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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIA, TECNOLOGA E INGENIERA

DE ALIMENTOS

PROYECTO DE INVESTIGACION

Programa y Lnea de Investigacin:

Obtencin de un colorante natural caroteno a partir de la zanahoria

(Daucus carota) para su aplicacin en alimentos y bebidas, sin que sus

propiedades organolpticas (sabor y olor) afecten su utilidad.

Autor(es):

- Canales Vsquez, Mara Laura.

- Miranda Vargas, Karla Alessandra.

- Portilla Chvez, Luis Fernando.

Institucin de Ejecucin: Laboratorio de Ingeniera de Alimentos de la

Universidad Nacional Agraria de la selva

Tingo Mara - Per

Setiembre- 2016
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I. PROBLEMA

1.1. Planteamiento del problema

Segn (Consumer, 2008) citado por (Hernndez, 2011) El

desconocimiento de especies de arbustos con propiedades tintreas que se

desarrollan en el campo abierto de manera silvestre, conlleva a que tengan un

bajo nivel de procesamiento a nivel industrial y que no se remplacen los

colorantes artificiales por los colorantes naturales, la falta de inters sobre stos

arbustos tintreos hace que no se pueda rescatar especies nativas con

propiedades tintreas, dejando a un lado las bondades medicinales que poseen

estos pigmentos tintreos.

Para (Bateman y col 2004) (Swanson, Kinsbourne 1980) citado por

(Maurer, 2010) El hombre hace uso de los colorantes sintticos en la

elaboracin de alimentos sin medir los efectos alrgicos y cancergenos que

stos provocan. La utilizacin excesiva de colorantes en el procesamiento de

alimentos causa alergias, dao en el DNA, posible inicio de cnceres y en

combinacin con algunos conservantes como el benzoato de sodio, generan

trastornos del comportamiento en nios.

Segn (Huaman, 2013) un considerable inters mundial en el desarrollo

de colorantes naturales ha surgido actualmente, su elevado costo de

procesamiento lleva a que se margine estas especies, la creciente demanda y

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necesidad de expansin de variedades de colorantes, implica que estos

productos naturales incrementan su calidad en los sistemas de extraccin as

mismo se asegurara la calidad de vida de sus consumidores.

(Codex Alimentarius Commission, 2004) menciona el uso de betalanas

est autorizado y es comercializado en EEUU y la UE con el nombre de rojo

remolacha. Se consigue como concentrados (producidos por concentracin a l

vaco de jugo de remolacha al 60-65% de slidos totales) o polvos producidos

por liofilizacin o spray-dry con un 0.3 a 1% de pigmento. Es un colorante

relativamente potente, alcanzndose el color deseado con dosis que no

exceden los 50 mg/kg calculado como betanina.

1.2. Justificacin

Segn (Rojas, 2008) citado por (Escobar, 2011) En la actualidad se ha

dado mucha importancia a la produccin de colorantes naturales por ser

compuestos amigables con el ambiente. En cuanto a la produccin industrial,

hemos visto surgir en la ltima dcada, empresas dedicadas al cultivo de plantas

tintreas y extraccin de colorantes orgnicos, cuyos procedimientos son

ejemplares como modelo de sostenibilidad Francia, Espaa, Holanda, Mxico,

Chile, Per, El Salvador y Estados Unidos son algunos de los pases donde ya

se puede obtener colorantes orgnicos rojos, azules y amarillos con etiqueta de

sostenibilidad.

La calidad de vida de las personas que consumen el colorante natural en

este caso a partir de la remolacha impidiendo as provocar enfermedades graves.

Esta investigacin es original ya que al obtener el colorante natural el caroteno y

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aplicndolo en alimentos y bebidas, podramos dar variedad de color a diferentes

alimentos de manera ms nutritiva y apetecible.

El inters mundial por conseguir productos naturales que aporten a

mantener y corregir los defectos alimenticios que han desencadenado

enfermedades cancergenas, hacen que se despliegue una gran cantidad de

recursos dirigidos hacia la bsqueda de nuevas alternativas alimenticias a travs

de la investigacin.

El caroteno al ser un colorante natural puede ser aplicado en

diferentes sectores agroalimentarios, se lo utiliza tambin como pigmentos de

pinturas, en la industria de la cosmetologa. Es un alimento muy adecuado

para los que sufran retencin de lquidos, por lo que debern comerlo

habitualmente los obesos o artrticos o quienes pretendan rebajar peso.

