EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE LÍPIDOS TERPENICOS CAROTENOS

MANCILLA, C. G. E.; ROSAS, T. M; PÉREZ, S. L. J; CASTREJÓN, C. R. y BLANCO, E. Z.

Q.F.B.; V Semestre: Universidad del Valle de México, Campus Chapultepec

(Av. Constituyentes No. 151 Col. San Miguel Chapultepec. C.P. 11850 México, DF.)

Resumen………………………………………………………………..….1
Introducción……………………………………………………………..…2
I.- Lípidos…………………..……………………………………………….….…2
II.-Separación y análisis de glúcidos………………………………….…….…5
III. Terpenos……..………………..……………………………………………...6
IV. Carotenos……………………………..………………………………………7
Objetivos………….……………………………………….……………..…10
Hipótesis………...……………………………………………….……..…..10
Material………………...……………………………………….………...…11
Metodología…………….………………………………………….……..….11
Resultados………………………..…………………………………………..11
Discusión de Resultados………………………………….………… ……….13
Conclusiones…………………………………………….……………………13
Referencias……………………………………………….……………...…….13

RESUMEN:

En esta práctica se podrá encontrar la definición de los lípidos, su composición, tipos y estructuras, además de
algunos de los métodos más utilizados para analizar y separarlos.

También se podrá encontrar la definición y tipos de terpenos que se encuentran en la naturaleza y que en esta
práctica son objeto de estudio así mismo de los carotenos que son un tipo de tetraterpenos que constituyen tanto la
coloración de las zanahorias (que son los vegetales utilizados para esta práctica) como su fuente nutrimental de
aporte en vitaminas.

Para la extracción y separación de los carotenos de la zanahoria, se utilizaron 10 gramos de zanahoria las cuales se
picaron y se les extrajeron los pigmentos vegetales por medio de alcohol al 95% hasta dejar la zanahoria incolora.
Después para separar los carotenos de las xantofilas se utilizó un embudo de separación en el cual se lavó la
solución y en la fase acuosa quedaron las xantofilas y en la orgánica los carotenos.

Después a los carotenos se les realizó una separación para obtener sus 3 tipos de componentes, es decir los alfa,
beta y gama carotenos.

1
 INTRODUCCIÓN

LÍPIDOS grasas sólidas por hidrogenación catalítica que reduce

algunos de sus dobles enlaces a sencillos. Los
Los lípidos biológicos constituyen un grupo triacilgliceroles que solo contienen ácidos grasos
químicamente diverso de compuestos cuyas saturados son sólidos blancos y grasos a temperatura
características común y definitoria es su insolubilidad ambiente.
en agua. Sus funciones son diversas. [1]
Las ceras biológicas son ésteres de ácidos grasos e
Lípidos de almacenamiento insaturados (14-36 átomos de carbono) con alcoholes
de cadena larga (16-30 átomos de carbono). Sus puntos
Las grasas y aceites [ácidos carboxílicos con cadenas de fusión (60-100ºC) son generalmente más elevados
hidrocarbonadas de 4-36 carbonos (en algunos que los de los triacilgliceroles. Las ceras también
completamente saturada sin dobles enlaces y sin realizan diversas funciones en la naturaleza que están
ramificar y otros con uno o varios dobles enlaces); relacionadas con sus propiedades repelentes del agua y
unos cuantos contienen anillos de 3 carbonos o grupos con su consistencia firme. Tienen diversas aplicaciones
hidroxilo] son derivados de los ácidos grasos y sirven en las industrias farmacéutica y cosmética.[1,3]
de almacenamiento de energía. La oxidación completa
de los ácidos grasos a CO2 y H2O en las células es muy Lípidos estructurales de las membranas
exergónica.
La característica arquitectónica central de las
Las propiedades físicas de los ácidos grasos y de los membranas biológicas es una doble capa lipídica que
compuestos que los contienen vienen determinadas en constituye una barrera al paso de moléculas polares e
gran parte por la longitud y grado de insaturación de la iones. Los lípidos de las membranas son antipáticos; la
cadena hidrocarbonada. La cadena hidrocarbonada orientación de sus regiones hidrofóbicas e hidrofílicas
apolar explica la poca solubilidad de ácidos grasos en dirige su empaquetamiento hacia la formación de
agua. Cuanto más larga sea la cadena acíclica grasa y el bicapas membranosas. Tipos generales de lípidos de las
menor número de dobles enlaces, menor es la membranas:
solubilidad del agua. El grupo ácido carboxílico es
polar (y ioniza a pH neutro) y justifica la ligera ℘ Glicerofosfolípidos: Regiones hidrofóbicas
solubilidad en agua de los ácidos grasos de cadena compuestas por 2 ácidos grasos unidos al glicerol.
corta. [1, 2]
℘ Esfingolípidos: Se une un solo ácido graso a una
Los lípidos más sencillos obtenidos a partir de los amina grasa, la esfingosina.
ácidos grasos son los triacilgliceroles (triglicéridos, ℘ Esteroles: Sistema rígido de 4 anillos hidrocarbonados
grasas o grasas neutras) compuestos de 3 ácidos grasos fusionados.
en enlace éster con un solo glicerol.
Los glicerofosfolípidos, esfingolípidos y esteroles son
℘ Triacilgliceroles simples: Mismo tipo de ácido graso virtualmente insolubles en agua ya que cunado se
en las 3 posiciones y se denominan según el ácido mezclan con ella, estos compuestos antipáticos forman
graso que contienen. Ej. Triestearina 16:0 y trioleína agregados lipídicos microscópicos en una fase separada
18:1. de su entorno acuoso. Las moléculas lipídicas se
℘ Triacilgliceroles mixtos: 2 o más ácidos grasos agrupan con sus porciones hidrofóbicas en contacto
diferentes. Se especifica el nombre y posición de cada entre sí y sus grupos hidrofílicos interaccionando con el
ácido graso. agua circundante. El agrupamiento de los lípidos
reduce la cantidad de superficie hidrofóbica expuesta al
La mayoría de las grasas naturales como los aceites agua, con lo que se minimiza el número de moléculas
vegetales, productos lácteos y grasas animales son en la capa de agua ordenada en la interfase lípido-agua,
mezclas complejas de triacilgliceroles sencillos y lo que se traduce en un aumento de entropía. Las
mixtos. Estos últimos contienen diversos ácidos grasos interacciones hidrofóbicas entre las moléculas lipídicas
que difieren en la longitud de cadena y grado de proporcionan la fuerza termodinámica motriz para la
saturación. Los aceites vegetales (ej. Oliva) están formación y mantenimiento de estas estructuras.[1,4]]
compuestos mayoritariamente de triacilgliceroles con
ácidos grasos insaturados, por lo que son líquidos a Según sean las condiciones precisas y la naturaleza de
temperatura ambiente; se convierten industrialmente en los lípidos utilizados, se pueden formar 3 tipos de
agregados cuando se mezclan lípidos alinfáticos con el

