UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

CURSO MICROBIOLOGÍA I

Actividad Presencial Obligatoria VI

MARCHA BACTERIOLÓGICA Y
ANTIBIOGRAMA
 Marcha bacteriológica

“Serie ordenada de pasos que se deben seguir para

identificar correctamente una bacteria responsable
de infección”
Marcha bacteriológica

Los pasos habituales de la marcha bacteriológica son:

 1-Toma de muestra.
 2-Observación directa.
 3-Cultivo.
 4-Pruebas bioquímicas y fisiológicas.
 5-Pruebas inmunológicas.
 6-Pruebas complementarias.
Bioseguridad

Conjunto de medidas preventivas, probadamente eficaces y reconocidas

internacionalmente, orientadas a proteger la salud y la seguridad del
personal y su entorno.

Contempla practicas de manejo dirigidas a reducir la oportunidad que los

agentes infecciosos generen acceso o se dispersen dentro de una unidad de
producción, hospital, región, o país.
Bioseguridad en el laboratorio y en el
campo.

Usar indumentaria adecuada:

 Guantes
 Guardapolvo

 Barbijos
 Antiparras

 Calzado cerrado
 Cabello recogido
Descarte de elementos de riesgo patológico.
Normas para la toma, conservación y
transporte de muestras.(SE.DI.ByA)

 Evitar la contaminación.
 Obtener un volumen suficiente y representativo del proceso infeccioso,
para evitar falsos negativos.
 Antes de iniciar la terapéutica antimicrobiana.
 Recipiente estéril, con tapa a rosca y de boca ancha o en medio de
transporte (Stuart, Cary-Blair etc)
 Tiempo de envió máximo es de 24hs.
 Cada muestra debe estar adecuadamente rotulada.
 Enviar las muestras con el correspondiente protocolo.
 Factores que influyen en el aislamiento del agente
bacteriano causal del proceso infeccioso.

 Localización del proceso infeccioso.

 Técnica y material utilizado para recolectar la muestra.

 Medio de transporte en el cual la muestra es colocada.

 Tiempo transcurrido entre la toma de muestra y su procesamiento en el

laboratorio.

El éxito del diagnóstico bacteriológico

depende principalmente del
veterinario que toma la muestra
 Recolección de muestras y transporte

1* PASO
MUESTRAS

•Áreas normalmente estériles (sangre, orina, lcr, líq. sinovial y

peritoneal)

•Áreas normalmente colonizadas (tracto respiratorio, digestivo,

genital, piel, auditivo)
Materiales utilizados para la recolección de muestras
Finalidad del medio de transporte y función de sus
componentes

 La finalidad de los medios de transporte es mantener

la viabilidad de los microorganismos.

 Ejemplos: el medio de Stuart, Cary-Blair y Amies.

 Estos medios semisólidos tienen un pH regulado y son esencialmente una mezcla de

sustancias tamponadas que carecen de factores de crecimiento. Se les adiciona un
agente reductor como el tioglicolato de sodio para mejorar la recuperación de
bacterias anaerobias
 Sistema de transporte y Temperatura de Temperatura de
tipos de muestras . almacenamiento y/o almacenamiento y/o
envío envío

4°C 25°C

Sin medio de transporte

X
Muestras:
•órganos de necropsia (higado,
pulmón, cerebro, etc.
•lavado bronquial,
•catéter endovenoso, líquido
pericárdico, biopsia de pulmón,
•orina,
• materia fecal.

Sin medio de transporte

Muestras:
X
•LCR, líquido sinovial, líquido pleural,
líquido ascítico.

•Semen, leche de tanque y cuarto

mamario.
 Sistema de transporte y Temperatura de Temperatura de
tipos de muestras almacenamiento y/o envío almacenamiento y/o envío
.
4°C 25°C

Transporte para anaerobios

Muestras
•Líquido abdominal, líquido biliar,
X
• material profundo de heridas,
aspirado sinusal,
•biopsia, tejidos de necropsia.