Estimula el cerebro y elimina las toxinas que en l se puedan acumular por lo

que ayuda a mantener una buena salud mental y prevenir el envejecimiento

precoz. Por su riqueza en hidratos de carbono es un alimento muy enrgico,

aunque fcilmente asimilable. Debera consumirse en combinacin con otras

verduras y no con otros alimentos muy calricos o ricos en hidratos para evitar

una excesiva acumulacin de los mismos.

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II. MARCO TEORICO

2.1. Antecedentes

Las fuentes de informacin referente al tema de obtencin de colorante

de zanahoria, presentan los siguientes antecedentes:

Moreno y Maldonado, realizan proyectos de la obtencin de colorantes

naturales a partir de distintos vegetales, que en forma gradual comienzan a

valorarse como alternativas ante los productos artificiales, una vez que algunos

artificiales han sido detectado como txicos, y por ende ya estn prohibidos en

diversos pases, lo que abre las puertas a pigmentos de origen vegetal.

Rodrguez, indican que los carotenoides y las xantofilas son un amplio

grupo de pigmentos vegetales y animales, del que forman parte ms de 450

sustancias diferentes, indican que los carotenoides utilizados en la

fabricacin de alimentos se pueden obtener extrayndolos de los vegetales

que los contienen, en el caso del -caroteno por sntesis qumica.

Para Menndez en su investigacin realizada en la Escuela Superior

Politcnica del Litoral Obtencin de Colorante para su uso en Yogurt a partir

de la flor de jamaica (Hibiscus sabdariffa) y del Mortio (Vaccinium myttillus

L.) misma que tuvo como objetivo utilizar como materia prima al mortio y a

la flor de la Jamaica, frutos que poseen antocianinas y que son subutilizados

en nuestro pas, se muestran aspectos generales sobre los colorantes

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antocinicos. Adems se describen los mtodos de extraccin utilizados

tomando como solvente una solucin alcohlica acidificada (etanol cido

ctrico) en diferentes concentraciones. Luego se analiz la posibilidad del uso

del colorante en yogurt.

2.2. Generalidades

2.2.1. Zanahoria (Daucus carota)

La zanahoria es una raiza vegetal, tpicamente anaranjada.

Pertenece a la familia de las Umbeliferas, tambin denominadas Apiceas. Es

la hortaliza ms importante y de mayor consumo de las pertenecientes a dicha

familia. Se reconocen por su abundante contenido en sustancias aromticas y,

por lo general, son las semillas las que contiene los aceites esenciales

responsables de su aroma y sabor. (Moreiras, 2013)

2.2.2. Descripcin botnica

Plantas anuales o bienales cultivadas como anuales, algamas

autocompatibles de hasta 1,6 m de altura, con la raz napiforme o fusiforme

cilndrica, cnica o redondeada, blancuzca, amarillo rojiza o anaranjada, con

los tallos solitarios, cilndricos erectos estriados e hspidos y muy ramificados.

Hojas oblongadas, de 5-15 x 2-7 cm, con los segmentos lineares

a lanceolados y pecolos ensanchados en la base y de 3-10 cm. Foliolos 3-7

pares por segmento ms uno terminal, lineares lanceolados, de 2-12 x 0,5-2

mm con el borde entero o denticulado, el pice agudo mucronado y lampios

a hspidos especialmente en nerviaduras y bordes.

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Flores con pedicelos de 3-10 mm en umbelas con hasta 20

umblulas y con pednculos hspidos y de 25-60 cm. Invlucro de brcteas

folceas, filiformes de 3-30 mm de longitud y reflejas. Involuvelos de bracteolas

lineares, acuminadas y ciliadas. Ptalos blancos, amarillos, rosados o

purpreos y acuminados. Mericarpos oblongo- ovoideos, de 3-4 mm de

longitud y unos 2 mm de dimetro con costillas cubiertas de espnulas y pelos

rgidos.