2
agua. Las micelas son estructuras esféricas
relativamente pequeñas en las que intervienen desde
unas cuantas decenas a unos millares de moléculas
ordenadas de modo que sus regiones hidrofóbicas se
agregan en el interior excluyendo al agua, y los grupos
de cabeza hidrofílicos están en la superficie en contacto
con el agua. La formación de micelas está favorecida
cuando el área de la sección transversal del grupo de
cabeza es mayor que la de las cadenas laterales acilo,
tal como sucede con los ácidos grasos libres,
lisofosfolípidos (a los que les falta un ácido graso) y el
detergente SDS.
Un segundo tipo de agregado lipídico en agua es la
bicapa, en la que se combinan 2 monocapas lipídicas
formando una hoja bidimensional. La formación de
bicapas se da fácilmente cuando las áreas transversales
del grupo cabeza y las cadenas laterales son similares,
tal como sucede con los glicerofosfolípidos y
esfingolípidos. Las porciones hidrofóbicas de cada
monocapa interaccionan excluyendo el agua. Los
grupos de cabeza hidrofílicos interaccionan con las 2
superficies de la bicapa.
El tercer tipo de agregado lipídico se forma cuando una
bicapa lipídica se dobla sobre sí misma formando una
esfera hueca denominada liposoma o vesícula. Al
formar vesículas las hojas de bicapa pierden sus
regiones hidrofóbicas de los extremos, con lo que
consiguen la máxima estabilidad en su ambiente
acuoso. Estas vesículas de bicapa contienen agua, por
lo que se crea un compartimiento acuoso separado.
[1,5]
Lípidos con actividades biológicas específicas
Los lípidos de membrana representan del 5-10% de la
masa seca de muchas células y los de almacenamiento
más del 50% de la masa de un adiposito. Estos lípidos
juegan un papel pasivo en la célula; enzimas oxidativas
actúan sobre los combustibles y las membranas
lipídicas forman barreras impermeables que separan los
compartimientos celulares. Hay otro grupo de lípidos
componentes celulares relativamente minoritarios en
cuanto a masa con actividades biológicas específicas y
esenciales. Entre ellos se encuentran los esteroides,
compuestos que comparten el núcleo esteroide de 4
anillos pero son más polares que el colesterol, y gran
número de isoprenoides que se sintetizan a partir de
precursores de 5 carbonos relacionados con el isopreno.
Dentro de los isoprenoides se encuentran las vitaminas
A, D, E y K (materiales graso esenciales para el
crecimiento normal de los animales y numerosos
pigmentos biológicos). Otros lípidos “activos” son
cofactores esenciales de enzimas, transportadores
electrónicos o señales intracelulares.
Los principales grupos de hormonas esteroides son las
hormonas sexuales masculinas y femeninas y las
hormonas de la corteza suprarrenal, el cortisol y la
aldosterona. Todas estas hormonas contienen un núcleo
esteroide intacto. Se producen en un tejido y se
transportan por el torrente circulatorio a tejidos diana
donde se fijan a receptores proteicos muy específicos
desencadenado cambios en la expresión genética y en
el metabolismo. Dada la elevada afinidad de los
receptores hacia la hormona, son suficientes
concentraciones muy bajas de hormona (hasta 10-9M)
para producir el efecto sobre los tejidos diana.
El fosfatidilinositol y sus derivados fosforilados son
componentes de las membranas plasmáticas de todas
las células eucarióticas. Actúan como depósito de
moléculas mensajeras que se liberan en el interior de la
célula cuando ciertas señales extracelulares
interaccionan con receptores específicos de la
membrana plasmática (Ej. Cuando la vasopresina se
fija a moléculas receptoras de las membranas
plasmáticas renales y de vasos sanguíneos, se activa
una fosfolipasa que rompe el enlace entre el glicerol y
el fosfato en el fosfatidilinositol-4,5-bifosfato liberando
inositol-1,4,5-trifosfato y diacilglicerol.) El inositol-
1,4,5-trifosfato produce la liberación de Ca2+
secuestrando en los compartimientos celulares
limitados por membrana, desencadenando la activación
de diversas enzimas dependientes de Ca2+ y respuestas
hormonales. El diacilglierol se fija a una enzima, la
proteína quinasa C, activándola, lo que conduce a la
transferencia de grupos fosfato del ATP a varias
proteínas citosólicas alterando de este modo sus
actividades enzimáticas.[1, 6]
Los icosanoides son derivados de ácidos grasos con
una diversidad de acciones del tipo hormonal
extremadamente potentes sobre varios tejidos de
vertebrados. Actúan sobre el tejido en el que se
producen. Algunas de sus funciones son que
intervienen en la función reproductiva, inflamación,
fiebre y dolor asociados a lesiones o enfermedades, etc.
Todos los icosanoides provienen del ácido
araquidónico [ácido graso poliinsaturado de
20carbonos, 20:4 (∆5,8,11,14)] del que toman su nombre
general (del griego eikosi, “veinte”). Hay 3 clases de
icosanoides: prostaglandinas, tromboxanos y
leucotrienos. Se producen en distintos tipos celulares
mediante rutas sintéticas diferentes y tienen diferentes
células diana y acciones biológicas.
3
 Todas las prostaglandinas (PG) contienen un anillo de
5 átomos de carbono que originalmente formaba parte
de la cadena de ácido araquidónico. Su nombre
proviene del tejido en el que se identificaron (la
glándula prostática). Originalmente se definieron 2
grupos: PGE, soluble en éter y PGF soluble en tampón
fosfato. Cada uno contiene numerosos subtipos
denominados PGE1, PGE2, etc. Actúan en muchos
tejidos regulando la síntesis de la molécula mensajera
intracelular AMP 3´,5´-cíclico (cAMP). Debido a que
el cAMP media la acción de muchas hormonas, las
prostaglandinas afectan a una amplia gama de
funciones celulares y titulares. Algunas prostaglandinas
estimulan la contracción del músculo liso del útero
durante el parto o la menstruación. Otras afectan al
flujo sanguíneo a órganos específicos, al ciclo sueño-
vigilia y a la capacidad de respuesta de ciertos tejidos a
hormonas como la adrenalina y el glucagón.
Prostaglandinas de un tercer grupo elevan la
temperatura corporal (dando lugar a fiebre) y
produciendo inflamación con el dolor consiguiente.
Los tromboxanos se aislaron por primera vez de las
plaquetas sanguíneas (trombocitos) y tienen un anillo
de 6 átomos que contienen una función éter. Son
producidos por las plaquetas y actúan en la formación
de coágulos sanguíneos y en la reducción del flujo
sanguíneo hacia el sitio de un coagulo.
Los leucotrienos, encontrados por primera vez en los
leucocitos, contienen 3 dobles enlaces conjugados. Son
señales biológicas poderosas (ej. Inducen la
contracción del músculo que recubre las vías aéreas del
pulmón. La sobreproducción de leucotrienos produce
ataques asmáticos. La fuerte contracción de los
músculos lisos del pulmón que tiene lugar en el shock