Hemocultivos
(Muestras inoculadas X
en el medio de cultivo)

Con Medio de transporte

Hisopado de materia fecal, X
biopsia de heridas.

Con Medio de transporte

Hisopado ótico, vaginal, de cuello
uterino, conjuntival, nasofaríngeo.
X
 SE.DI.B y A
SERVICIO DE DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO Y ANTIMICROBIANOS

Protocolo
FACULTAD CIENCIAS VETERINARIAS – UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Propietario: Protocolo Nº:

de envío de
Profesional que remitió las muestras:
Fecha de recepción:
Especie: Raza: Sexo: Edad:

muestras Muestra remitida:

Hora de extracción:
Número de muestras:
Temperatura de conservación:

Estudio solicitado:
□ Urocultivo micción espontánea □ Densidad
□ Urocultivocistocentesis □ Tipificación de gérmenes
□ Urocultivo cateterismo □ Antibiograma
□ pH □ Coprocultivo
□ Sedimento □ Hemocultivos

Motivo de la solicitud:
□ Control rutina □ Control post-tratamiento
□ Posible infección □ Prequirúrgico
□ Infección □ Postquirúrgico
□ Control intratratamiento □ Otros: ¿Cuáles?......................

Infección previa: NO
SI ¿Cuál?...............................................

¿Tiene tratamiento antimicrobiano? NO ¿Desde cuándo?................................................

SI ¿Cuál?...............................................................
¿Otro tratamiento? NO…………………………………………………..
SI ¿Cuál?.............................................................

Patología de Base………………………………………………………………………...
“LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA”
2* PASO

 Fresco

 Campo oscuro y óptico

 Coloración simple: azul de metileno

 Coloración compuesta : Gram y Zhiel Neelsen ( para
bacterias acido alcohol resistentes)
Componentes Coloración de Gram Coloración de Ziehl Neelsen

Colorante primario Violeta de genciana o cristal Fucsina fenicada o de Zhiel

violeta

Mordiente químico Lugol Fenol

Mordiente físico - Calor
Decolorante Alcohol-acetona Acido-alcohol
Colorante secundario Safranina o fucsina diluida Azul de metileno
Bacterias Gram + Bacterias Gram -
 Tipos diferentes de observación directa de una muestra remitida al
laboratorio de bacteriología.

 1. Hisopado vaginal Fresco al microscopio óptico x 40

 2. Hisopado ótico Coloración de Gram al M.O x 100

 3. Aspirado transtraqueal Ziehl Neelsen al M.O. x 100 (BAAR)

 4. Orina Fresco al M. de fondo oscuro x 40 (Leptospira spp.)

 CULTIVO
Curva de crecimiento bacteriano

A: fase de latencia o adaptación

B: fase de crecimiento exponencial
C: fase pre-estacionaria
D: fase estacionaria
E: fase de declinación o muerte
 Común: es un medio en el que crecen la mayoría
de las bacterias no exigentes.
Ej: agar tripteína soya (ATS)

 Enriquecido: es un medio simple con el agregado de sustancias

que aumentan su poder nutritivo (sangre, suero, extracto de levadura,
vitaminas)
Ej agar sangre (AS) o agar chocolate
 Medio Selectivo: es el medio que permite seleccionar ciertos
microorganismos frenando el desarrollo de otros.

Esto se logra con el agregado de sustancias inhibidoras como antibióticos,

ciertos colorantes, azida de sodio, sales biliares, cloruro de sodio al 7,5%, etc.
Ej EMB, agar manitol salado (AMS)
 Diferencial: es el medio que permite diferenciar bioquímicamente a las bacterias
por su actividad metabólica.
Posee un sustrato, sobre el que actúa o no actúa la bacteria y esa actividad se revela
por variación del pH del medio o por alguna actividad enzimática que modifica el
aspecto del medio de cultivo.