Semillas ovoideas, de 2-3,5 x 1-2 x 0,8-1 mm, espinosas y de

color amarillo grisceo o pardo grisceo. 2n = 18. Se cultiva por sus races

comestibles y tambin para forrajes. De las races se obtiene un colorante para

alimentos. Las semillas son aromticas y puede obtenerse de ellas un aceite

esencia. (Cabildo, 2012)

2.2.3. Estudio de la especie.

Figura 1. Planta de Zanahoria (Daucus carota)

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Cuadro 1. Clasificacin taxonmica

Clasificacin taxonoma
Reino : Plantae

Clase : Angiospermae

Divisin : Magnoliophyta

Orden : Apiales

Familia : Apiaceae

Gnero : Daucus

Especie : Daucus carota

Fuente: Conabio, 2009

2.2.4. Plantas Tintreas.

Se consideran plantas tintreas, todas aquellas especies que

contienen algunas concentraciones de colorante en diferentes rganos, como
races, tallos, hojas, flores y semillas. (Guerrero, 2011).

Estos colorantes son producidos directamente por la actividad

fisiolgica de las plantas. Se hallan en mayor concentracin en las vacuolas de
las clulas vegetales, donde se asocian con otros elementos como aceites,
resinas, taninos con carcter astringente y otros. (Guerrero, 2011)

2.2.5. Los Colorantes.

Para Sanz, los colorantes son sustancias que al ser aplicados en

un sustrato como: fibra textil, cuero, papel, polmero, alimento, sea este en
disolucin o en dispersin, resalta el color que puede o no ser permanente. El
sustrato debe tener cierta afinidad qumica con el colorante para obtener buenos
resultados al momento de combinarlos.
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2.2.5.1. Caractersticas de un colorantes y un pigmento

Cuadro 2. Caracterstica de colorantes y pigmento

Colorante pigmento
Color Color

Adherencia al sustrato Adherencia de vehculo que lo

(resistencia al lavado y al transporta.

desgaste)

Resistencia a la luz. Resistencia a la luz

Inocuo para el sustrato Resistencia al calor.

Nivelado (uniformidad del color en Inocuo para el sustrato

una superficie amplia).

Fuente. Narvez, 2014

2.2.5.2. Tipos de colorantes

a) Colorantes naturales

Este trmino se aplica a aquellos productos alimenticios de origen

animal, vegetal o incluso mineral los cuales se encuentran de forma natural. Se
consideran tambin colorantes naturales a los obtenidos de materiales biolgicos
como algunos insectos o incluso los que se forman espontneamente al calentar
o someter a tratamiento trmico un alimento. Son considerados en general como
inocuos. (Rodrguez, 2002)

Segn su origen, los colorantes naturales son pigmentos

coloreados obtenidos de materia prima principalmente animal y vegetal, aunque
tambin los hay de tipo mineral. Se pueden clasificar en: flavonoides,
carotenoides, melanoidinas, porfirinas, betalinas, quinoides y otros varios
(curcumina, carbn vegetal, ndigo).
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b) Colorantes artificiales

Segn Mireles, los colorantes artificiales son los obtenidos por

sntesis qumica, el coloreado artificial de los alimentos es una prctica que data

de la antigedad, pero alcanz su apogeo con el desarrollo en el siglo XIX de la

industria de los colorantes orgnicos de sntesis, por lo general son ms

resistentes que los colorantes naturales, presentan tambin problemas en su uso

en muchos casos se decoloran por accin del cido ascrbico.

2.2.6. Beta caroteno

El -caroteno fue el primer carotenoide purificado. En 1831,

Wackenroder lo aisl en forma cristalina a partir de la zanahoria, dndole el

nombre que lleva, derivado de la denominacin latina de este vegetal (Daucus

carota).

Aunque su valor vitamnico es solamente de alrededor de un sexto

del valor del retinol (la vitamina A en su forma metablicamente activa), su

abundancia en los vegetales y tambin en algunos alimentos animales, como la

leche, hace de l una fuente fundamental de vitamina A para muchsimas

personas. Incluso en dietas relativamente pobres en productos vegetales, como

es la estadounidense, los carotenoides representan alrededor del 30% de la

ingesta total de vitamina A. Son ricas en b caroteno la zanahoria, que contiene

entre 70 y 140 mg/kg, los vegetales verdes como la espinaca y algunas frutas.

