TÉCNICA ELISA VS WESTERN

BLOT
Karla Jeanette Salgado Cervantes
Seguridad e Higiene
Universidad del Valle de México Campus Coyoacán
28/Febrero/2021
Para detectar el VIH, se realiza una serie de análisis de sangre. El
enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA o EIA) es el primer análisis que pedirá
el médico. La prueba ELISA y la prueba de inmunotransferencia permiten detectar
anticuerpos contra el VIH en el organismo. Los anticuerpos son proteínas que
produce el sistema inmunitario como respuesta ante la presencia de sustancias
extrañas como los virus. Si el resultado de la prueba ELISA da positivo para el VIH,
el médico pedirá una prueba de inmunotransferencia para confirmar si está
infectado con este virus.
Antes de realizar estas pruebas, probablemente deba firmar un formulario de
consentimiento. Deben explicarle en qué consiste la prueba y el procedimiento. El
procedimiento para obtener la muestra de sangre es el mismo para ambas pruebas.
El médico hará lo siguiente:
• Le limpiará la parte interna del brazo con una solución para eliminar bacterias
o gérmenes que pueden causar una infección
• Le colocará un torniquete o una banda elástica alrededor del brazo para que
las venas se llenen de sangre
• Punzará con una aguja una de las venas y extraerá una pequeña muestra de
sangre en un tubo
• Le quitará la aguja y aplicará un apósito
La muestra de sangre se enviará al laboratorio para su análisis. Para la prueba
ELISA, el técnico de laboratorio coloca la muestra en una placa de Petri que
contiene antígeno del VIH. Un antígeno es una sustancia extraña, como un virus,
que provoca la respuesta del sistema inmunitario.
Si la sangre extraída contiene anticuerpos contra el VIH, se unirá al antígeno. Para
verificar esto, el técnico agregará una enzima a la placa de Petri y observará cómo
reaccionan la sangre y el antígeno. Si el contenido de la placa cambia de color,
quizás tenga el VIH.
Resultados
Si el resultado de la prueba ELISA es positivo para el VIH, es posible que esté
infectado con el virus. Sin embargo, a veces se producen resultados positivos falsos.
Esto significa que el resultado indica que tiene el VIH, pero en realidad no es así.
En este caso, es necesario realizar más análisis para confirmar si tiene la
enfermedad. Por ejemplo, si tiene enfermedad de Lyme, sífilis o lupus, la prueba
ELISA puede arrojar un resultado positivo falso para el VIH.
¿Cuándo hacer un ELISA?
• Cuando se cuenta con un número elevado de muestras a analizar
• Cuando se requiere no sólo detectar la presencia de una determinada
proteína, sino también cuantificarla
• Cuando el anticuerpo reconozca un epítopo conformacional
 • Cuando el tiempo es un factor limitante
Western Blot
El Western Blot es una metodología en la cual las distintas proteínas víricas se
separan en función de su peso molecular mediante electroforesis en gel de
poliacrilamida y se transfieren a una membrana de nitrocelulosa sobre la que se
añade e incuba el suero del paciente, la unión antígeno-anticuerpo se detecta
mediante una técnica de ELISA. Si el suero posee anticuerpos frente a una proteína
se produce una banda coloreada que define la reactividad en WB.
En el momento actual esta metodología se ha semiautomatizado lo que facilita su
realización, pero los resultados pueden ser subjetivos, ya que lectura se basa en la
observación de la presencia de bandas coloreadas que corresponden a las distintas
proteínas víricas. Por ello, en cada laboratorio se debe establecer una disciplina de
lectura de reactividades.
¿Cuándo se recomienda hacer un Western Blot?
• Cuando se cuenta con un reducido número de muestras
• Cuando se quiere determinar el peso molecular de la proteína
• Cuando el anticuerpo que se vaya a utilizar sólo reconozca epítopos lineales,
y por lo tanto la proteína deba estar desnaturalizada para que pueda
identificarlos.
• Cuando existen dudas sobre la especificidad del anticuerpo
Diferencias
Western Blot ELISA
Principalmente antígenos presentes en la Anticuerpos o antígenos presentes en la
muestra muestra
Alto consumo de tiempo de ejecución Técnica de ejecución muy rápida
Sólo pueden analizarse un número muy Pueden analizarse multitud de muestras de
limitado de muestras por experimento manera simultánea utilizando placas de 96
pocillos, y el uso de lectores de placas permite
un screening de alto rendimiento
Es un método semicuantitativo Es un método cuantitativo que permite
conocer la cantidad de analito presente en la
muestra de manera precisa
Permite obtener fotografías para presentar los Los resultados son lecturas numéricas y no
resultados pueden presentarse en forma de imagen
Es una técnica relativamente compleja que Técnica más sencilla que puede llevarse a cabo
precisa la estandarización del proceso con éxito incluso con personal menos
completo experimentado
Requiere el uso de varios reactivos químicos Comparativamente, el coste es menor, también
que hacen que el costo resulte elevado debido a la cantidad de muestras que pueden
analizarse en un único experimento
Referencias
• Western Blot o ELISA, ¿cómo elegir? (2020, 5 marzo). Abyntek Biopharma.
https://www.abyntek.com/western-blot-o-elisa-como-
elegir/#:%7E:text=Western%20Blot%3A%20solo%20pueden%20analizarse,
un%20screening%20de%20alto%20rendimiento.
• Western Blot | NHGRI. (s. f.). Genome.gov.
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Western-Blot