anafiláctico es parte de la reacción alérgica
potencialmente fatal, en individuos hipersensibles a las
picadas de abeja, penicilina y otros agentes.[1,7]
Las vitaminas son compuestos esenciales para la salud
del hombre y otros vertebrados que no pueden ser
sintetizados por estos animales por lo que deben ser
obtenidos en la dieta. Tipos:
℘ Liposolubles: Solubles en disolventes orgánicos
apolares (Ej. Vitaminas A, D, E y K son isoprenoides
y se sintetizan por condensación de unidades de
isopreno).
℘ Hidrosolubles: Solubles en disolventes acuosos
Vitamina A (Retinol): Pigmento esencial para la
visión. No se presenta en los vegetales, pero muchas
plantas contienen carotenoides, pigmentos que
absorben la luz y se pueden convertir enzimáticamente
en vitamina A (por rotura del β-caroteno) por la
mayoría de los animales. La deficiencia de vitamina A
produce piel reseca, xeroftalmia, membranas mucosas
secas, desarrollo y crecimiento retardados, esterilidad
en animales machos y ceguera nocturna.
Vitamina D: Derivado del colesterol y precursor de
una hormona esencial en el metabolismo de calcio y
fosfato en vertebrados. La vitamina D3 (colecalciferol),
se forma en piel mediante una reacción fotoquímica
accionada por el componente ultravioleta de la luz
solar. Abunda en aceites de hígado de pescado y se
añade a la leche comercial como suplemento nutritivo.
Por si misma no es biológicamente activa pero es
precursor del 1,25-dihidroxicolecalciferol. Su
deficiencia conduce a la formación defectuosa de
huesos (raquitismo).
Vitamina E (tocoferoles): Contienen un anillo
aromático sustituido y una cadena lateral
hidrocarbonada larga. Se encuentran en los huevos de
gallina, aceites vegetales y germen de trigo. Su
deficiencia produce piel escamosa, debilidad muscular
y esterilidad. Los tocoferoles pueden experimentar
reacciones de óxido-reducción del anillo aromático.
Previenen la destrucción oxidativa de lípidos de las
membranas celulares al reaccionar con las formas más
reactivas del oxígeno destruyéndolas y protegiendo a
los ácidos grasos insaturados de la oxidación.
Vitamina K: Cofactor lipídico necesario para la
coagulación normal de la sangre. La vitamina K1
(filoquinona) se encuentra en las hojas de las plantas
verdes mientras que la K2 (menaquinona) es
sintetizada por las bacterias que residen en el intestino
de los animales. La vitamina actúa en la formación de
protombina, que es una proteína en el plasma
sanguíneo esencial para la formación del coagulo de
sangre. La protombina es una enzima proteolítica que
rompe enlaces peptídicos específicos de la proteína
sanguínea fibrinógeno, convirtiéndola en fibrina, la
proteína fibrosa insoluble que mantiene unidos los
coágulos de sangre. La deficiencia en vitamina K da
lugar a una coagulación de la sangre más lenta que
puede ser fatal a un animal herido.
La warfarina es un análogo sintético de la vitamina K
que actúa como inhibidor competitivo de la formación
de protombina. Funciona como anticoagulante.
La uboquinona y plastoquinona (derivados
isoprenoides) funcionan como transportadores de
electrones en la producción de ATP en la mitocondria y
en los cloroplastos. En la mayoría de los tejidos de
mamíferos, la uboquinona (coenzima Q) tiene 10
4
unidades de isopreno. La plastoquinona es equivalente
en plantas a la uboquinona. Su papel como
transportadores de electrones pueden aceptar bien uno
o 2 electrones así como 1 o 2 protones reduciéndose a
la forma hidroquinona.
Durante la formación de los glúcidos complejos de las
paredes celulares bacterianas así como la adición de
unidades polisacáridas a las glucoproteínas en
eucariotas, las unidades glucídicas que se han de
adicionar están activadas químicamente mediante la
unión a los dolicoles, pertenecientes al grupo de
isoproenoides. Los dolicoles de animales tienen entre
17-21 unidades isopreno (85-105 átomos de carbono),
los dolicoles bacterianos tienen 11 unidades y plantas y
hongos tienen entre 14-24 unidades isopreno. Estos
compuestos altamente hidrofóbicos tienen
interacciones hidrofóbicas fuertes con los lípidos de
membrana, anclando los glúcidos unidos a la
membrana, donde participam en reacciones de
transferencia de glúcidos.[1,8]
SEPARACIÓN Y ANÁLISIS DE GLÚCIDOS
Debido a que los lípidos son insolubles en agua, su
extracción de los tejidos y posterior fraccionamiento
requieren la utilización de disolventes orgánicos y
algunas técnicas poco usadas en la purificación de
moléculas hidrosolubles como las proteínas y glúcidos.
En general las mezclas complejas de lípidos se separan
por diferencia en su polaridad o solubilidad en
disolventes apolares. Los lípidos que contienen ácidos
grasos en enlace éster o amida se pueden hidrolizar
(saponificar) tratándolos con ácido o álcali para
analizar sus componentes.
Los lípidos neutros (triacilgliceroles, ceras, pigmentos,
etc.) se extraen fácilmente de los tejidos con éter
etílico, cloroformo, benceno, disolventes en los que no
se produce la agregación de lípidos promovida por las
interacciones hidrofóbicas. Los lípidos de membrana se
extraen mejor con disolventes orgánicos más polares
como etanol o metanol, que reducen las interacciones
hidrofóbicas entre las moléculas de lípidos pero que
también debilitan los puentes de hidrógeno y las
interacciones hidrostáticas que unen los lípidos de
membrana a las proteínas de membrana. Una solución
extractiva muy utilizada es una mezcla de cloroformo,
metanol y agua, inicialmente en proporciones
inmiscibles produciendo una sola fase (1:2:0,8, v/v/v).
Después de homogenizar el tejido en este disolvente
para extraer todos los lípidos, se añade más agua al
extracto resultante que se separa en 2 fases,
metanol/agua (fase superior) y cloroformo (fase
inferior). Los lípidos permanecen en el cloroformo y
las moléculas más polares (proteínas, glúcidos) se
sitúan en la fase polar de metanol/agua.
La mezcla compleja de lípidos tisulares aún se puede
fraccionar más mediante procedimientos
cromatográficos basados en la diferente polaridad de
cada clase de lípido. En la cromatografía de adsorción
se empaqueta un material polar insoluble, como el gel
de sílice (una forma de ácido silícico, Si(OH)4) en la
columna de vidrio delgada y larga aplicándose la
mezcla de lípidos (en solución clorofórmica) en la parte
superior de la columna. Los lípidos polares se fijan
fuertemente al ácido silícico polar mientras que los
neutros pasan directamente a través de la columna y
emergen en el primer lavado con cloroformo. A
continuación se eluyen los lípidos polares, en orden de
polaridad creciente, lavando la columna con
disolventes de polaridad progresivamente más elevada.
Los lípidos polares sin carga (ej. Cerebrosidos) se
eluyen con acetona y los lípidos muy polares o