Ej: TSI, caldo rojo de fenol

(h. de carbono), EMB,
AMS, TKT.
 Especial: La constitución de este medio presenta sustancias especialesque
cumplen con las exigencias de algunas bacterias por lo que permite que se
desarrollen en forma óptima.
Tipo de muestra Requerimiento Tipo de medio de cultivo
nutricional del agente
etiológico presuntivo

Normalmente No exigente Medio selectivo y diferencial

colonizada

Normalmente Exigente Medio enriquecido y selectivo

colonizada

Normalmente estéril No exigente Medio simple

Normalmente estéril Exigente Medio enriquecido

4* PASO
 Luego de las pruebas bioquímicas y fisiológicas realizadas a
distintos cultivos bacterianos provenientes de diferentes
muestras clínicas, identificamos

género, especie y subespecie.

 Bacteria Género Especie Subespecie
Muestra

Escherichia coli Escherichia coli ------

Hisopado de materia fecal

Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus ------

Hisopado ótico

Salmonella entérica Salmonella enterica arizonae

aizonae
entérica/indica/ diarizonae/

Materia fecal salamae/hountenae

Pasteurella mutocida Pasteurella multocida multocida

gallicida
gallicida/septica
Pulmón
5* PASO

 Se realiza por aglutinación de las bacterias enfrentadas a los anticuerpos

presentes en un suero control

 Ej para determinar serotipos patógenos o con fines epidemiológicos

(Elisa, precipitación y aglutinación) ya que permite determinar la
prevalencia de una serovariedad en distintas zonas geográficas,
y es de utilidad para el estudio de brotes de enfermedades transmitidas
por alimentos (ETAs).
“Serotipificación”

 Es una prueba inmunológica que identifica la

serovariedad de una bacteria, a través de la
identificación de los antígenos somáticos (O) y
flagelares (H) de la misma.

 La combinación de los antígenos somáticos y flagelares

forman una fórmula antigénica que identifica a la
serovariedad según un Esquema de Referencia
Internacional.
 Dos tipos de serotipificación que son necesarios para determinar la serovariedad
de una cepa bacteriana.

Serotipificación somática Serotipificación flagelar

IMAGEN B

IMAGEN A
Estudios complementarios 6* PASO

 PCR ( test de polimerasa en cadena)

Este gen es un factor de virulencia relacionado con el proceso

de invasión al epitelio intestinal.
El gen invA es común en todas las serovariedades invasoras, lo
que significa que se puede asociar con posibles cuadros
virulentos. Se encuentra codificado en el cromosoma
bacteriano lo que le confiere mayor estabilidad, en la isla de
patogenicidad 1 de Salmonella (SPI1)
Estudios complementarios

La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

 es una técnica de amplificación que permite detectar y replicar en forma
selectiva una porción determinada del genoma (ADN cromosómico o
plasmídico), que puede codificar distintos factores de virulencia, por ejemplo,
genes de invasión, de toxinas, de resistencia a los antimicrobianos.

USOS:
 para el diagnóstico de un agente etiológico mediante la detección de un gen
específico que porta ese género bacteriano (por ej. Gen InvA en Salmonella
spp.),
 detección de cepas virulentas mediante la determinación de genes de
virulencia (toxinas, adhesinas, genes de invasión, resistencia antimicrobiana,
etc),
 detección de serovariedades mediante la identificación de los genes que
codifican los antígenos somáticos y flagelares.
Estudios complementarios

La técnica de MALDITOF
La ionización MALDI (desorción/ionización mediante láser asistida por Matriz),
acoplada a un analizador TOF (tiempo de vuelo),
 es una técnica de ionización suave utilizada en espectrometría de masas
que permite el análisis de biomoléculas (biopolímeros como proteínas,
péptidos y azúcares) y moléculas orgánicas grandes (como polímeros,
dendrímeros y otras macromoléculas).

 No todos los géneros bacterianos se pueden diferenciar por MALDI-TOF,

ej.: Escherichia coli/Shigella
 Informe final
 Interpretación
Gracias por su atención…