
La densidad es una propiedad física utilizada para comparar las masas de diferentes
sustancias o de una misma bajo diferentes condiciones. En la densidad de la leche influyen
todos los constituyentes normales, así como todas aquellas sustancias extrañas que se
adicionan de forma fraudulenta, tanto sólidos como líquidos. Existen muchas causas que
actúan variando la densidad de la leche, como son la composición química, la temperatura
de medición, la temperatura de almacenamiento, el tiempo transcurrido desde el ordeño, el
ordeño fraccionado, la centrifugación y otras operaciones tecnológicas. Así, la densidad
depende no sólo, de la temperatura del momento de la determinación, sino también de las
temperaturas anteriores, y además este parámetro adquiere su valor más bajo poco después
del ordeño, aumentando después lentamente.
Materiales
- Termolactodensímetro contrastado o lactodensímetro y termómetro.
- Probeta de 250 mL.
- Estufa o baño termostático a 15 o 20º C.
Procedimiento
1) Calentar la muestra a la temperatura de 37-40°C y homogeneizar mediante un
agitador en caso de que sea necesario.
2) Verter la leche en la probeta e introducir con cuidado el lactodensímetro en la leche
manteniendo el aparato en el eje de la probeta y provocar un ligero movimiento de
rotación.
3) Esperar a que se estabilice y realizar la lectura de la densidad.
Lectura
Efectuar la lectura en la graduación del lactodensímetro. Las cifras descritas se
corresponden con las dos últimas cifras de la densidad. Para interpretar los resultados,
comprobar la temperatura de la leche, ya que el valor de la densidad que proporciona el
lactodensímetro es para una leche con una temperatura de 20ºC. Si la temperatura de la
leche es diferente, tendremos que aplicar la siguiente corrección. Por cada grado que pase
de los 20°C, se suma 0.2 al valor de densidad obtenido, y se resta 0.2 por cada grado que
falte para los 20°C.
Observaciones
La densidad varía según el tipo de leche. Para la leche de vaca oscila entre 1.028 y 1.042,
siendo el valor medio de 1.031, mientras que el suero de vaca presenta unos valores
comprendidos entre 1.027 y 1.030.
Materiales
- Tubos de ensayo con tapones estériles.
- Baño maría ó estufa a 37°C.
- Pipetas graduadas
Reactivos
- Solución de azul de metileno. Preparar una solución madre diluyendo unos gramos de
azul de metileno en alcohol de 96° hasta conseguir la saturación.
- Para preparar la solución de trabajo tomar 2.5 mL de la solución madre y adicionar
97.5 mL de agua destilada estéril.
Procedimiento
- Agitar la leche y agregar 10 mL de leche a un tubo de ensayo.
- Añadirle 0.5 mL azul de metileno, evitar el contacto con la leche.
- Tapar los tubos e introducirlos en baño maría a 37°C.
- Realizar dos ensayos simultáneos para cada muestra.
- Leer los resultados al cabo de 10 minutos y a la hora.
Materiales y Reactivos
- Kit de detección de antibióticos en leche CHR Hansen (500145 Copan Test P&S).
Procedimiento
- Tomar una muestra de leche de un volumen de 100 µl con la pipeta d del kit y
adicionar en uno de los tubos preparados para el ensayo. Tener la precaución de
utilizar una pipeta nueva para cada muestra.
- Colocar el tubo en una esufa o baño maría s 64±1°C e incubar.
- Leer los resultados en el cambio de color del medio de cultivo cuando ha transcurrido
el tiempo de incubación (3 horas).
- Las muestras deben ser ensayadas paralelamente con un control positivo constituido
por una solución patrón de penicilina con una concentración de 0.004 µg/ml (0.0067
UI/ml), y con otro control negativo que será leche desnatada en polvo sin sustancias
antimicrobianas.
Interpretación
El kit semicuantitativo permite detectar la presencia de sustancias antibacterianas en leche
cuando se encuentran en concentraciones superiores a los Límites Máximos Residuales
(LMR). Para interpretar los resultados obtenidos tendremos en cuenta las variaciones de
color de la muestra problema, del control negativo y del control positivo, tal y como se
muestra en el siguiente Cuadro.
Cálculos
Ejemplo: si en la determinación del título del reactivo se gastan 8,2 mL de reactivo, el
razonamiento es el siguiente:
o sea que, son necesarios, al menos 0,041 gramos de glucosa (azúcar reductor) para que el
cobre presente en los 15 mL de reactivo de F.C.B. sean reducidos
● En primer lugar , se deben tener ciertos cuidados con el nitrato de plata , mantenerlo
fuera de la luz , puesto que es una sustancia fotosensible y al exponerse a la luz puede
descomponerse y por ende alterar la efectividad de los resultados ,además se debe
tener muchas precaución al usarlo , ya que es altamente corrosivo
● Existen algunas interferencias que no pueden ser corregidas por la acidificación , tales
como : iones coloreados , ácido nitroso , cationes que forman complejos o insolubles
con SCN- y otros haluros. Concentraciones elevadas de cationes coloreados , como el
cobalto (II) , el níquel (II) y el cobre (II) , ocasionan dificultad para observar el punto
final. El ácido nitroso interfiere en la titulación , ya que reacciona con el tiocianato y
produce un color rojo transitorio.
● En la determinación de Cl , según el método de volhard se encuentra una dificultad en
la valoración por retroceso del exceso de plata , cuando ésta se hace en presencia del
precipitado , pues la reacción es . Entonces el
equilibrio se desplaza hacia la derecha en cantidad suficiente para producir un error
apreciable.
8. Diseñe un tabla colocando a la derecha alimento y a la izquierda su cantidad de cloruros
que deben contener.
Artica, L., Baquerizo, C., & Mery, L. (2014). Métodos para el análisis fisicoquímico de la leche y
derivados lácteos.
Cosme, A. L., Guerrero, J. A., & Vélez, J. F. (1997). Evaluación de propiedades fisicoquímicas
de leche concentrada. Información Tecnológica, 8(1), 35-40.
López, A., Barriga, D., Jara, J. y Ruz, J. (2015). Determinación analítica en leche. Consejería de
Agricultura y Pesca. JUNTA DE ANDALUCÍA. Instituto de Investigación y Formación
Agraria y Pesquera. Andalucía, España.
Olguín, M., Revelant, G., Verdini, R. (2019). Guía de Trabajos Prácticos. Bromatología y
Nutrición. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Universidad Nacional de
Rosario. Buenos Aires, Argentina.