cargados (ej. Glicerofosfolípidos) se eluyen con
metanol.
La cromatografía en capa fina sobre ácido silícico
utiliza el mismo principio. Se distribuye una fina capa
de gel de sílice sobre una placa de vidrio a la que se
adhiere. Se aplica una pequeña muestra de lípidos
disueltos en cloroformo cerca del borde de la placa, la
cual se sumerge en un recipiente poco profundo con
disolvente orgánico contenido dentro de una cámara
cerrada saturada con vapor del disolvente. A medida
que el disolvente asciende sobre la placa por acción de
la capilaridad, arrastra consigo los lípidos. Después de
su separación se pueden detectar los lípidos
pulverizando la placa con un colorante (rodamina) que
presenta fluorescencia cuando se asocia con los lípidos,
o bien exponiendo la placa a los vapores de yodo. El
yodo reacciona con los dobles enlaces de los ácidos
grasos confiriendo a los lípidos que los contenga un
color amarillo o marrón. Para el análisis posterior se
pueden rascar de la placa las regiones que contienen los
lípidos separados recuperándolos por extracción con un
disolvente orgánico.
La cromatografía gas-líquido separa los componentes
volátiles de una muestra según sus tendencias relativas
a disolverse en el material inerte empaquetado en la
columna cromatográfica y a volatilizarse
desplazándose a través d la columna arrastrados por
una corriente de un gas inerte como el helio. Algunos
lípidos son de naturaleza volátil pero la mayoría han de
modificarse previamente para aumentar su volatilidad
(disminuyendo su punto de ebullición). Para el análisis
de los ácidos grasos presentes en una muestra de
fosfolípidos, se calientan primeramente los lípidos en
5
una mezcla metanol/HCl o metanol/NaOH, que
convierte los ácidos grasos que eterificaban al glicerol
en su ésteres metílicos (tranesterificación). Se cargan a
continuación estos ésteres metílicos de los acilos grasos
en una columna de cromatografía gas-líquido y se
calienta para volatilizar los compuestos. Aquellos
ésteres de acilo graso mayoritariamente solubles en el
material de la columna se disuelven en el; los menos
solubles son arrastrados por la columna de helio y
emergen en primer lugar de la columna. El orden de
elución depende de la naturaleza del adsorbente sólido
de la columna. El orden de elución depende de la
naturaleza del adsorbente sólido de la columna y del
punto de ebullición de los componentes de la mezcla
lipídica. Con la utilización de estas técnicas se pueden
separar completamente mezclas de ácidos grasos con
diferentes longitudes de cadena y diversos grados de
insaturación.
Ciertas clases de lípidos son susceptibles de
degradación en condiciones específicas. Por ejemplo,
todos los ácidos grasos unidos por enlace éster en
triacilgliceroles, fosfolípidos y ésteres esteriolo se
liberan mediante tratamiento ácido o alcalino suave
mientras que un tratamiento algo más fuerte libera los
ácidos grasos unidos por un enlace amida de los
esfingolípidos. Las enzimas que hidrolizan
específicamente ciertos lípidos también son útiles en la
determinación de la estructura lipídica. Las fosfolipasas
A, C y D hidrolizan enlaces específicos en los
fosfolípidos dando productos de solubilidad y
comportamiento cromatográfico característicos. La
fosfolipasa C, por ejemplo, libera un fosforil alcohol
hidrosoluble (fosfocolina en la fosfatidilcolina) y un
diacilglicerol soluble en cloroformo, cada uno de los
cuales puede caracterizarse separadamente para
determinar la estructura del lípido intacto. La
combinación de hidrólisis específica por
caracterización de los productos por cromatografía en
capa fina o cromatografía gas-líquido permite a
menudo la determinación de estructura de un lípido.
Para establecer sin ambigüedades la longitud de 1
cadena hidrocarbonada, o la posición de los dobles
enlaces, es de gran valor el análisis por espectrometría
de masas de los lípidos o sus derivados volátiles.[1,9]
TERPENOS
Se denominan así a cada uno de los hidrocarburos
saturados o insaturados que se consideran constituidos
formalmente por unidades sucesivas de isopreno
(C5H8), y que se hallan muy difundidos en los reinos
animal y vegetal, sobre todo en forma de derivados
oxigenados (alcoholes, aldehídos, cetonas, ácidos
carboxílicos y ésteres), denominados también
terpenoides. Las unidades pueden arreglarse
linealmente (como en el escualeno) o cíclicamente
(como en la limonina). Dentro de los terpenos se
clasifica a los carotenoides que son tetraterpenos muy
importantes en los mamíferos, especialmente el β-
caroteno que es precursor de la vitamina A (11-cis-
retinal). También las vitaminas liposolubles D
(colecalciferol) y K son consideradas como terpenos.
Los terpenos de bajo peso molecular se encuentran
sobre todo como componentes de los aceites esenciales,
los que se obtienen de las flores, hojas o frutos,
mediante destilación con vapor de agua; mientras que
los de peso molecular medio o alto, constituyen el
esqueleto de los esteroides, los carotenoides y el
caucho. [10]
Tomando como unidad terpeno la de diez átomos de
carbono, se ha desarrollado la siguiente clasificación:
 Monoterpenos: formados por dos unidades de
isopreno (diez átomos de carbono). Por ej. el
geraniol, el limoneno, el mentol y el alcanfor.
 Sesquiterpenos: formados por tres unidades de
isopreno (quince átomos de carbono). Por ej. el
guayacol y el farnesol.
Diterpenos: formados por cuatro unidades de
isopreno (veinte átomos de carbono). Por ej. el
fitol. Un diterpeno conocido es la vitamina A1
(C20H30O), contenida en la leche y en el aceite de
hígado de bacalao.
Triterpenos: formados por seis unidades de
isopreno (treinta átomos de carbono). Por ej. el
escualeno y los esteroides.
 Tetraterpenos: formados por ocho unidades de
isopreno (cuarenta átomos de carbono). Por ej. los
carotenoides y el licopeno. En este grupo son
abundantes las xantofilas y carotenos, pigmentos
vegetales amarillo y anaranjado respectivamente.
Dan color a los frutos, raíces (zanahoria) flores etc.
En la fotosíntesis desempeñan un papel clave
absorbiendo energía luminosa de longitudes de
onda distinta a las que capta la clorofila. El
caroteno es precursor de la vitamina A.
 El ß-caroteno (C40H56O) tiene una estructura
similar a la de la vitamina A1; este tetraterpeno es
un sólido rojo, que se puede obtener a partir de las
zanahorias y se emplea como colorante en la
industria alimentaria .
 Politerpenos: formados por más de ocho unidades
de isopreno (más de cuarenta átomos de carbono).
Por ej. el caucho y la gutapercha. [11]
6
 CAROTENOS
Los carotenoides son los responsables de la gran
mayoría de los colores amarillos, anaranjados o rojos
presentes en los alimentos vegetales, y también de los