En los vegetales verdes el b caroteno se encuentra en los cloroplastos, junto

con xantofilas, y suele ser el carotenoide mayoritario. En las frutas, en cambio,

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el carotenoide mayoritario depende de la especie. El -caroteno lo es en el

mango y en el caki. (Pontn, 1993)

El -caroteno se emplea mucho como colorante alimentario. Al ser

insoluble en agua, no es fcil de utilizar, por ejemplo para colorear bebidas

refrescantes, una de sus principales aplicaciones. En este caso, se utiliza en

forma de polvo extremadamente fino, en partculas de alrededor de 0.4 micras

de dimetro, que se puede dispersar en el agua, con la ayuda de un

polisacrido como la goma arbiga. Se obtiene actualmente por sntesis

qumica, o bien por cultivo de Dunaliella salina, un alga microscpica que

prolifera en aguas con concentraciones muy elevadas de sal. El -caroteno,

como todos los carotenoides, puede sufrir isomerizaciones en condiciones de

procesado drsticas, como en el caso del enlatado. Dependiendo del producto

y de las condiciones concretas, puede llegar a isomerizarse entre el 30% y el

40% del todo-trans -caroteno presente, formndose sobre todo los ismeros

9-cis y 13-cis.La isomerizacin reduce el valor como vitamina A del -caroteno.

La forma 13-cis tiene aproximadamente la mitad de valor como vitamina A que

a forma todo trans, mientras que la forma 9-cis tiene un valor vitamnico del

orden del 40% de la todo trans. Sin embargo, esta prdida se ve compensada

en general muy sobradamente por la mucha mayor biodisponibilidad del -

caroteno, al desnaturalizarse en este proceso las protenas a las que se

encuentra unido en muchos alimentos, especialmente en los vegetales. (Von

Ebel et al., 1981)

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2.2.7. Propiedades

El betacaroteno es uno de los nutrientes esenciales que

podemos encontrar en las frutas y verduras, imprescindible tambin para

mantener un buen estado de salud.

E es el pigmento que le da el tpico color anaranjado o amarillo a gran

cantidad de frutas y verduras, tales como la zanahoria, la calabaza, el

damasco o la naranja. Sin embargo, hay que aclarar que este compuesto

tambin est presente en otras verduras de hoja verde o verdes oscuras

como las espinacas o el brcoli. (Castillo, 1999)

Algunas de las propiedades del betacaroteno, y sus

beneficios sobre la salud:

- Es un precursor de la vitamina A (vitamina esencial para mantener en

buen estado nuestra visin y piel, mucosas y huesos), ya que en caso de

ser necesario el organismo puede convertirlo en ella.

- Es un excelente antioxidante, al igual que la vitamina E y la C, ayuda a

evitar el envejecimiento celular ya que reduce el efecto de los radicales

libres sobre el organismo.

- Estimula el sistema inmune fortaleciendo las defensas naturales del

organismo. Favorece la produccin de los glbulos blancos.

2.2.8. Separacin de y anlisis

Debido a que los lpidos son insolubles en agua, su extraccin de

los tejidos y posterior fraccionamiento requieren la utilizacin de disolventes

orgnicos y algunas tcnicas poco usadas en la purificacin de molculas

hidrosolubles como las protenas y glcidos. En general las mezclas complejas

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de lpidos se separan por diferencia en su polaridad o solubilidad en disolventes

apolares. Los lpidos que contienen cidos grasos en enlace ster o amida se

pueden hidrolizar (saponificar) tratndolos con cido o lcali para analizar sus

componentes. (Treybal, 1980).

Los lpidos neutros (triacilgliceroles, ceras, pigmentos,etc.) se

extraen fcilmente de los tejidos con ter etlico, cloroformo, benceno,

disolventes en los que no se produce la agregacin de lpidos promovida por las

interacciones hidrofbicas. Los lpidos de membrana se extraen mejor con

disolventes orgnicos ms polares como etanol o metanol, que reducen las

interacciones hidrofbicas entre las molculas de lpidos pero que tambin

debilitan los puentes de hidrgeno y las interacciones hidrostticas que unen los

lpidos de membrana a las protenas de membrana. Una solucin extractiva muy

utilizada es una mezcla de cloroformo, metanol y agua, inicialmente en

proporciones inmiscibles produciendo una sola fase (1:2:0,8, v/v/v).Despus de

homogenizar el tejido en este disolvente para extraer todos los lpidos, se aade

ms agua al extracto resultante que se separa en 2 fases, metanol/agua (fase

superior) y cloroformo (fase inferior). Los lpidos permanecen en el cloroformo y

las molculas ms polares (protenas, glcidos) se sitan en la fase polar de

metanol/agua. La mezcla compleja de lpidos tisulares an se puede fraccionar

ms mediante procedimientos cromatogrficos basados en la diferente polaridad

dcada clase de lpido. En la cromatografa de adsorcin se empaqueta un

material polar insoluble, como el gel de slice (una forma de cido silcico, Si(OH)

