Estrategia de Control de las

Pruebas

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 Cepheid Estrategia de Control de la Prueba

• CADA cartucho GeneXpert® es un dispositivo de unidad

compacta de prueba
todos los pasos requeridos para la PCR se llevan a cabo en el cartucho
para minimizar el riesgo de contaminación

– Cepheid diseñó métodos molecular específicos para incluir controles

internos que permiten al sistema detectar fallas en pasos estratégicos

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 Cepheid Estrategia de Control de la Prueba

• Se han diseñado 4 elementos moleculares diferentes

para identificar los errores claves
– Probe Check Control (Control de Verificación de la Sonda)

– Specimen Processing Controls SPC / Endogenous Control ( for Xpert®

BCR/ABL) (Control de Procesamiento de Muestra / Control Endógeno)

– Sample Adequacy Control SAC (for Xpert® CT/NG and Xpert ® HPV)
(Control de Muestra Adecuada)

– Sample Volume Adequacy SVA (for Xpert HIV-VL) (Control de Volumen

Adecuado)

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 Probe Check Control – Control de
Verificación de las Sondas
Qué es?
•Antes de iniciar el paso del termociclador, se realizan múltiples lecturas
a diferentes temperaturas
•Los resultados obtenidos son comparados automáticamente con
parámetros pre-establecidos por el fabricante en el software.

Qué hace?
En la verificación de la sonda se realizan los siguientes pasos:
•Rehidratación de las perlas que contienen los sondas y reactivos
•Se hace un llenado del tubo de reacción de la PCR
•Verifica la integridad de la sonda
•Verifica si hay inestabilidad del fluorocromo o el extintor (quencher)

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 Control de Procesamiento de Muestra (SPC)

Qué es?
• Compuesto por organismos intactos, ADN o ARN
• Sonda de detección: Una sonda marcada con un flourocromo de un color
diferente al de las sondas de detección de la secuencias blanco
• Iniciadores: Can Estos pueden ser igual a la secuencia blanco o puede ser
de otro organismo

Qué hace?
• Se Co-procesa con el organismo blanco durante todo el proceso
• Se Co-amplifica con el ADN blanco
- El SPC evalúa la efectividad de los pasos del procesamiento de muestra
incluyendo los pasos posteriores al llenado del tubo de reacción para la PCR
- Detecta la degradación de enzimas u otros componentes del sistema
- Detecta inhibición de la muestra

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Control Endógeno (EC)

Qué es?

El control endógeno (EC) se toma a partir de la muestra (en la prueba Xpert®

BCR/ABL, es el gen ABL de la sangre)

Qué hace?
Normaliza el blanco y asegura que haya suficiente muestra para realizar la
prueba.
Por su baja variabilidad, este EC también se puede utilizar como indicador de
inhibición debido a un contaminante.

* SÓLO es utilizado por la prueba de Xpert® BCR/ABL

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 Sample Adequacy Control (SAC)

What is it?
•El control de adecuación de la muestra es un objetivo HMBS (gen de la globina
beta)

What does it do?

•El SAC ha sido diseñado para detectar la presencia de una sola copia del gen humano.
•Asegura que la muestra contenga células humanas adecuadamente lisadas para extraer
ácido nucleico.
•Un SAC negativo indica que no hay células humanas presentes en la muestra debido a:
•mezcla insuficiente
•Muestreo inadecuado
•Lisis ineficiente * utilizada en la prueba Xpert® CT / NG

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 Sample Volume Adequacy (SVA)

What is it?
•La adecuación del volumen de muestra es xxxxxx

What does it do?

•La adecuación del volumen de la muestra asegura que la muestra se haya
agregado correctamente al cartucho.
•Verifica que se haya agregado el volumen correcto de muestra de muestra en la
cámara de muestra.
•Un SVA negativo indica un error 2096/2097 debido a:
•volumen insuficiente
•No se utiliza volumen * en Xpert® HIV VL

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 SPC no compite con el ADN blanco

• SPC DEBE ser POS cuando el blanco es NEG

• SPC puede ser POS o NEG cuando el blanco es POS

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 Interpretación de los Resultados

MTB/RIF

Verificación de Sonda
Detener SIN
Prueba RESULT
OK Falla

Blanco Error

Pos No hay valor

Positivo SPC – IC

Pos No hay valor

Negativo No Válido
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