colores anaranjados de varios alimentos animales.
Desde el punto de vista químico, pertenecen a la
familia de los terpenos, es decir están formados por
unidades de isopreno (ocho unidades, es decir, cuarenta
átomos de carbono), y su biosíntesis se produce a partir
de isopentenil pirofosfato. Esto produce sus rasgos
estructurales más evidentes, la presencia de muchos
dobles enlaces conjugados y de un buen número de
ramificaciones de grupos metilo, situados en posiciones
constantes. Se conocen alrededor de 600 compuestos
de esta familia, que se dividen en dos tipos básicos: los
carotenos, que son hidrocarburos, y las xantofilas, sus
derivados oxigenados. A estos tipos hay que unir los
apocarotenoides, de tamaño menor, formados por
ruptura de los carotenoides típicos.
En los vegetales verdes se encuentran en los
cloroplastos, formando parte del sistema de biosíntesis
a partir de la energía de la luz, pero son mucho más
abundantes, y visibles, coloreando algunas raíces,
frutas y flores. Dada su ubicuidad en el reino vegetal, la
biosíntesis total anual de carotenoides se ha estimado
en unos 100 millones de toneladas. Los animales no
pueden sintetizar sustancias de este tipo, pero si pueden
transformar una en otra, aunque con bastantes
limitaciones.[12]
De los carotenoides conocidos, solamente alrededor del
10% tienen valor como vitamina A. Además del β
caroteno, los más importantes entre ellos son el a
caroteno y la b criptoxantina. La condición
fundamental para que tengan actividad vitamínica es
que tengan cerrado y sin oxidar al menos uno de los
anillos de los extremos de la estructura.
Consecuentemente, varios de los carotenoides más
comunes, como el licopeno, zeaxantina y luteína no
tienen valor como vitamina A, aunque son muy
importantes como pigmentos, y pueden tener también
actividad como antioxidantes. En general, las xantofilas
producen color amarillo, mientras que los carotenoides
son anaranjados o rojizos.
Los carotenoides pueden desempeñar un papel como
antioxidantes en la protección del organismo frente a
los radicales libres, aunque esta cuestión está todavía
en discusión. Sí parece claro que la presencia en la
dieta de alimentos con contenidos elevados de
carotenoides tiene efectos preventivos frente a ciertas
enfermedades, aunque los experimentos en los que se
han utilizado suplementos han dado resultados
contradictorios, en algunos casos incluso evidenciando
efectos perjudiciales.
La presencia de gran número de dobles enlaces hace a a
los carotenoides muy sensibles a la oxidación,
especialmente en reacciones de fotooxidación con el
oxígeno singlete. También se oxidan en presencia de
lipoxigenasas, pero no de forma directa, sino por
reacción con los hidroperóxidos. Las reacciones de
7
oxidación dan lugar en todos los casos a la perdida de
color. Generalmente, existe una gran dependencia entre
la velocidad de oxidación y el ambiente en el que se
encuentran. Dentro de los alimentos, los carotenoides
son mucho más resistentes a la oxidación que en
materiales pulverizados y secos, o en extractos.
También pueden alterarse por isomerización. Salvo
excepciones, como en algunas algas, los carotenoides
naturales se encuentran siempre con todos los dobles
enlaces en forma trans. Aunque en principio la
configuración trans de los dobles sería la más estable,
las repulsiones que inducen los grupos metilos laterales
hacen que algunos de los dobles enlaces puedan pasar a
la configuración cis. Esta isomerización puede
producirse por calentamiento, exposición a la luz o de
forma espontánea en ciertos disolventes o en presencia
de superficies activas.[13]
β-caroteno
El β-caroteno fue el primer carotenoide purificado. En
1831, Wackenroder lo aisló en forma cristalina a partir
de la zanahoria, dándole el nombre que lleva, derivado
de la denominación latina de este vegetal (Daucus
carota).
Aunque su valor vitamínico es solamente de alrededor
de un sexto del valor del retinol (la “vitamina A” en su
forma metabólicamente activa), su abundancia en los
vegetales y también en algunos alimentos animales,
como la leche, hace de él una fuente fundamental de
vitamina A para muchísimas personas. Incluso en
dietas relativamente pobres en productos vegetales,
como es la estadounidense, los carotenoides
representan alrededor del 30% de la ingesta total de
vitamina A. Son ricas en b caroteno la zanahoria, que
contiene entre 70 y 140 mg/kg, los vegetales verdes
como la espinaca y algunas frutas. En los vegetales
verdes el b caroteno se encuentra en los cloroplastos,
junto con xantofilas, y suele ser el carotenoide
mayoritario. En las frutas, en cambio, el carotenoide
mayoritario depende de la especie. El β-caroteno lo es
en el mango y en el caki.
El β-caroteno se emplea mucho como colorante
alimentario. Al ser insoluble en agua, no es fácil de
utilizar, por ejemplo para colorear bebidas refrescantes,
una de sus principales aplicaciones. En este caso, se
utiliza en forma de polvo extremadamente fino, en
partículas de alrededor de 0.4 micras de diámetro, que
se puede dispersar en el agua, con la ayuda de un
polisacárido como la goma arábiga. Se obtiene
actualmente por síntesis química, o bien por cultivo de
Dunaliella salina, un alga microscópica que prolifera
en aguas con concentraciones muy elevadas de sal.
El β caroteno, como todos los carotenoides, puede
sufrir isomerizaciones en condiciones de procesado
drásticas, como en el caso del enlatado. Dependiendo
del producto y de las condiciones concretas, puede
llegar a isomerizarse entre el 30% y el 40% del todo-
trans β caroteno presente, fórmándose sobre todo los
isómeros 9-cis y 13-cis.
La isomerización reduce el valor como vitamina A del
β-caroteno. La forma 13-cis tiene aproximadamente la
mitad de valor como vitamina A que a forma todo
trans, mientras que la forma 9-cis tiene un valor
vitamínico del orden del 40% de la todo trans. Sin
embargo, esta pérdida se ve compensada en general
muy sobradamente por la mucha mayor
biodisponibilidad del β-caroteno, al desnaturalizarse en
este proceso las proteínas a las que se encuentra unido
en muchos alimentos, especialmente en los vegetales.
[14]
El alfa caroteno es 38% más potente como
antioxidante que el beta caroteno y 10 veces más
efectivo inhibiendo el cáncer de hígado, piel y pulmón
(siendo potenciado este efecto cuando se consume
combinado junto con vitamina E y selenio). Pero
presenta menos actividad provitamínica a su vez. Lo
encontramos en la zanahoria y la calabaza.
El gamma caroteno posee actividad de vitamina A,
aunque inferior a la de los carotenos alfa y beta. Los
estudios preliminares demuestran una actividad
antioxidante del gamma caroteno, aunque menor que
los demás carotenos. Se obtiene de las algas.[15]
Licopeno
8