en la columna de vidrio delgada y larga aplicndose la mezcla de lpidos (en

solucin clorofrmica) en la parte superior de la columna. Los lpidos polares se

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fijan fuertemente al cido silcico polar mientras que los neutros pasan

directamente a travs de la columna y emergen en el primer lavado con

cloroformo. A continuacin se eluyen los lpidos polares, en orden de polaridad

creciente, lavando la columna con disolventes de polaridad progresivamente ms

elevada. Los lpidos polares sin carga (ej. Cerebrosidos) se eluyen con acetona

y los lpidos muy polares o cargados (ej. Glicerofosfolpidos) se eluyen con

metanol. (Mosquera, 2010).

La cromatografa en capa fina sobre cido silcico utiliza el mismo

principio. Se distribuye una fina capa de gel de slice sobre una placa de vidrio a

la que se adhiere. Se aplica una pequea muestra de lpidos disueltos en

cloroformo cerca del borde de la placa, la cual se sumerge en un recipiente poco

profundo con disolvente orgnico contenido dentro de una cmara cerrada

saturada con vapor del disolvente. A medida que el disolvente asciende sobre la

placa por accin dela capilaridad, arrastra consigo los lpidos. Despus de su

separacin se pueden detectar los lpidos pulverizando la placa con un colorante

(rodamina) que presenta fluorescencia cuando se asocia con los lpidos, o bien

exponiendo la placa a los vapores de yodo. El yodo reacciona con los dobles

enlaces de los cidos grasos confiriendo a los lpidos que los contenga un color

amarillo o marrn. Para el anlisis posterior se pueden rascar de la placa las

regiones que contienen los lpidos separados recuperndolos por extraccin con

un disolvente orgnico. (Buchi Labortechnik, 1997)

2.2.9. Alimentos y bebidas

En la alimentacin natural, orgnica y macrobitica, puede verse

extraccin de pigmentos de forma artesanal, con fines medicinales

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(prcticamente todos estos pigmentos tienen aplicaciones teraputicas) o

simplemente como colorante natural para alimentacin y bebidas. El ejemplo

ms claro es el uso de un extracto natural de remolacha, con el fin de

conseguir tonos rojos en alimentos (Francis, 1987).

El colorante de la crcuma, especia obtenida del rizoma de la

planta del mismo nombre cultivada en la India. En tecnologa de alimentos se

utiliza, adems del colorante parcialmente purificado, la especia completa y la

oleorresina; en estos casos su efecto es tambin el de aromatizante. La especia

es un componente fundamental del curry, al que confiere su color amarillo

intenso caracterstico. Se utiliza tambin como colorante de mostazas, en

preparados para sopas y caldos y en algunos productos crnicos.

Es tambin un colorante tradicional de derivados lcteos. Se puede utilizar

sin ms lmite que la buena prctica de fabricacin en muchas aplicaciones,

con excepciones como las conservas de pescado, en las que el mximo legal

es 200 mg/kg, las conservas vegetales y el yogur, en las que es 100 mg/kg, y

en el queso fresco, en el que este mximo es slo 27 mg/kg. (FAO/OMS, 1987).

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III. OBJETIVOS

3.1. Objetivo general

Extraer por medio de disolventes orgnicos los pigmentos naturales de la

zanahoria.

3.2. Objetivos especficos

Separar los carotenos de las xantofilas que se encuentran en las zanahorias.

Por medio de la tcnica de cromatografa separar los 3 tipos de carotenos que

existen e identificarlos.
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IV. Hiptesis

H0: Si a una zanahoria se le extraen sus pigmentos naturales que le dan

coloracin por medio de disolventes orgnico al obtener se realiza una

separacin de los pigmentos constituyentes.

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V. MATERIALES

5.1. Lugar de Ejecucin

El presente trabajo de investigacin se llevar a cabo en el

laboratorio de ingeniera de la Facultad de Ingeniera Industrias Alimentarias de

la Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS); ubicada en el distrito de

Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Hunuco; a una altitud

de 660 m.s.n.m a 09 1708 de Latitud Sur, a 75 5952 de Latitud Oeste con

clima tropical hmedo y con una humedad relativa media de 84% y temperatura

media anual de 25C.