El licopeno es el carotenoide más abundante en el
tomate. Aunque el contenido depende mucho del grado
de maduración (aumenta con ella), exposición a la luz
(también aumenta), tipo de suelo, y de la variedad,
puede considerarse representativa la cifra de 40 mg de
licopeno por cada 100 gramos.
Una diferencia fundamental entre la estructura del
licopeno y la del β-caroteno es que los anillos de los
extremos se encuentran abiertos. De hecho, el licopeno
es el precursor biosintético del β-caroteno en el tomate.
El licopeno no tiene actividad como vitamina A, pero
es un antioxidante muy eficiente frente al oxigeno
singlete, el que más de todos los carotenoides comunes.
Cantaxantina
La cantaxantina se encuentra en la seta Cantharellus
cinnabarinus , de donde se extrajo por primera vez, y
de cuyo nombre latino procede el del carotenoide.
También aparece la cantaxantina, generalmente
asociada a otros carotenoides, como pigmento en los
crustáceos y en la carne de salmón.
La cantaxantina se utiliza extensamente como aditivo
en los piensos destinados a los salmónidos, para dar
color a su carne, y en el destinado a las gallinas y
pollos, para dar color a la yema del huevo, a la piel y
carne. El color se obtiene por depósito directo o por
transformación de la cantaxantina en otros
carotenoides.
La cantaxantina se utiliza como “bronceador químico”,
dado que se deposita en la piel y permine obtener un
tono dorado sin necesidad de sol. Ahora bien, las dosis
elevadas utilizadas (algunos fabricantes recomiendan
más de 100 miligramos al día, y algunas consumidoras
tomaban incluso más). Dado que en su utilización
como bronceador aparecieron en los usuarios
problemas de salud asociados con la deposición del
pigmento en la retina, su utilización está limitada, tanto
en alimentos para uso humano como en piensos con
efecto “colorante”. La ADI para humanos fijada
actualmente es de 0,03 mg/kg de peso. En Internet se
venden actualmente “suplementos bronceadores” con
dosis que cantaxantina superan con mucho el límite de
seguridad, y que pueden resultar peligrosos.
Astaxantina
La astaxantina es el carotenoide más común en los
animales. Es el principal pigmento responsable del
color rosa de la carne del salmón o de la trucha, y
también de las huevas de algunos peces. El músculo
del salmón del Atlántico contiene entre 4 y 10 mg de
astaxantina por kilogramo, mientras que el salmón del
pacífico, más intensamente coloreado, contienen entre
14 y 40 mg/ kg. Junto con la astaxantina se encuentran
cantidades menores de cantaxantina y de astaceno.
Como los demás animales, estos peces no pueden
sintetizar los carotenoides “de novo”, por lo que
dependen de los contenidos en la dieta, que si pueden
transformar unos en otros, con ciertas limitaciones.
Esto es importante en acuacultura, ya que si se quiere
obtener el color habitual en los animales salvajes,
deben incluirse carotenoides precursores en los
piensos.
La astaxantina es también la causa del color rojo de la
mayoría de los crustáceos. En los crustáceos muchas
veces el color de la cantaxantina está enmascarado,
dado que se encuentra unida muy fuertemente a
proteínas, hasta el extremo de que esta unión modifica
sus propiedades ópticas. En el caso del bogavante, por
ejemplo, la cantaxantina está formando parte de un
complejo multimérico llamado crustacianina, que es de
color azulado. La desnaturalización de la proteína, por
calentamiento, hace que aparezca el color del
carotenoide sin modificaciones en su espectro.
Beta-criptoxantina
La β-criptoxantina es el carotenoide predominante en
las naranjas. También se encuentra presente en otras
frutas de color amarillo o anaranjado, como la papaya o
el melocotón, en el boniato y, acompañando a la
zeaxantina, en algunas variedades de maíz.
Capsantina
La capsantina es el principal carotenoide del pimiento
común (Capsicum annuum), en el que representa hasta
el 60% del total de los carotenoides presentes. Tambiés
es el más abundante en otras especies del mismo
género y, naturalmente también en el pimentón,
utilizado extensamente en España (y en Hungría, con el
nombre de paprika) como especia, por su color y
aroma.
La capsantina es un carotenoide bastante raro,
entendiendo como tal en primer lugar que
prácticamente no se encuentra en otros vegetales.
Además su estructura tiene la particularidad de que el
anillo de uno de sus extremos es solamente de cinco
eslabones Su biosíntesis se produce a partir de la
zeaxantina, que se transforma en anteraxantina (un
epóxido), y después en capsantina.
En el pimiento y en sus extractos (polvo, oleorresina)
9
aparecen otros muchos carotenoides, del orden de 50,
una buena parte de los cuales no se conoce con detalle.
El segundo más importante es la capsorrubina. Tanto
ésta como la capsantina están mayoritariamente en
forma esterificada. También contiene cantidades
significativas de β-caroteno
Zeaxantina
La zeaxantina se encuentra bastante distribuida entre
los vegetales, acompañando a otros carotenoides. Es el
carotenoide típico del maíz, y de ahí procede su
nombre. También se encuentra en muchas bacterias.
Luteína
La luteína se encuentra en muchos vegetales, como las
judías verdes, las espinacas o el broculi, aunque su
color está enmascarado por el de la clorofila. Junto con
la zeaxantina, es el carotenoide responsable del color
de la yema de huevo. Se utiliza precisamente para
añadirla al pienso de pollos y gallinas, para colorear la
piel, carne y huevos.
La luteína tienen dos grupos hidroxilo, pero en los
alimentos (como los indicados anteriormente) se
encuentra generalmente en forma no esterificada. En
los pétalos de algunas flores, como el llamado
“clavelón de la India”, Tagetes erecta (oriundo de
Méjico, a pesar del nombre), en los que es muy
abundante, se encuentra como mono o di ésteres de los
ácidos palmítico o mirístico. Esta flor es interesante
porque precisamente de ella se extrae gran parte de la
luteína comercializada (generalmente como
oleorresina) como suplemento para piensos, y también
la utilizada en el mercado de los mal llamados
“suplementos dietéticos” para humanos.
Aunque no tienen actividad como vitamina A, la
luteína y la zeaxantina se encuentran presentes en la
retina humana, donde absorben la luz de la zona azul
del espectro. Aunque se ha indicado que podrían
proteger de la enfermedad conocida como
degeneración macular, y se venden extensamente como OBJETIVOS
“suplementos dietéticos” con este fin, no existe
ninguna prueba de que ese supuesto efecto protector Extraer por medio de disolventes orgánicos los
sea cierto.
Separar los carotenos de las xantofilas que se
Pigmentos del azafrán
Por medio de la técnica de cromatografía separar los 3
Tanto los pigmentos del azafrán como los principales
componentes del aroma y del sabor se forman por la
oxidación biológica de la zeaxantina. A partir de la HIPÓTESIS
zona central con dobles enlaces conjugados se forma la
crocetina. Este tipo de estructuras derivadas se conocen
como “apocarotenoides”. Primeramente se produce una
oxidación a dialdehido, y luego a diácido. Una vez
producida, la crocetina se une de forma sucesiva a
unidades de glucosa, dos en cada extremo (el
disacárido gentobiosa) formando la crocina, que es el
principal pigmento del azafrán. Debido a la presencia
de los grupos de azúcar en los extremos de la cadena,
la crocina es soluble en agua.
A partir de los extremos de la estructura de la
zeaxantina se forma primeramente el hidroxi-β-
ciclocitral. Esta sustancia se une por una reacción
enzimática a una unidad de glucosa, mediante un
enlace glicosídico, dando lugar a la picrocrocina. La
picrocrocina es la responsable del sabor ligeramente
amargo del azafrán. A partir de la picrocrocina se
forma, durante el secado de la especia, el safranal, uno
de los componentes fundamentales del aroma del
azafrán.
Pigmentos de la bija
La bija o achiote Bixa orellana, es un árbol de tamaño
pequeño que crece en Sudamérica, De la pulpa que
envuelve sus semillas se extrae un colorante, la bija,
utilizado para colorear alimentos y también en otras
industrias. Las sustancias presentes en este pigmentos
son principalmente dos apocarotenoides, la bixina y la
nor-bixina.
La bixina se encuentra en forma cis, pero se transforma
en la forma trans con los tratamientos térmicos
utilizados habitualmente en la extracción del pigmento,
con aceite caliente. También puede extraerse con
disolventes como al acetona. La nor-bixina tiene una
estructura semejante, pero con los dos grupos ácidos
libres. La nor-bixina es soluble solamente en medio
alcalino, y se utiliza como sal sódica, de modo que al
mezclar el colorante con los alimentos, que tienen pH
ácido, precipita la forma no ionizada. Esto tiene la
ventaja de que el alimento queda coloreado, pero no
“destiñe”.[16]
pigmentos naturales de la zanahoria.
encuentran en las zanahorias.
tipos de carotenos que existen e identificarlos.
10
Si a una zanahoria se le extraen sus pigmentos por medio de lavados, entonces se podrán extraer los
naturales que le dan coloración por medio de carotenos de la zanahoria y después a estos por medio
disolventes orgánicos y después al obtener estos se de cromatografía de adsorción en columna se podrán
realiza una separación de los pigmentos constituyentes separar en sus tres tipos de terpenos.
MATERIAL enfriar a temperatura ambiente (agregar 9 ml de
H2O).
 Bisturí
 Probeta 10, 50ml 4. Agitar la solución en un embudo de separación con
 3 matraces erlenmeyer 250ml 25 ml de éter de petróleo, permitir reposo para que
se separe en 2 capas, la superior de éter que lleva
 1 agitador de vidrio
los carotenos y la inferior las xantofilas.
 1 espátula
 Pinzas de 3 dedos 5. Separar y guardar la capa superior.
 Soporte universal
 Columna para cromatografía 6. Volver la capa inferior al embudo y lavar con 2
 Vidrio de reloj porciones sucesivas de 10 ml c/u de éter de
 Pipeta volumétrica 10ml petróleo.
 3 vasos de precipitados de 150ml
7. Combinar los extractos de éter de petróleo y
 Embudo de separación lavados con 10 ml de alcohol al 85% para quitar
 Pipeta pasteur las xantofilas.
 Vial ámbar
8. Evaporar el éter de petróleo calentando a menos de
REACTIVOS 40° C usando al vacío (manipule con cuidado).