5.2. Insumo

Zanahoria

5.3. Materiales

Balanza

Espectrofotmetro

Secador de bandejas

Caja Petri

Probeta 10, 50ml

3 matraces erlenmeyer 250ml

1 agitador de vidrio
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1 esptula

Pinzas de 3 dedos

Soporte universal

Columna para cromatografa

Vidrio de reloj

Pipeta volumtrica 10ml

3 vasos de precipitados de 150ml

Embudo de separacin

Pipeta pasteur

Vial mbar

5.4. Reactivos

Etanol

Agua destilada

ter de petrleo

Almina

Acetona

5.5. Equipo

Parrilla de calentamiento

Rotavapor
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VI. METODOLOGA EXPERIMENTAL

6.1. Extraccin y separacin de carotenos

- Picar 10 gramos de zanahoria perfectamente, extraer los

pigmentos con 25 ml de alcohol al 95%, caliente en un matraz de 250 ml (la

muestra debe quedar incolora).

- Re extraer con otros 25 ml de alcohol y reunir los extractos.

- Calentar la solucin amarilla y diluir aproximadamente al 85% de

alcohol con H2O, enfriar a temperatura ambiente (agregar 9 ml deH2O).

- Agitar la solucin en un embudo de separacin con25 ml de ter

de petrleo, permitir reposo para que se separe en 2 capas, la superior de ter

que lleva los carotenos y la inferior las xantofilas.

- Separar y guardar la capa superior.

- Volver la capa inferior al embudo y lavar con 2 porciones

sucesivas de 10 ml c/u de ter de petrleo.

- Combinar los extractos de ter de petrleo y lavados con 10 ml de

alcohol al 85% para quitar las xantofilas.

- Evaporar el ter de petrleo calentando a menos de40 C usando

al vaco (manipule con cuidado).

 21

- Disolver el residuo en 2 ml de ter de petrleo antes de pasar a

columna.

6.2. Separacin de carotenos

- Disolver 20g de almina en metanol hasta cubrirla

- Introducirla en la columna para cromatografa

- Introducir la muestra por medio de una pipeta pasteur

- Utilizar como eluyente ter de petrleo acetona(95:5)

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VII. ASPESTOS ADMINISTRATIVOS

Actividades/Semana
Octubre Noviembre Diciembre
X X X X X X X X
Revisin bibliogrfica X
Elaboracin y
aprobacin del X
proyecto
Recoleccin de
X
muestras
Pruebas preliminares X
extraccin y
separacin de X X X
carotenos
separacin de
X X X
carotenos y xntofilas
Presentacin del
X
trabajo
Sustentacin del
X X
trabajo
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Leyenda X: una
semana
7.1. Cronograma de actividades

7.2. Presupuesto

N Partida Rubro Costo Costo

Costo total
Total S/. Rubro S/. partida S/.

64.50

1. Bienes
1.1 Materiales de escritorio 28.50

- 1/2 millar de papel Bond A 80g. 4.50

- 2 plumones indelebles 10.00

- 5 folder manila 5.00

- 1 cuaderno registro 5.00

- 2 lapiceros tinta lquida 4.00

1.2 Materiales de proc. de datos 1.00

 24

-1 USB 0.00

- 1 cartuchos de impresin 0.00

- 1 CD-ROM 1.00

1.3 Impresin 10.00

1.4 Materia prima, insumos y reactivos 25.00

1.5 Material de limpieza. 5.00

30.00

2. Servicios
2.1. Pasajes y viticos 10.00

2.2. Tipeo, impresin 10.00

2.3. Electricidad 10.00

Sub. total 94.50

Imprevistos (10%) 9.45

TOTAL S/. 104

 25

VIII. BIBLIOGRAFA

KLINGER, W.; PINZN, A.; PACHN, M.; ROJAS, L.; ARAGN, J.

2002.Estudio delas especies promisorias productoras de colorantes en el

trapecio amaznico. Centro de Investigacin y Desarrollo Cientfico,

Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas. Bogot. 9898.

 26

Maldonado Salvador, 2002. Colorantes Naturales cobran fuerza como

productos sanos. Seminario, Mxico

MARTNEZ Laura, 2009. Teido con colorantes naturales, sobre lana

Buenos Aires- Argentina. Programa de Diseo Material Publicado en Blog

objeto Fieltro

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oductos/documentos/ficha_tecnica_del_cultivo_de_la_acelga.pdf
27
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