 Etanol 9. Disolver el residuo en 2 ml de éter de petróleo

 Agua destilada antes de pasar a columna.
 Éter de petróleo
B) SEPARACIÓN DE CAROTENOS
 Alúmina
 Acetona  Disolver 20g de alúmina en metanol hasta cubrirla
 Introducirla en la columna para cromatografía
MATERIAL BIOLÓGICO
 Introducir la muestra por medio de una pipeta
pasteur
 10g de zanahoria
 Utilizar como eluyente éter de petróleo – acetona
EQUIPO (95:5)

RESULTADOS
 Parrilla de calentamiento
 Rotavapor A) Extracción y separación de carotenos
METODOLOGÍA

A) EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE
CAROTENOS

1. Picar 10 gramos de zanahoria perfectamente,

extraer los pigmentos con 25 ml de alcohol al 95%,
caliente en un matraz de 250 ml (la muestra debe
quedar incolora).

2. Re extraer con otros 25 ml de alcohol y reunir los

extractos. Zanahorias casi incoloras después de extraer en
alcohol
3. Calentar la solución amarilla y diluir
aproximadamente al 85% de alcohol con H2O,

11
 Evaporación del éter de petróleo en el rotavapor

B) Separación de los carotenos

Extractos de la zanahoria

Preparación de la columna

Separación de carotenos y xantófilas

Tubos con los 3 carotenos extraídos

Capa superior: carotenos

Capa inferior: xantófilas

α-caroteno (4.6ml)

Carotenos

β-caroteno (2.7ml)

12

γ-caroteno (6.4ml)
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
 Se picaron las zanahorias para extraer los
pigmentos en alcohol al 95%; esto debido a que
estos pigmentos son insolubles en agua. Esto se
realizó hasta que las zanahorias quedaron
prácticamente incoloras.
 La solución que se obtuvo fue de un color
amarillo-naranja debido a la presencia de
xantofilas y carotenos que son los pigmentos
naturales de la zanahoria.
 Para separar estos pigmentos se utilizó un embudo
de separación; en la fase orgánica se separaron los
carotenos por medio de lavados y en la acuosa a
las xantofilas que después se desecharon debido a
que el producto de interés eran los carotenos.
 Se evaporo en el rotavapor el éter para obtener los
carotenos y después estos se introdujeron en la
columna de cromatografía por el método de
adsorción.
 Al realizar la separación de los carotenos por el
método de cromatografía en columna, se lograron
obtener los 3 tipos de carotenos que existen: α-
caroteno (4.6ml), β-caroteno (2.7ml) y γ-caroteno
(6.4ml); de cada uno se obtuvieron cantidades
distintas habiendo más del gama caroteno, seguido
del alfa y por último el beta caroteno, que poseía
una coloración más intensa.
CONCLUSIONES
Por medio de esta práctica, logramos extraer de la
zanahoria, los carotenos; estos junto con las xantofilas
son los que le proporcionan el color naranja a las
zanahorias ya que son los pigmentos vegetales que las
constituyen; sin embargo para la finalidad de esta
práctica se separaron las xantofilas de los carotenos
para después por medio de cromatografía separar y
determinar cualitativamente los 3 tipos de carotenos
que existen: α, β y γ. Y como estos se contienen en
diferentes proporciones.
El más conocido de los carotenos es el ß-caroteno
(C40H56O), el cuál es un tetraterpeno (hidrocarburos
saturados o insaturados que se consideran constituidos
formalmente por unidades sucesivas de isopreno
(C5H8)), que se suele utilizar como colorante en la
industria alimenticia.
REFERENCIAS
[1] Lehninger, A. L. Lípidos En Principios de
bioquímica. Barcelona: Ed. Omega, 2ª ed., 1993. 240-
264
[2] Ascon-Bieto. Y Talon. “Fisiología y Bioquímica
vegetal”. Interamericana de MacGraw Hill. 1996.
[3] Bilbao. M. Del R. “Análisis Fitoquímico
preliminar” Universidad del Quindio. Armenia. 1997
[4] Lambert. J.B.; H.F. Shurvert.; D.A. Lightner, R.
Graham. “Organic Structural Spectroscopy”. Prentice
Hall. 1998.
[5] Silverstein R.M. y F.X Webster. “Spectrometric
Identification of Organic Compounds”. Six Edition.
Ed. John Wiley and Sons, N.Y. 1998.
[6] Acherson.R.M. “An Introduction to the Chemistry
of heterocyclic compounds. 3ª Edi. J. Wiley and Sons.
N. Y. 1985.
[7] García, Barriga. “Flora Medicinal de Colombia”.
Ed. Limusa, 1990
[8] Dominguez. X.A. “Métodos de Investigación
Fitoquímica”. Edit. Limusa, Mexico, 1974
[9] Irease G. and Ewvans W. “Tratado de
Farmacología” 12ª. Edición.México.1986
[10] Pasto D.J. y C.R. Jhonson. “Determinación de
Estructuras Orgánicas”. Ed. Reverté, 1974
[11]
http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/pigmentos/ca
rotenoides.html
[12] Robert K. Murray, Daryl K. Granner, Mayes,
Rodwell, "Bioquímica de Harper", Ed. Manual
Moderno, 701-704, 1993.
[13] Maria Luz P. M. de Portela, "Vitaminas y
Minerales en Nutrición", Ed. Lopez, 10;19, 1994
[14] A. Streitwieser, C.H. Heathcock, "Química
Orgánica", Ed. Mac Graw Hill, 1191;1227, 1989.
[15] Garcia Closas R, Serra Majem L, Pastor Ferrer C,
Olmos Castellvell M, Roman B, Ribas Barbay Vinas L
et al. Distribución de la concentración sérica de beta-
caroteno y alfa-tocoferol en una muestra representativa
de la población adulta de Cataluña. Med Clin (Barc)
2002 Mar 2;118(7):256-61. 2003.
[16] MÍNGUEZ, M., J. FERNÁNDEZ y J. PEREDA.
1984. Pimiento pimentonero (Capsicum annuun L.).
13
Relación entre los pigmentos carotenoides rojos y
amarillos. Grasas y Aceites 3 5(1):4- 1 0.

14